《單細(xì)胞測序樣本采集與處理規(guī)范GBT+43776-2024》詳細(xì)解讀

《單細(xì)胞測序樣本采集與處理規(guī)范GB/T43776-2024》詳細(xì)解讀contents目錄1范圍2規(guī)范性引用文件3術(shù)語和定義4縮略語5總體原則和要求6樣本采集contents目錄6.1采集前的準(zhǔn)備7樣本處理7.1處理前的準(zhǔn)備7.2處理8質(zhì)量驗(yàn)證附錄A(資料性)組織細(xì)胞酶解法附錄B(資料性)細(xì)胞群富集方法contents目錄鮒錄C(資料性)臺(tái)盼藍(lán)染色操作流程C.1儀器C.2試劑耗材C.3檢測步驟參考文獻(xiàn)011范圍01021.1適用對象適用于各類生物樣本，包括但不限于人體細(xì)胞、動(dòng)植物細(xì)胞、微生物等。本規(guī)范適用于單細(xì)胞測序樣本的采集、處理、保存和運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)。醫(yī)學(xué)領(lǐng)域用于疾病診斷、治療監(jiān)測、藥物研發(fā)等。生物學(xué)領(lǐng)域用于基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化、物種進(jìn)化等研究。農(nóng)業(yè)領(lǐng)域用于動(dòng)植物品種改良、病蟲害防治等。1.2應(yīng)用領(lǐng)域樣本采集和處理過程中應(yīng)遵循倫理和隱私保護(hù)原則。樣本應(yīng)來自合法來源，并符合相關(guān)法律法規(guī)要求。采集和處理過程中應(yīng)保證樣本的完整性和代表性，避免污染和損傷。1.3限制條件022規(guī)范性引用文件基因組DNA提取和純化方法常用的基因組DNA提取方法包括酚氯仿抽提法、高鹽沉淀法、硅膠柱吸附法等，這些方法的選擇應(yīng)根據(jù)樣本類型、實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行。DNA純化方法包括乙醇沉淀、離心柱純化等，用于去除提取過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)和抑制劑，提高DNA的質(zhì)量和純度。單細(xì)胞分離方法包括顯微操作、流式細(xì)胞術(shù)、微流控技術(shù)等，這些方法可以實(shí)現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞的精確分離和捕獲。細(xì)胞裂解技術(shù)包括化學(xué)裂解、酶裂解、物理裂解等，用于破壞細(xì)胞膜和核膜，釋放細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)。單細(xì)胞分離與裂解技術(shù)包括DNA片段化、末端修復(fù)、加A尾、連接測序接頭等步驟，用于構(gòu)建適用于高通量測序的文庫。測序文庫構(gòu)建包括文庫濃度、片段大小分布、測序接頭連接效率等指標(biāo)的檢測，用于確保文庫的質(zhì)量和測序效果。質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)測序文庫構(gòu)建與質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)包括原始數(shù)據(jù)質(zhì)控、序列比對、變異檢測等步驟，用于將測序數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為可用于生物學(xué)研究的信息。包括基因表達(dá)量分析、基因功能注釋、細(xì)胞亞群鑒定等，用于挖掘單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)中的生物學(xué)意義和潛在應(yīng)用價(jià)值。數(shù)據(jù)處理與分析流程數(shù)據(jù)分析方法數(shù)據(jù)處理流程033術(shù)語和定義單細(xì)胞測序是一種高通量測序技術(shù)，通過對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行基因組、轉(zhuǎn)錄組或表觀組測序，揭示單個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)、變異和調(diào)控等信息。單細(xì)胞測序技術(shù)基于微流控、微滴或微孔等單細(xì)胞分離方法，結(jié)合高通量測序平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)對單個(gè)細(xì)胞的高深度測序。定義技術(shù)原理3.1單細(xì)胞測序定義樣本采集是指從生物體中獲取用于單細(xì)胞測序的單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)的過程，包括組織取樣、細(xì)胞分離和單細(xì)胞捕獲等步驟。采集原則樣本采集應(yīng)遵循無菌、無酶、低損傷和低應(yīng)激等原則，以確保獲取的單細(xì)胞具有代表性和活性。3.2樣本采集3.3樣本處理定義樣本處理是指對采集的單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行預(yù)處理、擴(kuò)增和建庫等步驟，以制備用于高通量測序的文庫。處理流程樣本處理流程包括細(xì)胞裂解、DNA/RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增和純化等步驟，其中每個(gè)步驟都需要嚴(yán)格的操作規(guī)范和質(zhì)量控制。定義質(zhì)量控制是指在單細(xì)胞測序樣本采集、處理和分析過程中，對實(shí)驗(yàn)條件、試劑、儀器和操作流程等進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控和管理，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。質(zhì)控指標(biāo)質(zhì)量控制指標(biāo)包括細(xì)胞活性、捕獲效率、文庫質(zhì)量、測序深度和覆蓋度等，這些指標(biāo)可以有效評估單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)的質(zhì)量和可靠性。3.4質(zhì)量控制044縮略語01020304SCSSingleCellSequencing，單細(xì)胞測序WGAWholeGenomeAmplification，全基因組擴(kuò)增QCQualityControl，質(zhì)量控制NGSNextGenerationSequencing，下一代測序技術(shù)4.1常見縮略語SCS用于表示單細(xì)胞測序技術(shù)，是研究單個(gè)細(xì)胞基因組、轉(zhuǎn)錄組等的重要手段。WGA是單細(xì)胞測序前對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行全基因組擴(kuò)增的方法，以提高測序深度和覆蓋率。QC在單細(xì)胞測序中用于表示質(zhì)量控制，包括樣本質(zhì)量、測序數(shù)據(jù)質(zhì)量等方面的評估和控制。NGS是下一代測序技術(shù)的縮寫，是單細(xì)胞測序所依賴的核心技術(shù)之一。010203044.2縮略語在單細(xì)胞測序中的應(yīng)用055總體原則和要求5.1標(biāo)準(zhǔn)化操作遵循單細(xì)胞測序樣本采集、處理、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)臉?biāo)準(zhǔn)化操作流程，確保樣本質(zhì)量和數(shù)據(jù)可靠性。使用經(jīng)過驗(yàn)證和校準(zhǔn)的儀器設(shè)備和試劑，避免操作過程中的污染和誤差。建立嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系，對樣本采集、處理、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)雀鳝h(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)控和記錄。定期進(jìn)行質(zhì)量評估和審計(jì)，確保實(shí)驗(yàn)室操作符合相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)要求。5.2質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的安全管理制度，包括生物安全、化學(xué)安全和輻射安全等方面。操作人員應(yīng)接受相關(guān)安全培訓(xùn)，熟悉應(yīng)急處理措施，確保實(shí)驗(yàn)室安全穩(wěn)定運(yùn)行。5.3安全管理建立完善的數(shù)據(jù)管理體系，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的完整性、準(zhǔn)確性和可追溯性。對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行定期備份和加密存儲(chǔ)，防止數(shù)據(jù)丟失和泄露。同時(shí)，應(yīng)建立數(shù)據(jù)共享和訪問機(jī)制，促進(jìn)數(shù)據(jù)交流和合作。5.4數(shù)據(jù)管理與可追溯性066樣本采集確保采集人員具備相關(guān)專業(yè)知識(shí)和操作技能。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的采集器具和試劑。確認(rèn)樣本來源、種類和數(shù)量，制定詳細(xì)的采集計(jì)劃。6.1采集前準(zhǔn)備無菌操作在整個(gè)采集過程中，需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，避免污染。采集部位選擇根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的采集部位，如血液、組織等。采集時(shí)間盡量在短時(shí)間內(nèi)完成采集，以減少樣本離體后的變化。6.2采集方法03運(yùn)輸如需將樣本運(yùn)輸至其他地點(diǎn)進(jìn)行處理，需選擇合適的運(yùn)輸方式和條件，確保樣本在運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性和安全性。01樣本標(biāo)識(shí)對采集的樣本進(jìn)行唯一性標(biāo)識(shí)，包括樣本名稱、來源、采集時(shí)間等信息。02暫時(shí)保存將采集后的樣本放置在適宜的條件下暫時(shí)保存，等待進(jìn)一步處理。6.3采集后處理盡量避免在同一部位進(jìn)行多次采集，以減少對樣本的損傷和污染風(fēng)險(xiǎn)。避免多次采集在采集過程中，需注意防止不同樣本之間的交叉污染。防止交叉污染在采集人體樣本時(shí)，需遵守相關(guān)倫理規(guī)范和法律法規(guī)，保護(hù)受試者的合法權(quán)益。遵守倫理規(guī)范6.4注意事項(xiàng)076.1采集前的準(zhǔn)備確定采樣對象根據(jù)需要選擇合適的單細(xì)胞生物或組織進(jìn)行采樣。明確采樣數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和分析需求，確定所需采集的單細(xì)胞數(shù)量。了解采樣環(huán)境熟悉采樣環(huán)境的溫度、濕度、光照等條件，以便更好地保存樣本。6.1.1明確采樣目的和要求采樣器具準(zhǔn)備無菌的采樣器具，如吸管、移液器、離心管等，確保采樣過程中不受到污染。試劑準(zhǔn)備根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，準(zhǔn)備相應(yīng)的試劑，如培養(yǎng)基、消化酶、裂解液等。儲(chǔ)存容器選擇適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存容器，如液氮罐、超低溫冰箱等，用于保存采集的單細(xì)胞樣本。6.1.2采樣器具與試劑準(zhǔn)備培訓(xùn)采樣人員對采樣人員進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)，熟悉采樣流程、器具使用、安全防護(hù)等知識(shí)。防護(hù)措施采樣人員需穿戴防護(hù)服、手套、口罩等防護(hù)用品，確保采樣過程的安全性。采樣操作規(guī)范制定詳細(xì)的采樣操作規(guī)范，確保采樣人員按照規(guī)范進(jìn)行操作，避免誤差和污染。6.1.3采樣人員培訓(xùn)與防護(hù)確保采集環(huán)境符合無菌操作要求，避免污染。選擇合適的采集器具，如針頭、注射器等，確保無菌、無熱源、無毒性。準(zhǔn)備必要的采集輔助用品，如消毒液、棉簽、采血管等。6.2.1采集前準(zhǔn)備根據(jù)不同的樣本類型選擇合適的采集方法，如穿刺采集、切割采集等。遵循無菌操作原則，避免在采集過程中引入外源性污染。確保采集到足夠的樣本量，以滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求。6.2.2采集方法03將處理后的樣本妥善保存，并盡快送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行后續(xù)分析。01采集后應(yīng)立即對樣本進(jìn)行初步處理，如分離、清洗、固定等。02對采集器具進(jìn)行清洗、消毒處理，避免交叉感染。6.2.3采集后處理采集人員應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)知識(shí)和技能，確保采集過程的安全性和準(zhǔn)確性。遵循相關(guān)法律法規(guī)和倫理規(guī)范，確保樣本采集的合法性和合規(guī)性。采集過程中應(yīng)注意保護(hù)患者隱私，尊重患者權(quán)益。6.2.4注意事項(xiàng)087樣本處理接收樣本時(shí)應(yīng)記錄樣本信息，包括樣本類型、數(shù)量、采集時(shí)間等。檢查樣本容器是否完整、無破損，樣本標(biāo)識(shí)是否清晰。核實(shí)樣本采集與處理是否符合規(guī)范要求。7.1樣本接收與檢查

7.2樣本前處理根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行樣本前處理，如洗滌、離心、過濾等。處理過程中應(yīng)避免樣本污染和交叉污染。確保處理后的樣本質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)要求。123根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求將樣本分裝至合適的容器中，確保分裝量準(zhǔn)確。分裝后的樣本應(yīng)妥善保存，避免污染和變質(zhì)。保存條件應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)要求，如溫度、濕度、光照等。7.3樣本分裝與保存010203樣本運(yùn)輸應(yīng)符合生物安全要求，確保樣本在運(yùn)輸過程中不被污染或損壞。運(yùn)輸過程中應(yīng)記錄樣本狀態(tài)和環(huán)境條件。建立樣本追蹤系統(tǒng)，確保樣本來源可追溯。7.4樣本運(yùn)輸與追蹤097.1處理前的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備良好的通風(fēng)和潔凈度，確?？諝饬魍ㄇ覠o污染。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備符合單細(xì)胞測序要求的儀器設(shè)備，如顯微鏡、離心機(jī)、冰箱等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期進(jìn)行消毒和清潔，保持環(huán)境整潔。7.1.1實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與設(shè)施要求7.1.2實(shí)驗(yàn)器材與試劑準(zhǔn)備準(zhǔn)備所需的實(shí)驗(yàn)器材，如移液器、吸頭、離心管、PCR管等，確保無菌且無DNA/RNA酶污染。準(zhǔn)備所需的試劑，如細(xì)胞裂解液、DNA/RNA提取試劑、PCR擴(kuò)增試劑等，確保試劑質(zhì)量可靠。樣本采集應(yīng)遵循無菌操作原則，避免污染。采集的樣本應(yīng)盡快送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理，運(yùn)輸過程中應(yīng)保持低溫并避免劇烈震蕩。樣本應(yīng)詳細(xì)記錄采集時(shí)間、部位、患者信息等，確保樣本可追溯。7.1.3樣本采集與運(yùn)輸要求實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)接受單細(xì)胞測序相關(guān)知識(shí)和技能培訓(xùn)，熟悉實(shí)驗(yàn)操作流程。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)穿戴防護(hù)服、手套、口罩等防護(hù)用品，確保實(shí)驗(yàn)安全。7.1.4實(shí)驗(yàn)人員培訓(xùn)與防護(hù)107.2處理接收樣本時(shí)，應(yīng)檢查樣本容器是否完好、標(biāo)簽是否清晰、信息是否齊全等，并記錄接收時(shí)間和人員。對于不符合要求的樣本，應(yīng)及時(shí)與送檢單位或個(gè)人聯(lián)系，并按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立樣本接收和登記制度，確保樣本信息的完整性和可追溯性。7.2.1樣本接收與登記根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，對樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)那疤幚?，如離心、洗滌、固定等。前處理過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，避免交叉污染和樣本損失。對于需要特殊處理的樣本，應(yīng)按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行操作，并記錄處理過程和結(jié)果。7.2.2樣本前處理根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的單細(xì)胞分離與捕獲方法，如顯微操作、流式細(xì)胞術(shù)、微流控技術(shù)等。在單細(xì)胞分離與捕獲過程中，應(yīng)確保細(xì)胞的活性和完整性，避免對細(xì)胞造成不必要的損傷。對于分離與捕獲的單細(xì)胞，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或保存，避免細(xì)胞死亡或功能喪失。7.2.3單細(xì)胞分離與捕獲01實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系，對處理過程中的關(guān)鍵步驟進(jìn)行監(jiān)控和記錄。02對于處理過程中出現(xiàn)的問題或異常情況，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行分析和處理，并記錄處理過程和結(jié)果。03實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期對處理流程和結(jié)果進(jìn)行回顧和總結(jié)，不斷優(yōu)化和改進(jìn)處理方法。7.2.4質(zhì)量控制與記錄118質(zhì)量驗(yàn)證細(xì)胞活性確保采集的單細(xì)胞樣本具有足夠的活性，以進(jìn)行后續(xù)的測序分析。細(xì)胞數(shù)量驗(yàn)證采集的細(xì)胞數(shù)量是否符合實(shí)驗(yàn)要求，以保證測序結(jié)果的準(zhǔn)確性。DNA/RNA質(zhì)量檢測提取的DNA/RNA的完整性、純度和濃度，確保其滿足測序要求。8.1質(zhì)量控制指標(biāo)03分子生物學(xué)方法采用PCR、qPCR、凝膠電泳等分子生物學(xué)方法，檢測DNA/RNA的質(zhì)量和數(shù)量。01顯微鏡觀察通過顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、大小和活性，以初步判斷樣本質(zhì)量。02流式細(xì)胞儀檢測利用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)分析，包括細(xì)胞大小、顆粒度、熒光強(qiáng)度等，以進(jìn)一步評估樣本質(zhì)量。8.2質(zhì)量驗(yàn)證方法重新采集如樣本質(zhì)量不合格，應(yīng)重新采集樣本，確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。樣本保存與記錄對不合格樣本進(jìn)行妥善保存，并記錄相關(guān)信息，以便后續(xù)分析和處理。原因分析與改進(jìn)分析導(dǎo)致樣本不合格的原因，并采取相應(yīng)的改進(jìn)措施，以避免類似問題的再次發(fā)生。8.3不合格樣本處理12附錄A(資料性)組織細(xì)胞酶解法利用酶的特異性酶解法利用特定的酶對細(xì)胞間質(zhì)進(jìn)行降解，從而釋放單個(gè)細(xì)胞。這種方法能夠保持細(xì)胞的完整性和活性，為后續(xù)的單細(xì)胞測序提供高質(zhì)量的樣本。溫和條件酶解法在溫和的條件下進(jìn)行，避免了對細(xì)胞的機(jī)械損傷和化學(xué)刺激，有利于保持細(xì)胞的原始狀態(tài)。酶解法的原理膠原酶適用于降解細(xì)胞間質(zhì)中的膠原蛋白，常用于分離纖維組織和上皮組織等。透明質(zhì)酸酶用于降解透明質(zhì)酸，有助于分離富含透明質(zhì)酸的細(xì)胞間質(zhì)。蛋白酶可降解多種蛋白質(zhì)成分，適用于多種組織類型的細(xì)胞分離。酶種類的選擇取適量新鮮組織樣本，去除血液、脂肪等非目標(biāo)成分，剪碎成小塊。組織樣本準(zhǔn)備根據(jù)所選酶的種類和濃度，配制適量的酶溶液。酶溶液配制將剪碎的組織與酶溶液混合，置于恒溫振蕩器中消化一定時(shí)間，使細(xì)胞間質(zhì)充分降解。組織消化消化后的組織通過過濾網(wǎng)過濾去除未消化的組織塊，收集濾液中的單個(gè)細(xì)胞。用無菌生理鹽水清洗細(xì)胞數(shù)次，去除殘留的酶和細(xì)胞碎片。細(xì)胞過濾與清洗酶解法的步驟010204注意事項(xiàng)酶解法需要在無菌條件下進(jìn)行，以避免細(xì)胞污染。消化時(shí)間不宜過長，以免對細(xì)胞造成損傷。過濾網(wǎng)的孔徑大小應(yīng)適中，以保證單個(gè)細(xì)胞的通過率并去除未消化的組織塊。清洗過程中應(yīng)避免用力吹打細(xì)胞，以免對細(xì)胞造成機(jī)械損傷。0313附錄B(資料性)細(xì)胞群富集方法激光捕獲顯微切割技術(shù)通過激光束在顯微鏡下的精確定位，將目標(biāo)細(xì)胞從周圍組織中切割并富集。磁珠分選技術(shù)利用磁珠與特定細(xì)胞表面標(biāo)志物的結(jié)合，通過磁場作用實(shí)現(xiàn)目標(biāo)細(xì)胞的分離和富集。微流控技術(shù)利用微流控芯片或微流控系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)對單細(xì)胞或少量細(xì)胞的精確操控和富集。常用的單細(xì)胞富集技術(shù)根據(jù)待研究細(xì)胞的大小、形狀、表面標(biāo)志物等特征，選擇適合的富集方法。細(xì)胞類型考慮樣本的來源、數(shù)量和質(zhì)量，選擇能夠高效富集目標(biāo)細(xì)胞的方法。樣本來源根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮秃罄m(xù)分析需求，選擇能夠最大程度保留細(xì)胞信息和活性的富集方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康母患椒ǖ倪x擇原則富集方法的操作步驟樣本處理對樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，如消化、離心、洗滌等，以獲取單細(xì)胞懸液。富集操作根據(jù)所選的富集方法，進(jìn)行相應(yīng)的操作，如磁珠分選中的磁珠孵育、洗滌和磁分離等。富集效果評估對富集后的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)、活性檢測等，以評估富集效果。操作規(guī)范嚴(yán)格按照所選富集方法的操作規(guī)范進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，避免操作失誤導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。試劑質(zhì)量使用高質(zhì)量的試劑和耗材，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。樣本保存對富集后的細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋４婧吞幚?，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。富集方法的注意事項(xiàng)14鮒錄C(資料性)臺(tái)盼藍(lán)染色操作流程試劑準(zhǔn)備臺(tái)盼藍(lán)染液、PBS緩沖液、細(xì)胞懸液等。器材準(zhǔn)備顯微鏡、離心管、移液器、細(xì)胞計(jì)數(shù)板等。實(shí)驗(yàn)環(huán)境準(zhǔn)備確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)清潔、無菌，操作臺(tái)面消毒。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備細(xì)胞懸液制備染色處理洗滌與離心顯微鏡觀察臺(tái)盼藍(lán)染色步驟將待測細(xì)胞用PBS緩沖液洗滌并離心，去除上清液，加入適量PBS緩沖液重懸細(xì)胞。染色后，加入適量PBS緩沖液洗滌細(xì)胞，離心去除上清液。取少量細(xì)胞懸液與臺(tái)盼藍(lán)染液按一定比例混合，染色時(shí)間一般為2-3分鐘。取少量染色后的細(xì)胞懸液滴于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)量。臺(tái)盼藍(lán)染液具有毒性，操作時(shí)需佩戴手套和口罩等防護(hù)用品。細(xì)胞懸液制備過程中需保持細(xì)胞活性，避免過度操作導(dǎo)致細(xì)胞損傷。染色時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞活性判斷。顯微鏡觀察時(shí)需保持細(xì)胞計(jì)數(shù)板清潔，避免雜質(zhì)干擾計(jì)數(shù)結(jié)果。注意事項(xiàng)15C.1儀器單細(xì)胞捕獲儀器用于從復(fù)雜的生物樣本中捕獲單個(gè)細(xì)胞，確保后續(xù)測序的準(zhǔn)確性和可靠性。顯微操作儀器用于在顯微鏡下對單細(xì)胞進(jìn)行精確操作，如細(xì)胞挑選、移動(dòng)和定位等。試劑處理儀器用于處理與單細(xì)胞測序相關(guān)的試劑，確保試劑的純度和穩(wěn)定性。C.1.1儀器種類高精度儀器應(yīng)具備高精度，以確保對單細(xì)胞的精確操作和測量。高穩(wěn)定性儀器應(yīng)具備高穩(wěn)定性，以確保長時(shí)間運(yùn)行時(shí)的準(zhǔn)確性和可靠性。易操作性儀器應(yīng)具備易操作性，以方便實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行操作和調(diào)整。C.1.2儀器性能要求為確保儀器的準(zhǔn)確性和可靠性，應(yīng)定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。定期校準(zhǔn)儀器應(yīng)定期進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，以延長使用壽命和保持性能穩(wěn)定。維護(hù)保養(yǎng)當(dāng)儀器出現(xiàn)故障時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行處理和修復(fù)，以避免影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度和結(jié)果。故障處理C.1.3儀器校準(zhǔn)與維護(hù)16C.2試劑耗材

C.2.1試劑選擇細(xì)胞裂解液應(yīng)選擇能有效裂解單細(xì)胞且不影響后續(xù)測序步驟的試劑，避免使用含有酶抑制劑或會(huì)影響核酸完整性的裂解液。酶和緩沖液用于單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增的酶應(yīng)具有高保真性和高擴(kuò)增效率，緩沖液成分需與酶相匹配，保證擴(kuò)增反應(yīng)的順利進(jìn)行。洗滌液和封閉液用于洗滌和封閉微孔板或芯片的試劑應(yīng)能有效去除雜質(zhì)并防止非特異性結(jié)合，以保證單細(xì)胞捕獲和測序的準(zhǔn)確性。123應(yīng)選擇適用于單細(xì)胞捕獲和測序的微孔板或芯片，其表面應(yīng)經(jīng)過特殊處理以減少非特異性結(jié)合和背景噪音。微孔板或芯片用于操作試劑和單細(xì)胞的移液器應(yīng)具有高精度和高穩(wěn)定性，吸頭應(yīng)選用無DNA/RNA酶污染的一次性產(chǎn)品。移液器和吸頭用于儲(chǔ)存和處理樣本的離心管和試管應(yīng)選用無DNA/RNA酶污染的材質(zhì)，并經(jīng)過嚴(yán)格滅菌處理。離心管和試管C.2.2耗材準(zhǔn)備試劑耗材應(yīng)符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，具有相應(yīng)的生產(chǎn)許可證和經(jīng)營許可證。試劑耗材的儲(chǔ)存和運(yùn)輸應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定，避免受潮、受熱、受光等影響而導(dǎo)致質(zhì)量變化。試劑耗材應(yīng)在使用前進(jìn)行質(zhì)量檢查，包括外觀、包裝、標(biāo)簽、有效期等方面的檢查，確保其符合使用要求。試劑耗材的使用過程中應(yīng)注意安全防護(hù)措施，避免交叉污染和生物安全風(fēng)險(xiǎn)。C.2.3試劑耗材質(zhì)量