輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣

臺(tái)灣輸血質(zhì)量管控及輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)分享張志升臺(tái)灣臺(tái)大醫(yī)院輸血移植組組長(zhǎng)技術(shù)組長(zhǎng)臺(tái)灣輸血學(xué)會(huì)理事暨教育訓(xùn)練委員會(huì)召集人臺(tái)灣組織兼容免疫基因?qū)W會(huì)理事臺(tái)灣檢驗(yàn)學(xué)會(huì)能力試驗(yàn)委員會(huì)委員1輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024講在前頭周一開始上班前的節(jié)奏兩岸的法規(guī)制度不同，慣用的實(shí)驗(yàn)方法不同，種族性血型分布不同，均有些微作法的異同處。兩岸制度及規(guī)范不同，環(huán)境及條件也有差異，不能混為一談。大陸法規(guī)較為完善，臺(tái)灣技術(shù)層面較為扎實(shí)。2輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024亞型輸紅細(xì)胞A2產(chǎn)生anti-A1的問題沒有產(chǎn)生抗A1,輸A1紅細(xì)胞產(chǎn)生抗A1,輸預(yù)溫法或抗人球A紅細(xì)胞交叉配血主側(cè)相合臺(tái)灣常見分生型A205,也有案例A205型輸一般A1型產(chǎn)生IgGanti-A1Ax輸O型紅細(xì)胞，Ａ型血漿Am(Bm)Ael(Bel)輸O型紅細(xì)胞,血漿類孟買A(或B)型輸A(或B)型紅細(xì)胞,血漿3輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024Rh陰性輸血小板(科學(xué)合理輸血)文獻(xiàn)證實(shí)Rh陰性輸Rh陽性血小板產(chǎn)生抗D無HTR溶血性輸血反應(yīng)。TRANSFUSIONVolume51,June2011.Rh陰性病患輸Rh陽性的機(jī)采血小板。除了未產(chǎn)生抗Ｄ孕齡期婦女非緊急下可選擇輸注Rh陽性機(jī)采血小板。已產(chǎn)生抗D的病患輸D陽性的血小板.(包括已產(chǎn)生anti-D孕齡期婦女)4輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024Rh陰性輸紅細(xì)胞(以風(fēng)險(xiǎn)控管及經(jīng)濟(jì)管理)孕齡期婦女(外國(guó)定義:五十歲左右)未產(chǎn)生抗D非緊急輸血下輸Rh陰性紅細(xì)胞。Rh陰性未產(chǎn)生抗D預(yù)期非長(zhǎng)期輸血狀況下，無法立即取得Rh陰性血輸Rh陽性血。Rh陰性未產(chǎn)生抗D,擇期手術(shù)或緊急手術(shù)預(yù)期使用輸血量無法備足相關(guān)Rh陰性血液量，先輸Rh陽性紅細(xì)胞,把Rh陰性血保留到己產(chǎn)生抗Ｄ下救命用。Rh陰性產(chǎn)生抗D緊急下無D陰性血輸D陽性血。5輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證臺(tái)灣是由臺(tái)灣認(rèn)證基金會(huì)TAFTaiwanaccreditationfoundation所辦理用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范質(zhì)量管理。取單一項(xiàng)目申請(qǐng)認(rèn)證范圍(e.g.ABO定型，Rh定型，抗體篩檢，抗體鑒定，直抗）重視單一項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)化及實(shí)驗(yàn)作業(yè)的偏移誤差。6輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024CAP美國(guó)病理學(xué)院認(rèn)證CAP是專由臨床檢驗(yàn)學(xué)家和病理學(xué)家組成的聯(lián)合會(huì)，被公認(rèn)為是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的領(lǐng)導(dǎo)者之一。CAP的一個(gè)重要內(nèi)容就是向世界各地的參與實(shí)驗(yàn)室開展能力驗(yàn)證活動(dòng)（ProficiencyTesting,PT也稱為室間質(zhì)評(píng)）。通過室間質(zhì)評(píng)和實(shí)驗(yàn)室實(shí)地評(píng)審進(jìn)行CAP認(rèn)證。CAP認(rèn)證依據(jù)是CAP自己制定的標(biāo)準(zhǔn)，即評(píng)審檢查要點(diǎn)（CHECKLIST）,它主要參照了CLIA-88的標(biāo)準(zhǔn)和美國(guó)的法律法規(guī)。7輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024認(rèn)證質(zhì)控的要求試劑/儀器的質(zhì)控確效室間質(zhì)量評(píng)價(jià).實(shí)驗(yàn)環(huán)境評(píng)估試劑的審批確效,導(dǎo)入,儲(chǔ)存運(yùn)送確效.儀器的保養(yǎng)使用確效人員能力的確認(rèn)新進(jìn)人員教育訓(xùn)練繼續(xù)教育訓(xùn)練8輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024試劑的質(zhì)控9輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024免疫血液的內(nèi)部實(shí)驗(yàn)品管試劑品管每日質(zhì)控dailyQC

/開新瓶批號(hào)修改質(zhì)控LotchangeQC/reagentallowableNewsystem/newmethod/newclone/newreagents:平行測(cè)試儀器品管離心機(jī)品管培溫器Incubator/加溫器Thermometer/冰箱滴管Pipette/吸管Dropper10輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024每日質(zhì)控DailyQC監(jiān)測(cè)試劑因儲(chǔ)存運(yùn)送的穩(wěn)定性抗血清-A,-B,-D,Ac,Bc,使用可回溯性的陰性及陽性質(zhì)控液，強(qiáng)度在2+左右抗篩細(xì)胞每一抗篩細(xì)胞至少一個(gè)抗原(可相同)需受到監(jiān)控。原則上每個(gè)質(zhì)控項(xiàng)目只監(jiān)控單一項(xiàng)目抗A和A血細(xì)胞不能同為監(jiān)控.凝聚胺不能和抗篩細(xì)胞互為監(jiān)控目標(biāo).11輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024平行測(cè)試Newproductlot/newsystem/newmethod/newclone/newreagent/newmachine/newhomemakereagent30specimen:基準(zhǔn)量監(jiān)測(cè)專一性敏感度Sensitivity,specificity12輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024儀器品管溫度品管定期校正每日溫度監(jiān)控。離心機(jī)品管校正維修允收FunctionalcheckPipette&Dropper

顯微鏡品管13輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024臺(tái)灣輸血學(xué)會(huì)教育培訓(xùn)班輸血醫(yī)學(xué)工作人員基礎(chǔ)班（為一般必需輸血行業(yè)的大小醫(yī)療院所基礎(chǔ)血庫學(xué)培訓(xùn)班）輸血醫(yī)學(xué)工作人員進(jìn)階班（教導(dǎo)進(jìn)階抗體血型及臨床輸血培訓(xùn)班）輸血醫(yī)學(xué)醫(yī)師培訓(xùn)班14輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024基礎(chǔ)班實(shí)驗(yàn)方法實(shí)習(xí)課程ABO/Rh血液凝集及判讀口水唾液試驗(yàn)弱亞血型吸附放散傳統(tǒng)抗人球抗體篩檢及凝聚胺法抗體篩檢簡(jiǎn)易譜細(xì)胞抗體鑒定預(yù)溫法交叉配血或抗體篩檢15輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024試管法/凝集試驗(yàn)的觀察方法輕輕搖動(dòng)或傾斜試管，以重懸試管底部的紅血球；傾斜試管法乃利用上清液劃過cellbuttons，使紅血球輕輕脫離管壁，直至試管底部的紅血球完全被重懸，判斷凝集價(jià)數(shù)并立即記錄結(jié)果觀察血球cellbuttons被搖散時(shí)呈現(xiàn)的方式，包括凝集塊的大小、是否有松散凝塊、線狀凝塊、具折光性凝塊或混合視野型（mixed-field）結(jié)果，這可能對(duì)解決問題有所幫助：例某些抗體特異性（

anti-Lu,anti-Sda等）或輸血后檢體16輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024血液凝集的判讀標(biāo)準(zhǔn)判讀標(biāo)準(zhǔn)敘述備注分?jǐn)?shù)4+一塊大塊的凝集123+數(shù)個(gè)大凝集102+許多中凝集塊，背景澄清81+許多細(xì)小的凝集，背景混濁5±巨視可見十分微小凝集0無凝集0mf微鏡下可見凝集及游離細(xì)胞限指微鏡下Ｈ上清液完全溶血，無細(xì)胞殘留PH上清液見明顯溶血，但底部仍有血細(xì)胞塊17輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024ABO/Rh的判讀原則Anti-AAnti-BAcellBcellAnti-D*定型00

2+

2+

2+O/Pos.00

2+

2+0O/Neg.

3+00

2+

2+A/Pos.

3+00

2+0A/Neg.0

3+

2+0

2+B/Pos.0

3+

2+00B/Neg

3+

3+00

2+AB/Pos.

3+

3+000AB/Neg.正定<3+,反定<2+,正定為O型,反定差價(jià)

2+也是屬于ABO定型不符(ABOdiscrepancy)<2+Ddiscrepancy*單克?。桑纾?，IgG/IgM混株,或DVI(-)試管法或凝膠直接凝集法,非高效價(jià)抗D

3+??

18輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024凝集價(jià)數(shù)判讀19輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024為什么要使用標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)價(jià)數(shù)顯現(xiàn)反應(yīng)之強(qiáng)度及狀況，ABO疑難血型的判別﹝含溶血、緡錢、混合視野之觀察﹞多重抗體之區(qū)分或劑量效應(yīng)之應(yīng)用。求取輸血科工作同仁實(shí)驗(yàn)結(jié)果之一致性，回溯性，及標(biāo)準(zhǔn)化。作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化。20輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024ABO疑難血型的定義狹義：不合：正定和反定判讀結(jié)果不合。廣義：不合正定<3+,反定<2+反定結(jié)果A-B(B-A)≧2和歷史血型不合、和口述血型不合21輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024溫鹽水洗滌紅細(xì)胞移除自體抗體正定型先預(yù)溫一瓶溫鹽水，置37℃將紅細(xì)胞懸浮液置放于37℃heatblock;，15至60分鐘用37℃溫鹽水洗滌紅細(xì)胞數(shù)次以移除自體抗體使用已洗滌過的紅細(xì)胞與anti-A,anti-B,anti-D和6%BSA進(jìn)行正定型，若6%BSA對(duì)照仍有反應(yīng)，則需再洗滌幾次則移除IgM自體抗體：DTTorAETtreated移除IgG自體抗體：45℃gentleheat/

chloroquine/acidglycine/EDTA(EGA)※亦可用coldautoadsorption(三個(gè)月內(nèi)未輸血)反定型以三組O型紅細(xì)胞混合吸附血漿，吸附后血漿執(zhí)行反定型。22輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024預(yù)溫法交叉配血pre-warmtechnique正常人存在一般冷凝集素，在低溫下

32效價(jià)。強(qiáng)力冷凝集素常造成定型疑難及配血疑集。強(qiáng)力有害冷凝集素的特點(diǎn)自身抗體，低溫效價(jià)高于640，溫度態(tài)度高于30°C，運(yùn)用的實(shí)驗(yàn)方法：冷凝抗體專一性確認(rèn)，低溫冷凝抗體效價(jià)測(cè)定，溫態(tài)測(cè)試thermalamplitude23輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024預(yù)溫法prewarmtechnique將獻(xiàn)血員紅細(xì)胞及受血者血漿預(yù)先培

溫到37度，另準(zhǔn)備已預(yù)溫的37度鹽水采嚴(yán)格限制的預(yù)溫把獻(xiàn)血員紅細(xì)胞及受者血漿加在一起培溫,培溫后不離心判讀,直接用預(yù)溫的37度鹽水洗滌后,再加抗人球試劑離心判讀。常用于解決強(qiáng)力的冷凝集素的交叉配血；或者是冷反應(yīng)的同種抗體(anti-Lea,-Leb,-P1,-M…等,不找抗原陰性，隨機(jī)取血使用預(yù)溫法交叉配血)24輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024？輸血前試驗(yàn)流程

陽性不規(guī)則抗體篩檢病患血清+抗篩紅細(xì)胞陰性選擇可測(cè)得具臨床意義抗體的適當(dāng)方法抗體特異性鑒定病患血漿+譜細(xì)胞主側(cè)配合試驗(yàn)病患血清+獻(xiàn)血者紅細(xì)胞(+/-血袋相對(duì)應(yīng)抗原測(cè)試)*ABO血型檢查病患及獻(xiàn)血者M(jìn)P法(或IS法)*相對(duì)抗原測(cè)試的效率比盲配較高25輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024例Allo-Ab!先找找看再說……可能是anti-M……可能是anti-C,-e……可能是anti-Mia+anti-?可否跳過”抗體鑒定”步驟，

直接作配合試驗(yàn)?當(dāng)此不規(guī)則抗體強(qiáng)度較低時(shí)，相對(duì)應(yīng)抗原表現(xiàn)較弱的血品（例：singledose）可能被測(cè)為”相合”。以系統(tǒng)性分析方式厘清抗體的特異性及反應(yīng)性，可以經(jīng)濟(jì)有效地尋得相合的血品。AntibodyScreening(MP)SISIISIIIAC0++026輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024常見異體抗體之血清學(xué)特性對(duì)應(yīng)抗體In-VitroHemolysis4C22C37CAHGCauses:HDNHTRAnti-DSomeMostMostYesYesAnti-CFewMostMostYesYesAnti-ESomeMostMostYesYesAnti-cRareMostMostYesYesAnti-eRareMostMostYesYesAnti-K0FewSomeMostYesYesAnti-k0FewFewMostYesYesAnti-JkaSomeFewFewMostMildYesAnti-JkbSomeFewFewMostMildYesAnti-Fya0RareRareMostYesYesAnti-Fyb0RareRareMostYesYesAnti-LeaSomeMostMostSomeManyNoFewAnti-LebRareMostMostFewSomeNoNoAnti-M0MostSomeFewFewFewFewAnti-N0MostFewOcc.Occ.RareNoAnti-S0FewSomeSomeMostYesYesAnti-s0NoFewFewMostYesYesAnti-P1Occ.MostSomeOccRareNoRareAnti-MiaSomeMostMostYesYesAnti-Dia0SomeSomeMostYesYes#摘自AABBTechnicalManual14thedition.Page288,317.27輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024國(guó)人的紅細(xì)胞次要抗原頻率抗原系統(tǒng)抗原抗原頻率(臺(tái)灣*)RhD99.6%C91%E43%c49%e94%KellK0%k100%KiddJka70%Jkb75%DuffyFya99.8%Fyb8%LewisLea23%Leb92%Le(a-b-):8%MNSsUM83%N68%S11%s99.5%Mia7%PP132%DiegoDia3%*國(guó)人抗原頻率摘自93年血庫在職人員基礎(chǔ)班講義，孫建峰主任28輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024進(jìn)階班實(shí)驗(yàn)課程內(nèi)容酵素一步法，二步法，化學(xué)試劑處理分離紅細(xì)胞，冷凍紅細(xì)胞，解凍紅細(xì)胞血清酸化法。血型物質(zhì)中和抑制法吸附放散法溫態(tài)測(cè)試thermalamplitude高頻抗原抗體鑒定，藥物抗體鑒定血小板抗體，白細(xì)胞抗體29輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202430輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024抗體篩檢結(jié)果分析要點(diǎn)僅部分篩檢細(xì)胞有反應(yīng)？可鑒定出特異性的異體抗體反應(yīng)強(qiáng)度一致？單一抗體或多重抗體血品核發(fā)策略？MP法？三相法？或僅作抗球蛋白期？或預(yù)溫技術(shù)？自體對(duì)照是否有陽性反應(yīng)？異體或自體抗體陽性反應(yīng)在哪一種方法/哪一期發(fā)生？溫型或冷型抗體MP篩檢陽性后，續(xù)以傳統(tǒng)三相法再做一次抗體篩檢＆自體對(duì)照優(yōu)點(diǎn)：1.藉三相法可分析抗體的基本性質(zhì)（溫型或冷型）

2.三相法之抗球蛋白期可減除冷凝集素或緡錢狀反應(yīng)的干擾

3.發(fā)現(xiàn)不同反應(yīng)期的反應(yīng)差異，有助于解決多重抗體或自體抗體合并異體抗體的復(fù)雜案例31輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024抗體鑒定難題(I)抗篩結(jié)果(+)

自身對(duì)照(-)與譜細(xì)胞反應(yīng)均(+)

或大部份譜細(xì)胞反應(yīng)為(+)

反應(yīng)期與反應(yīng)強(qiáng)度不ㄧ致與譜細(xì)胞反應(yīng)均(+)

反應(yīng)期與反應(yīng)強(qiáng)度ㄧ致疑為抗high-incidenceantigen的異體抗體疑為多重異體抗體仔細(xì)分析可能的特異性，選擇更多特定紅細(xì)胞反應(yīng)測(cè)試病人的紅細(xì)胞抗原分型利用輔助方法協(xié)助特異性鑒定根據(jù)反應(yīng)特性及病人種族，推測(cè)可能的特異性測(cè)試病人的紅細(xì)胞抗原分型(請(qǐng)病人的兄弟姐妹前來采血檢查)(交由咨詢實(shí)驗(yàn)室鑒定抗體特異性)32輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024可能為自體抗體加上異體抗體(少數(shù)案例可見呈現(xiàn)特異性的自體抗體)抗體鑒定難題(II)抗體篩檢(+)

自身對(duì)照

(+)與譜細(xì)胞反應(yīng)均(+)

反應(yīng)期與反應(yīng)強(qiáng)度不ㄧ致與譜細(xì)胞反應(yīng)均(+)

反應(yīng)期與反應(yīng)強(qiáng)度ㄧ致疑為自體抗體(但仍須仔細(xì)排除異體抗體的可能)以自體吸收(三個(gè)月內(nèi)未輸過血者)或異體吸收法，移除自體抗體，以檢測(cè)異體抗體的存在。測(cè)試病人的紅細(xì)胞抗原分型(Rh,Kidd……)，可輔助異體抗體特異性鑒定；給予表現(xiàn)型相合血品可預(yù)防異體抗體產(chǎn)生直抗(+)※若為輸血后檢體，須小心排除對(duì)抗高頻率抗原之抗體的可能！33輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024高頻率抗原抗體HTLA手工凝聚胺法所有篩選細(xì)胞陽性3個(gè)月內(nèi)有輸血史，不要做凝聚胺法自身對(duì)照經(jīng)典IAT+自身細(xì)胞如果3個(gè)月內(nèi)無輸血史，凝聚胺和/或經(jīng)典IAT+自身對(duì)照自身對(duì)照陰性自身對(duì)照陽性所有反應(yīng)強(qiáng)度都一樣≦1+2倍稀釋~256效價(jià)≧32高效價(jià)低親和力抗體hightiterlowavidity一樣的反應(yīng)強(qiáng)度效價(jià)<32抗篩陽性IAT陰性

自身抗體藥物抗體-幾乎都是藥物依賴抗體自身細(xì)胞>抗篩自身抗體藥物抗體-藥物非依賴抗體.如果正定型是

O型,用

anti-H檢測(cè)H(-),孟買或類孟買H(+)所有細(xì)胞均反應(yīng)，但強(qiáng)度不同自身細(xì)胞

<抗篩細(xì)胞只有1個(gè)或幾個(gè)譜細(xì)胞不反應(yīng)種族

相關(guān)的高頻抗原D,s,Lea,Leb,Fya.表型多重抗體有劑量效應(yīng)的單一抗高頻抗原抗體見

:多重抗體抗體鑒定程序抗-Dib(MediproSRC)

抗-Wrb(有些譜細(xì)胞),

抗-k,

抗-Kpb檢測(cè)

Dia,Wra,K,Kpa表型都是一樣的混合外觀抗-Lub,

(DTT破壞)

抗-Sda(天竺鼠尿中和)與普通譜細(xì)胞的區(qū)別

藥物抗體的研究溫度反應(yīng)性評(píng)估Donath-Landsteiner實(shí)驗(yàn)

冷凝集素效價(jià)

溫自免溶貧研究自身對(duì)照≧2+放散液和血清經(jīng)典IAT篩選細(xì)胞均陽性抗-Sda:混合外觀反應(yīng),用天竺鼠尿中和

抗-Rg/Ch:AB

血漿中和檢測(cè)

RhD,RhCE,Kidd,Duffy,MNSs,Kell血型Rh:抗-Hr0

Kidd:抗-Jk3

Duffy:抗-Fy3

MNSs:抗-U

Kell:抗-Ku,anti-Kx(弱

Kell)無花果酶(木瓜酶),

0.2MDTT

處理細(xì)胞臍血

i細(xì)胞,IgG1,IgG3

溶血性評(píng)估IgA/IgG分類酶

+,DTT+

抗-Jra

抗-Vel(臍血iw)抗-p抗-Tja酶

+,DTT0抗-Kpb抗-AnWj(臍血i0)抗-Jsb(EGA0)抗-Lub抗-Lu3~Lu21(除外.Lu8)酶

0,DTT0抗-JMH(臍血iw)抗-Inb抗-Yta

酶

0,DTT+

抗-Ch/Rg+:反應(yīng),0:不反應(yīng),w:弱反應(yīng)酶

:木瓜酶/無花果酶高效價(jià)低親和力

抗體是一組抗體群EGA:glycine-HCl-EDTA

處理紅細(xì)胞酶

0,DTT0:抗-JMH

酶

0,DTT+:抗-Ch/Rg酶

+,DTT+:抗-Csa酶

0,DTTw:Knop抗體

(anti-Kn,McCa,Sla,Yka)

Yka

可以被唾液酸苷酶破壞）如果懷疑是藥物抗體,

則放散液,

新鮮血清(要備補(bǔ)體),

及懷疑的藥物要準(zhǔn)備一下,

以便進(jìn)一步研究

34輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024多重抗體鑒定技巧仔細(xì)判讀反應(yīng)價(jià)數(shù)選擇適當(dāng)?shù)蔫b定方法（傳統(tǒng)三相法通常優(yōu)于MP法）可針對(duì)每個(gè)phase，以排除法仔細(xì)分析特異性可獲知該抗體之血清學(xué)特性，輔助特異性鑒定參考病人的紅細(xì)胞抗原分型若病人之某ㄧ抗原為陽性，則可排除其對(duì)應(yīng)抗體的可能病人的抗原異體抗體？陽性不可能！陰性不能排除（無法下定論）35輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024紅細(xì)胞抗原分型的難題病人近日輸過血找出輸血前的檢體測(cè)試分離病人自身血球測(cè)試基因分型IgG或IgM抗體附著的紅細(xì)胞IgM附著：須移除自發(fā)性凝集IgG附著：多不影響分型，除非須用抗球蛋白試劑分型若輸注單位不多，仔細(xì)觀察mix-field反應(yīng)的有無，仍可得到可信的分型結(jié)果36輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024

簡(jiǎn)易離心法(SimpleCentrifugation)分離自體紅細(xì)胞紅細(xì)胞以鹽水洗三次，最后一次離心1000×g5-15分鐘，于不破壞白膜層下盡量移除上清液。(或直接重離心2500g15分鐘取白膜層)充分混合均勻后，填滿十根毛細(xì)管(不含抗凝劑)，一端封口。

※注意！充填每ㄧ支毛細(xì)管前均須再次充份混合！離心15分鐘。割下十支毛細(xì)管頂端5mm，集中于ㄧ試管，加入鹽水。以滴管將紅細(xì)胞全沖出后，移至另一干凈試管。洗三次后泡成2-5%紅細(xì)胞懸浮液（參考資料：AABBTechnicalManual15thedition,Method2.15）新生自體紅細(xì)胞比重較低，可利用離心法將之與輸入的紅細(xì)胞分離注1:至少須輸血后3天的標(biāo)本才有較佳的分離效果注2:此法不適用于網(wǎng)織細(xì)胞生成數(shù)較低的病人，亦不適用于有HemoglobinS或spherocyticdisorders病人注3:有些抗原在網(wǎng)織細(xì)胞的表現(xiàn)比在老舊的血球?yàn)槿酰瑴y(cè)E,e,c,Fya,Jka與Ge抗原要特別留意37輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024DTT處理紅細(xì)胞抗原Yta,JMH,Kna,McCa,Yka,LWa,LWb,Ge,AllKell,Lutheran,Dombrock,andCromerbloodgroupantigens0.2MDTT處理紅細(xì)胞抗原38輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024劑量效應(yīng)的快速記憶法:KiddsandDuffytheMonkey(Rh)eatlotsofM&NsJka,Jkb,Fya,Fyb,C,c,E,e(noD),M,N,S,sM&NsadaptedfromClinicalLaboratoryScienceReview:ABottomLineApproach(3rdEdition)M&NsKiddDuffyRhMNSs39輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024吸附法adsorption自身吸附autoadsorption冷吸附溫吸附

異體吸附Alloadsorption應(yīng)用于含有多重抗體復(fù)雜性高的吸附排除，配合放散可以區(qū)分出多重抗體。也可應(yīng)用于曾輸過血，不適合用自身吸附的自身含異體抗體的區(qū)別法40輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024放散Elution從致敏化紅細(xì)胞上游離出IgG抗體常應(yīng)用于輸血后產(chǎn)生抗體，但可能無法測(cè)出游離抗體，可以從致敏紅細(xì)胞上放散出抗體。放散法常應(yīng)用于新生兒溶血癥。多重抗體吸附后放散抗體鑒定濃縮低滴度抗體。（二體積血漿＋一體積紅細(xì)胞吸附后放散）41輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024放散技術(shù)ElutionTechniques改變溫度動(dòng)力學(xué)如熱放散：包括微放散及強(qiáng)熱放散冷凍加溫放散Luifreeze-thawelution逆轉(zhuǎn)抗原抗體間吸引力e.g.Ether,xyleneordichloromethaneelution干擾抗原抗體的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)e.g.酸放散，快速且敏感，不需用危險(xiǎn)化學(xué)藥劑Ph6.8~7.2抗原抗體結(jié)合穩(wěn)定,降低到pH3則造成抗體游離超音波震蕩42輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024利用自身吸附法來吸附去除溫自身抗體溫自身抗體經(jīng)常會(huì)遮蓋了同種臨床有意義抗體的出現(xiàn)運(yùn)用自身吸附法可以偵測(cè)到隱藏的同種抗體.解離紅細(xì)胞上的自身抗體，可以讓出更多位置來吸附其他游離自身抗體。利用酵素處理紅細(xì)胞也可以改變紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，進(jìn)而用來吸附不同的抗體。近期內(nèi)輸過血的標(biāo)本不適合作自身吸附法43輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024異體吸附法近期內(nèi)輸過血無法使用自體吸附法。異體吸附法最好使用三組血球R1R1Jk(a+,b-),R2R2Jk(a-,b+),rr,(也可加一組酶處理血細(xì)胞)異體吸附法的應(yīng)用自體+異體抗體多重復(fù)雜抗體:單純多重抗體,高頻抗原抗體+其他抗體Anti-G,anti-D,anti-C或其他復(fù)合抗體44輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024稀釋法自身抗體多半具有低滴度高親合力，所以利用滴度的不同，稀釋法?？梢詤^(qū)分出隱藏的同種抗體。但偶而也會(huì)偽陰性，將滴度不高的同種抗體稀釋到無法鑒定的滴度。威力十足的窮人原子彈45輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024

運(yùn)用酵素方法運(yùn)用常用的酵法(木瓜酶,菠蘿密酶,無花果酶)處理紅細(xì)胞可以加強(qiáng)Rh,P1,I,Kidd,Lewis抗原的表現(xiàn),使其相對(duì)的抗體表達(dá)增強(qiáng)可以運(yùn)用在卡片法傳統(tǒng)經(jīng)典IAT抗人球法無法運(yùn)用在凝聚胺法PEG+放散液46輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024

酶處理紅細(xì)胞抗原M,N,S,Fya,Fyb,Yta,Ch.Rg,Pr,Tn,Mg,Mia/Vw,Cla,Jea,Nya,JMH,someGe,Inb47輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024有譜細(xì)胞就有譜48輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024酵素處理譜細(xì)胞未經(jīng)處理譜細(xì)胞49輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202450輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024波蘿密酶酸放散51輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202452輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024中和抑制法利用可溶性抗原，可以用來中和或抑制了某些抗體的活性，剩下的抗體就可以單獨(dú)表達(dá)出來。經(jīng)常有些不具臨床意義的抗體都可以被這些血型物質(zhì)中和或抑制：如Lea,Leb,P1血型物質(zhì)53輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024血型物質(zhì)的來源Anti-P1蚯蚓，烏龜?shù)鞍?，鴿子蛋Anti-Lewis混合血漿血清或口水唾液Anti-Chido,anti-Rogers混合血漿血清Anti-Sda

人或天竺鼠尿Anti-I人類母乳Anti-H口水唾液54輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024P1,LewiesBGS唾液Ｌｅａ，Ｌｅｂ，Ｈ鴿蛋55輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024Anti-LeaAnti-LebAnti-IAnti-P1Anti-MAnti-A,-B,-HAnti-NNaturallyOccurringLIiPMABHNIgMantibodies56輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024外部質(zhì)評(píng)能力測(cè)試ProficiencyTestingCAP質(zhì)評(píng)能力測(cè)試ABO/Rh,抗篩,抗體鑒定,抗原確認(rèn),交叉試驗(yàn),直抗檢測(cè),抗體效滴度,放散實(shí)驗(yàn),血小板抗體RCPAQAP澳洲品保ABO/Rh,抗篩,抗體鑒定,抗原確認(rèn),交叉試驗(yàn),直抗檢測(cè),抗體效滴度,放散實(shí)驗(yàn),臺(tái)灣醫(yī)檢學(xué)會(huì)質(zhì)評(píng)能力測(cè)試小組ABO/Rh定型,抗篩,抗體鑒定(選擇性),抗原確認(rèn),交叉合血,直抗檢測(cè)57輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202458輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024臺(tái)灣輸血醫(yī)學(xué)質(zhì)評(píng)能力測(cè)試每年二次依申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室條件分成兩組，每次隨機(jī)兩組編碼分四支紅細(xì)胞懸液+血漿樣本測(cè)ABO/Rh(正反定型合并)，抗篩，抗體鑒定，直抗（每次二支紅細(xì)胞懸液標(biāo)本），交叉配血(每次一支紅細(xì)胞懸液標(biāo)本)，抗原確認(rèn)（提供交叉配血標(biāo)分依抗體種類作抗原分型，不計(jì)分）

。以往測(cè)試的特殊血型及抗體：A2,B3,類孟買血型，弱Ｄ，anti-D,-E,-c,-Dia,-Mia,-Fyb,-Jka,-Jkb,-P1.-M等,potentcoldanti-I,也試過多種抗體組合(如anti-c,-E,-Jka)。59輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024全國(guó)室間質(zhì)評(píng)能力測(cè)試比較定型判讀，可增加選擇測(cè)試項(xiàng)目。以最終判讀的結(jié)果為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。（但有ABO正反不符的選項(xiàng)）可以后送單位的結(jié)果來因應(yīng)室間質(zhì)評(píng)能力測(cè)試的結(jié)果。有抗體鑒定結(jié)果，及交叉配血結(jié)果評(píng)定。有直抗評(píng)量及獻(xiàn)血員相對(duì)應(yīng)抗原定型。60輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024血小板抗體臺(tái)灣組織相容免疫基因?qū)W會(huì)能力試驗(yàn)小組:HLA抗體PRA測(cè)試臺(tái)灣常用血小板抗體的監(jiān)測(cè)方法:ELISAPRA(酶標(biāo)法),FlowPRA(流式細(xì)胞儀),LuminexPRA,SPRCA(交叉及PRA)適用:血小板輸注無效,新生兒血小板低小紫癜癥。61輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024血小板輸注無效癥輸血管理華人大部份的血小板輸注無效癥是來自HLA抗體評(píng)估使用CREGmatching(cross-reactivegroup),或HLAmatchmaker效果良好。臺(tái)灣血液基金會(huì)建立約六萬多筆常獻(xiàn)機(jī)采血小板獻(xiàn)血員HLAclassI資料,目前也建立多筆CD36及HPAIIIa,IVb抗原陰性獻(xiàn)血員臺(tái)大醫(yī)院每月約100筆HLA配血機(jī)采血小板62輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024MASPAT63輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024交叉配血的意義（主側(cè)）主側(cè)配血:確認(rèn)血型相容是否有抗篩無法篩到的同種抗體或自身抗體。緊急輸血下主側(cè)交叉配血來不及執(zhí)行，可以省略。（緊急輸血，無標(biāo)本下無血型記錄，無抗體篩查，應(yīng)以Ｏ型血不需配血直接輸注）一般交叉配血以凝聚胺法較為快速，若在抗篩完整下，以凝聚胺法主側(cè)配血是快速且安全的主側(cè)交叉配血法。（雖然凝聚胺及卡式配血那一種方法較敏感尚無定論，但凝聚胺的高敏感度及快速仍是主側(cè)交叉配血的主要方法）Transfusion.1987Mar-Apr;27(2):134-7.沒有擇定抗原陰性的交叉配血，凝聚胺法可以篩到更高比例的不合配血64輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024交叉配血的意義（次側(cè)）次側(cè)配血:確認(rèn)血漿血型是否相容。因次側(cè)配血的意義在于確認(rèn)血漿血型是否相容，理論上只要鹽水次側(cè)交叉配血即可。但一般次側(cè)配血也以卡片法或凝聚胺法執(zhí)行，當(dāng)使用上述方法配血，主側(cè)相合，次側(cè)不合，但獻(xiàn)血員及受者血型可以確認(rèn)同型輸血或相容輸血，可以勿略次側(cè)不合的情形（常因直抗陽性造成，更換多袋獻(xiàn)血員血液次側(cè)交叉仍是不合），此血仍可輸用。65輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024交叉配血的策略緊急下，來不及抽輸血前檢查標(biāo)本，之前無二次血型資料，緊急輸Ｏ型懸紅。有確認(rèn)定型資料，56天內(nèi)曾有輸血前檢查，期間無輸血，緊急下可輸給同型血，不做交叉。（政策指導(dǎo)下決策）一般輸血，主側(cè)凝聚胺交叉配血，次側(cè)可鹽水配血（選）。常規(guī)配血，條件不同可選主側(cè)凝聚胺或經(jīng)典-IAT配血，次側(cè)鹽水配血（選）。66輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024凝聚胺法解析凝聚胺的原理凝聚胺法注意事項(xiàng)凝聚胺法和傳統(tǒng)抗人球法67輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202468輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202469輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202470輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202471輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/202472輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024凝聚胺法Manualpolybrene

注意事項(xiàng)使用顯微鏡觀察1mL

LIM會(huì)比0.6mL

LIM較敏感些。使用LIM先洗滌cell會(huì)比較敏感些。使用0.05%

Polybrene判讀時(shí)間勿超過1min,加重懸液后加溫會(huì)有偽陽性.洗腎病人使用多陽離子heparin,或使用某些高劑量帶陽離子藥物，不適合使用凝聚胺法配血對(duì)冷反應(yīng)抗體較敏感(anti-Mia,-E,-e,-c,-D,-M,-Lea,-Leb…)，也可使用MPA方法區(qū)分或MPCAT。73輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證經(jīng)驗(yàn)臺(tái)灣5/9/2024凝聚胺法與傳統(tǒng)抗人球法比較方法凝聚胺法傳統(tǒng)抗人球（卡片）對(duì)Rh抗體敏感度相當(dāng)高，尤以華人常出現(xiàn)的anti-E,anti-Mia,(華人的anti-E常以IgG/IgM型式表現(xiàn))好,尤以輸血后產(chǎn)生抗體（可能IgG型式）較凝聚胺高。對(duì)冷型自身或同種抗體或溫型自身抗體，HTLA高敏感度（交叉配血常受冷凝集素干擾，若抗篩陰性，主側(cè)交叉凝聚胺配血不合，常可能因存在冷凝集素造成交叉配血不合）除溫型自身抗體，無干擾對(duì)臨床有意義抗體配血有指標(biāo)性意義.直抗比傳統(tǒng)法更敏感（但無法