臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程........................................147

穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.......................................149

生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程........................................151

糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程..........................................153

膿液傷口標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................................156

中心靜脈導(dǎo)管標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.................................158

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室真菌標(biāo)本檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程...............................159

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室血液及骨髓標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)準(zhǔn)操作規(guī)程.....................162

文件編號(hào)：

XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科XXX-JY-CZ-WSW-0570

腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作版本：20140601

驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

業(yè)指導(dǎo)書生效日期:20140615

共2頁

1.目的

規(guī)范腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可

士.

4^o

2.適用范圍

腦脊液培養(yǎng)。

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型腦脊液。

3.2標(biāo)本采集由臨床醫(yī)師以無菌要求做腰椎穿刺，抽取腦脊液

2-3mL盛于無菌容器中送檢。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶酶，迅

速自溶，肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌離體后也易于死亡。因此，腦脊

液無論涂片或培養(yǎng)，必須于采集后立即送檢。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1標(biāo)本標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符。

3.3.2標(biāo)本未用無菌試管留取。

3.4標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置

于室溫，放置時(shí)間不應(yīng)超過2小時(shí)，切勿放冰箱，否則影響檢出率。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、

麥克凱平板、相關(guān)生化試劑等。

4.2VITEK鑒定系統(tǒng)；革蘭陰性菌鑒定卡（GNI+）、革蘭陰性菌藥

敏卡（GNS）、革蘭陽性菌鑒定卡（GPI）、革蘭陽性菌藥敏卡（GPS）、

藥敏紙片、TBA板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、C02培養(yǎng)

箱等。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見《質(zhì)量管理程序》

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。

6.1涂片檢查

6.1.1一般細(xì)菌涂片檢查外觀渾濁或膿性腦脊液可直接涂片，無

色、透明的腦脊液，應(yīng)3000r/min離心10-15分鐘后取沉淀物涂片、革

蘭染色、就、鏡檢。根據(jù)染色及形態(tài)特征，?？沙醪教崾炯?xì)菌的種類。

6.1.2結(jié)核分枝桿菌涂片檢查參見《分支桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程》

6.1.3新生隱球菌涂片檢查取腦脊液的沉淀物作墨汁負(fù)染色，或

取腦脊液的離心沉淀物接種于沙氏培養(yǎng)基，置于35攝氏度培養(yǎng)2-5

日，根據(jù)菌落特性，涂片染色鏡檢作出報(bào)告。必要時(shí)可作生化反應(yīng)進(jìn)

一步鑒定。

6.2分離培養(yǎng)

6.2.1用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分別接種

于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱平板，置于5%?10%CO2環(huán)

境中35攝氏度培養(yǎng)18?24小時(shí)，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，根據(jù)菌落特點(diǎn)、

形態(tài)與染色及生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌，并作藥敏試驗(yàn)。

6.2.2結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)參見《分支桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》

7.結(jié)果報(bào)告

無論是涂片還是培養(yǎng)，一旦檢測(cè)到陽性細(xì)菌應(yīng)立即電話或書面通

知臨床醫(yī)師。查見細(xì)菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。經(jīng)培養(yǎng)48小時(shí)，仍無

細(xì)菌生長(zhǎng)者，報(bào)告“培養(yǎng)2日無細(xì)菌生長(zhǎng)”。

8.注意事項(xiàng)

8.1抽取的腦脊液分置于無菌試管中，迅速送至實(shí)驗(yàn)室，病毒、

真菌分支桿菌培養(yǎng)樣本置于4。C保存待送。

8.2流感嗜血桿菌容易在外界環(huán)境中死亡，腦膜炎奈瑟菌對(duì)寒冷

和干燥均很敏感，在體外容易自溶，故不論是涂片鏡檢還是進(jìn)行培養(yǎng),

均應(yīng)及時(shí)送檢。

9.臨床意義

正常人的腦脊液是無菌的，檢出細(xì)菌提示細(xì)菌性（急性化膿性或

結(jié)核性等）腦膜炎?；撔阅X膜炎最多見腦膜炎奈瑟菌，肺炎鏈球菌

居第二位。3個(gè)月至5歲兒童細(xì)菌性腦膜炎的主要致病菌是流感嗜血

桿菌，新生兒腦炎多由大腸埃希菌、B群溶血性鏈球菌和腦膜敗血黃

桿菌引起的，特別是早產(chǎn)的嬰兒。結(jié)核分枝桿菌引起結(jié)核性腦膜炎。

85%腦膿腫病人腦脊液培養(yǎng)可檢出厭氧菌，有時(shí)可為厭氧菌和需氧菌

混合感染。

10.危急值報(bào)告

直接涂片找到細(xì)菌或培養(yǎng)陽性均作危急值報(bào)告。若檢測(cè)出腦膜炎

奈瑟菌則應(yīng)做傳染病報(bào)告。

參考文獻(xiàn)

[1]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL32:2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南.2008

[2]周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上海科

學(xué)技術(shù)出版社，2007

[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編全.國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第.三

版.南京：東南大學(xué)出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9th

ed.Washington：ASMPress,2007

[5]IS015189:2007醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則.2007

編寫人：AAA、BBB操作人：本室操作人員

批準(zhǔn)人：_______

XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢文件編號(hào)：

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程XXX-JY-CZ-WSW-0571

業(yè)指導(dǎo)書版本：20140601

生效日期:20140615

共2頁

1.目的

規(guī)范穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可

士.

4^o

2.適用范圍

穿刺液標(biāo)本培養(yǎng)。

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液等。

3.2標(biāo)本采集采用無菌方法采集體內(nèi)可疑感染部位的液體約

2ml,注入無菌試管，或抽取穿刺液l-2ml注入多功能液體培養(yǎng)瓶，或

抽取穿刺液2-5ml注入血培養(yǎng)瓶，混勻，立即送檢。如懷疑厭氧菌感

染，應(yīng)做床邊接種或接種運(yùn)送培養(yǎng)基。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1標(biāo)本標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符。

3.3.2標(biāo)本不是無菌留取，容器不符合要求。

3.4標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置

于室溫，放置時(shí)間不超過2小時(shí)。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、

麥克凱平板、相關(guān)生化試劑等。

4.2VITEK鑒定系統(tǒng)；革蘭陰性菌鑒定卡（GNI+）、革蘭陰性菌藥

敏卡（GNS）、革蘭陽性菌鑒定卡（GPI）、革蘭陽性菌藥敏卡（GPS）、

真菌鑒定卡（YBC）、藥敏紙片、TBA板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參

見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、C02培養(yǎng)

箱等。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見《質(zhì)量管理程序》

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。

6.1涂片檢查膿性標(biāo)本直接涂片。漿液性標(biāo)本先離心

（3000r/min）15分鐘，取沉淀物涂片作革蘭染色，觀察有無細(xì)菌，以

及細(xì)菌的形態(tài)。

6.2分離培養(yǎng)

6.2.1一般細(xì)菌培養(yǎng)接種于接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板

和麥康凱（或EMB、中國藍(lán)）瓊脂平板，置于5%-10%CO2環(huán)境中，

35°C培養(yǎng)18-24小時(shí)，根據(jù)菌落及染色形態(tài)特點(diǎn)，作出初步判斷。

6.2.2增菌-分離培養(yǎng)法將多功能體液培養(yǎng)瓶顛倒混勻使液體覆

蓋整個(gè)固體面，然后置35°C孵育培養(yǎng)箱（固體面在上，液體在下）。

次日觀察固體表面菌苔生長(zhǎng)及瓶中液體是否渾濁。如發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，

立即涂片鏡檢、生化鑒定和藥敏試驗(yàn)。此法可提高陽性檢出率。

6.2.3厭氧菌培養(yǎng)床邊接種或從厭氧菌運(yùn)送培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種后，立即

置于厭氧環(huán)境中，35°C培養(yǎng)24-48小時(shí)；挑取可疑菌落作耐氧試驗(yàn),

確定為厭氧菌。

6.2.4結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《分支桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程》。

7.結(jié)果報(bào)告

培養(yǎng)48小時(shí)無菌生長(zhǎng)，報(bào)告“培養(yǎng)2日無細(xì)菌生長(zhǎng)”。查見細(xì)菌,

報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。

注意事項(xiàng)

標(biāo)本的采集一定要嚴(yán)格履行無菌操作技術(shù)，避免污染。

加入抗凝劑的標(biāo)本（如胸腹水）采集后要與抗凝劑充分混勻并及

時(shí)送檢。

體液均需做厭氧培養(yǎng)，故運(yùn)送過程嚴(yán)格厭氧環(huán)境。

臨床意義

各個(gè)部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）的

細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于確定該部位是否有細(xì)菌感染具有重要的診斷價(jià)值。正

常穿刺液是無菌的，若從病人穿刺液中查見致病菌或條件致病菌則提

示該部位有細(xì)菌感染。胸腔感染的病原菌以結(jié)核分枝桿菌多見，其次

是金黃色葡萄菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等，腹

腔感染的病原菌以腸道細(xì)菌如大腸埃希菌、溶血性鏈球菌、糞腸球菌,

以及結(jié)核分枝桿菌多見；心包炎和關(guān)節(jié)炎以金黃色葡萄菌、溶血性鏈

球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等多見。

10.危急值報(bào)告

涂片發(fā)現(xiàn)細(xì)菌或培養(yǎng)陽性均需要及時(shí)向臨床報(bào)告結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)CNAS-CL32:2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南.2008

[2]周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上海科學(xué)

技術(shù)出版社，2007

[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編全.國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第.三版.

南京：東南大學(xué)出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington：

ASMPress,2007

[5]ISO15189:2007醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則.2007

編寫人：AAA、BBB操作人：本室操作人員

批準(zhǔn)人：_______

文件編號(hào)：

XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科XXX-JY-CZ-WSW-0572

生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作版本：20140601

驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

業(yè)指導(dǎo)書生效日期:20140615

共2頁

1.目的

規(guī)范生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可

士.

4^o

2.適用范圍

生殖道標(biāo)本培養(yǎng)或涂片檢查。

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型生殖道標(biāo)本。

3.2標(biāo)本采集

3.2.1女性由臨床醫(yī)師用無菌棉拭子采集陰道、宮頸分泌物。

懷疑盆腔炎厭氧菌感染時(shí)，由醫(yī)師用注射器從陰道后穹窿穿刺抽取標(biāo)

本，立即床邊接種于厭氧菌平板。

3.2.2男性翻轉(zhuǎn)包皮，用肥皂水清洗尿道口，清水沖洗，采集

尿道口分泌物。采集前列腺液時(shí)，先沖洗尿道和膀胱，用手指從肛門

內(nèi)按摩前列腺，使前列腺液溢出。

3.2.3梅毒螺旋體標(biāo)本從外生殖器的硬下疳處蘸取滲出液，置

于載玻片上，加蓋玻片后立即送檢。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1化驗(yàn)申請(qǐng)單與標(biāo)本不符。

3.3.2標(biāo)本不是用無菌容器留取。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、

麥克凱平板、相關(guān)生化試劑等。

4.2VITEK鑒定系統(tǒng)；革蘭陰性菌鑒定卡（GNI+）、革蘭陰性菌藥

敏卡（GNS）、革蘭陽性菌鑒定卡（GPD、革蘭陽性菌藥敏卡（GPS）、

真菌鑒定卡（YBC）、藥敏紙片、TBA板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參

見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、C02培養(yǎng)

箱等。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見《質(zhì)量管理程序》

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。

涂片檢查

6.1.1革蘭染色鏡檢觀察陰道分泌物中有無細(xì)菌，以及細(xì)菌形

態(tài)和染色性，尤其注意觀察有無白細(xì)胞內(nèi)外的革蘭陰性雙球菌（淋病

奈瑟菌），以及有無覆蓋大量革蘭陰性菌的上皮細(xì)胞，（線索細(xì)胞，提

示可能有陰道加特納菌感染）。

6.1.2梅毒螺旋體圖涂片檢查直接暗視野檢查，觀察有無纖細(xì)、

發(fā)亮、前后旋轉(zhuǎn)的密螺旋體，或馮泰納染色，觀察有無棕黑色的密螺

旋體。

6.2分離培養(yǎng)

6.2.1一般細(xì)菌培養(yǎng)接種于血瓊脂平板和麥康凱平板，置于

5%-10%CO2環(huán)境中，35°C培養(yǎng)18-24小時(shí)。

6.2.2淋病奈瑟菌培養(yǎng)接種于GC瓊脂平板，置于5%-10%CO2

環(huán)境中，35°C培養(yǎng)18-24小時(shí)，觀察有無較小、灰白色、露滴狀菌

落形成，進(jìn)一步生化鑒定。

6.2.3陰道加特納菌培養(yǎng)接種于5%羊血瓊脂平板，

5%-10%CO2環(huán)境中環(huán)境培養(yǎng)48小時(shí)，觀察有無形成針尖大小

（0.3-0.5）、圓形、光滑、不透明、不溶血（在人血或兔血瓊脂平板上

可出現(xiàn)B溶血）的菌落。

結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)參見《分支桿菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。

7.結(jié)果報(bào)告

報(bào)告菌名和抗菌藥物藥敏結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果。

注意事項(xiàng)

取陰道分泌物之前避免性生活、陰道沖洗和用藥。

臨床意義

正常的內(nèi)生殖道是無菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性

陰道）有多種細(xì)菌寄生，如尿道口的常見有葡萄球菌、類白喉棒狀桿

菌和非結(jié)核分枝桿菌，陰道常見有乳桿菌、雙歧桿菌、消化球菌等。

查見病原菌提示有細(xì)菌感染，如急、慢性前列腺炎，睪丸炎、精囊炎、

附睪炎、陰道炎，急慢性淋病等。常見病原菌主要有葡萄球菌、腸球

菌、鏈球菌、淋病奈瑟菌、大腸埃希菌、變形桿菌等。

參考文獻(xiàn)

[1]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL32:2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南.2008

[2]周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上?？茖W(xué)

技術(shù)出版社，2007

[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編全.國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第.三版.

南京：東南大學(xué)出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington：

ASMPress,2007

[5]ISO15189:2007醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則.2007

編寫人：AAA、BBB操作人：本室操作人員

批準(zhǔn)人：_______

文件編號(hào)：

XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科XXX-JY-CZ-WSW-0573

糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作版本:20140601

標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

業(yè)指導(dǎo)書生效日期:20140615

共3頁

1.目的

規(guī)范糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.適用范圍

糞便培養(yǎng)。

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型糞便、直腸拭子。

3.2標(biāo)本采集

3.2.1自然排便采集自然排便后，挑取其膿血、黏液部分2-3g,

液體糞便取絮狀物2-3ml,盛于滅菌容器內(nèi)，或置于保存液(運(yùn)送培

養(yǎng)基)、增菌培養(yǎng)基中送檢。

3.2.2直腸拭子如不易獲得糞便時(shí)，或排便困難病人及嬰兒，

可用直腸拭子采取，即以無菌棉拭用保存液或生理鹽水濕潤(rùn)后，插入

肛門內(nèi)4-5cm(幼兒約2-3cm)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)取出，插入卡-布(Cary-Blair)

運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)或無菌容器內(nèi)送檢。

3.2.3糞便標(biāo)本應(yīng)該立即送檢，室溫保存不超過2小時(shí)，如不能

及時(shí)送檢放入磷酸鹽甘油(PH7.0)或轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，但不能超過24小

時(shí)。培養(yǎng)艱難梭菌的標(biāo)本保存于-20°C以下。培養(yǎng)沙門菌和志賀菌的

標(biāo)本應(yīng)放置磷酸鹽甘油溶液中保存。保存彎曲桿菌和弧菌的標(biāo)本，需

加CaC12(100mg/L)試劑。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1糞便標(biāo)本放置時(shí)間超過2小時(shí)。

3.3.2送檢的糞便標(biāo)本混有尿液。

3.3.3直腸拭子未置于運(yùn)送培養(yǎng)基中。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、

麥克凱平板、相關(guān)生化試劑等。

4.2VITEK鑒定系統(tǒng)；革蘭陰性菌鑒定卡（GNI+）、革蘭陰性菌藥

敏卡（GNS）、革蘭陽性菌鑒定卡（GPI）、革蘭陽性菌藥敏卡（GPS）、

真菌鑒定卡（YBC）、藥敏紙片、TBA板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參

見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、C02培養(yǎng)

箱等。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見《質(zhì)量管理程序》

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。

涂片檢查糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形

態(tài)無法分辨是否為病原菌。因此

糞便標(biāo)本一般不作涂片檢查。只有懷疑霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致

腹瀉時(shí)，才作直接涂片檢查（觀察動(dòng)力和菌群比例）。

培養(yǎng)

6.2.1沙門-志賀菌培養(yǎng)參見《沙門菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》、《志

賀菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。

6.2.2致病大腸埃希菌培養(yǎng)參見《致病大腸埃希菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操

作規(guī)程》。

6.2.3霍亂弧菌培養(yǎng)參見《霍亂弧菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。

6.2.4副溶血弧菌培養(yǎng)參見《副溶血弧菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。

6.2.5小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)參見《小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。

6.2.6空腸彎曲菌培養(yǎng)《空腸彎曲菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。

6.2.7金黃色葡萄球菌培養(yǎng)《金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程》。

6.2.8艱難梭菌培養(yǎng)取水樣或黏液樣糞便立即接種于環(huán)絲氨酸

頭抱西丁果糖瓊脂（簡(jiǎn)稱CCFA）平板上，并將糞便作102-106稀釋

后定量接種。35°C厭氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時(shí)后，選擇粗糙型黃色菌落,

移種于葡萄糖苞肉培養(yǎng)基作毒素測(cè)定；同時(shí)涂片，懸滴檢查動(dòng)力、革

蘭染色及生化鑒定。

6.2.9真菌培養(yǎng)參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。

6.2.10氣單胞菌和鄰單胞菌的培養(yǎng)參見《氣單胞菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)

操作規(guī)程》和《鄰單胞菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。

6.2.11結(jié)核分枝桿菌參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程》。

7.結(jié)果報(bào)告

8.注意事項(xiàng)

查出腸道致病菌，報(bào)告其菌名和藥敏結(jié)果。

8.1空腸彎曲菌是微需氧菌,初次分離時(shí)需5%-10%CO2和85氮。

8.2痢疾病人要采集大量膿血標(biāo)本另行培養(yǎng)。

8.3糞便標(biāo)本有很多雜菌，但不能由此認(rèn)為糞便標(biāo)本的采集就無

需注意雜菌污染，為防止污染必須注意標(biāo)本的采集方法。

9.臨床意義

正常情況下腸道中多種細(xì)菌寄生，包括大量的厭氧菌、腸球菌、

大腸埃希菌、腸桿菌、變形桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌等。引起感染性腹瀉的

病原微生物有：（1）細(xì)菌性：產(chǎn)毒素型腹瀉，包括霍亂孤菌、腸毒型

大腸埃希菌等；侵襲型腹瀉，包括志賀菌、腸致病型大腸埃希菌和腸

侵襲性大腸埃希菌等；食物中毒，包括沙門菌、金黃色葡萄球菌、副

溶血弧菌、蠟樣芽抱桿菌和肉毒梭菌等；偽膜性型腸炎，包括艱難梭

菌或金黃色葡萄球菌；慢性腹瀉，可能由結(jié)核分枝桿菌引起。（2）真

菌性：念珠菌、毛霉菌等。（3）病毒性：輪狀病毒等。

危急值報(bào)告

培養(yǎng)出霍亂弧菌、傷寒沙門菌、致病性大腸埃希菌0157等及時(shí)

按傳染病報(bào)告，同時(shí)送CDC復(fù)核。

參考文獻(xiàn)

[1]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL32:2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南.2008

[2]周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上?？茖W(xué)

技術(shù)出版社，2007

[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編全.國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第.三版.

南京：東南大學(xué)出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington：

ASMPress,2007

[5]ISO15189:2007醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則.2007

編寫人：AAA、BBB操作人：本室操作人員

批準(zhǔn)人：_______

XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科膿液傷口標(biāo)本細(xì)菌學(xué)文件編號(hào)：

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程XXX-JY-CZ-WSW-0574

業(yè)指導(dǎo)書版本：20140601

生效日期：20140615

共2頁

1.目的

規(guī)范膿及傷口標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確

可靠。

2.適用范圍

膿液培養(yǎng)或涂片檢查。

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型膿液。

3.2標(biāo)本采集

3.2.1開放性膿性和膿性分泌物用無菌鹽水或75%酒精擦去表

面滲出物，用拭子深入潰瘍處采集2支拭子，1支為涂片檢查用，1

支作培養(yǎng)用。

3.2.2大面積燒傷的創(chuàng)面分泌物用滅菌棉拭取多部位創(chuàng)面的膿

液或分泌物，置滅菌試管內(nèi)（注明采集部位）送檢。

3.2.3封閉性膿腫消毒局部皮膚或粘膜表面后，用注射器抽取，

將膿液注入多功能培養(yǎng)瓶或無菌試管內(nèi)送檢。疑為厭氧菌感染時(shí)，應(yīng)

作床邊接種或置厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1標(biāo)本標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符。

3.3.2標(biāo)本不是無菌留取。

3.3.3送標(biāo)本的時(shí)間在采集標(biāo)本后超過2小時(shí)。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、

麥克凱平板、相關(guān)生化試劑等。

4.2VITEK鑒定系統(tǒng)；革蘭陰性菌鑒定卡（GNI+）、革蘭陰性菌藥

敏卡（GNS）、革蘭陽性菌鑒定卡（GPI）、革蘭陽性菌藥敏卡（GPS）、

真菌鑒定卡（YBC）、藥敏紙片、TBA板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參

見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、C02培養(yǎng)

箱等。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見《質(zhì)量管理程序》

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。

6.1涂片檢查革蘭染色鏡檢，報(bào)告“查見革蘭X性菌，形似X

X菌”或報(bào)告“未查見細(xì)菌”。

6.2培養(yǎng)

6.2.1一般細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本接種于接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂

平板和麥康凱（或EMB、中國藍(lán)）瓊脂平板，置于5%-10%CO2環(huán)境

中，35°C培養(yǎng)18-24小時(shí)，根據(jù)菌落及染色形態(tài)特點(diǎn)，作出初步判

斷，作出初步判斷，再按各類細(xì)菌的生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。

6.2.2厭氧菌培養(yǎng)取膿液標(biāo)本接種于厭氧血瓊脂平板及其他選擇

平板，置于厭氧菌環(huán)境培養(yǎng)，根據(jù)生長(zhǎng)情況及涂片染色結(jié)果，按厭氧

菌生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。

6.2.3嗜血桿菌及奈瑟菌培養(yǎng)接種于巧克力瓊脂平板，置

5%-10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)。

6.2.4結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)

程》。

6.2.5真菌培養(yǎng)可用沙氏培養(yǎng)基。

7.結(jié)果報(bào)告

查見致病菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。

8.注意事項(xiàng)

8.1對(duì)于某些特殊病人（如氣性壞疽病人），在菌種鑒定及藥敏試

驗(yàn)結(jié)果尚未報(bào)出之前，根據(jù)涂片鏡檢情況，采取治療措施。

8.2厭氧菌培養(yǎng)取得樣本后，拭子應(yīng)立即置于厭氧運(yùn)送管，盡可

能少讓樣本暴露于空氣中。穿刺時(shí)最好以針筒直接抽取，避免接觸環(huán)

境中氧氣。

9.臨床意義

從膿液及創(chuàng)傷標(biāo)本中能檢出的病原菌微生物種類很多，最常見的

由葡萄球菌和鏈球菌引起的局部化膿性感染，包括有毛囊炎、疳、癰、

甲溝炎、扁桃體炎、乳腺炎、中耳炎、外耳道拜腫、外耳道炎、細(xì)菌

性結(jié)膜炎、膿皰瘡、外科切口及創(chuàng)傷感染等。化膿性骨髓炎、化膿性

關(guān)節(jié)炎的主要致病菌是金黃色葡萄菌。慢性骨髓炎和慢性化膿性關(guān)節(jié)

炎病原菌中，除上述細(xì)菌外，主要為結(jié)核分枝桿菌。膿液標(biāo)本中可檢

出銅綠假單胞菌、變形桿菌和類白喉棒狀桿菌等，常為繼發(fā)感染或污

染所致。氣性壞疽主要致病菌為產(chǎn)氣莢膜梭菌，其次為水腫梭菌、敗

毒梭菌和溶組織梭菌等。壞疽常繼發(fā)葡萄球菌、鏈球菌、大腸埃希菌

或其他需氧菌感染。器官膿腫和機(jī)體深部組織的膿腫多為厭氧菌感染。

危急值報(bào)告

培養(yǎng)出產(chǎn)氣莢膜梭菌及時(shí)按傳染病報(bào)告。

參考文獻(xiàn)

[1]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL32:2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南.2008

[2]周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上?？茖W(xué)

技術(shù)出版社，2007

[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編全.國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第.三版.

南京：東南大學(xué)出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington：

ASMPress,2007

[5]ISO15189:2007醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則.2007

編寫人：AAA、BBB操作人：本室操作人員

批準(zhǔn)人：________

文件編號(hào)：

XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科中心靜脈導(dǎo)管標(biāo)本細(xì)XXX-JY-CZ-WSW-0575

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)版本:20140601

業(yè)指導(dǎo)書程生效日期:20140615

共1頁

1.目的

規(guī)范中心靜脈導(dǎo)管標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果

準(zhǔn)確可靠。

2.適用范圍

中心靜脈導(dǎo)管細(xì)菌培養(yǎng)。

3.標(biāo)本

中心靜脈導(dǎo)管標(biāo)本。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、

麥克凱平板、相關(guān)生化試劑等。

4.2VITEK鑒定系統(tǒng)；革蘭陰性菌鑒定卡（GNI+）、革蘭陰性菌

藥敏卡（GNS）、革蘭陽性菌鑒定卡（GPI）、革蘭陽性菌藥敏卡（GPS）、

真菌鑒定卡（YBC）、藥敏紙片、TBA板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參

見試劑說明書。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、C02培

養(yǎng)箱等。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控

參見《質(zhì)量管理程序》

6.檢驗(yàn)步驟

用無菌鐐子將5cm導(dǎo)管（近心端）在血瓊脂平板和麥康凱平板上

交叉滾動(dòng)四次，然后棄之，在35°C,5%-10%CO2孵育箱培養(yǎng)18-24

小時(shí)，根據(jù)菌落及染色形態(tài)特點(diǎn)，作出初步判斷，再按各類細(xì)菌的生

物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。

7.結(jié)果報(bào)告

7.1若48小時(shí)無細(xì)菌生長(zhǎng)，報(bào)告“培養(yǎng)2日無細(xì)菌生長(zhǎng)”。

7.2報(bào)告菌名和抗菌藥物藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

8.注意事項(xiàng)

8.1如血瓊脂平板上生長(zhǎng)》15個(gè)菌落，提示有潛在導(dǎo)管相關(guān)性感

染，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，同時(shí)建議抽血作血培養(yǎng)。

8.2若為2種細(xì)菌生長(zhǎng)，且菌落計(jì)數(shù)均215個(gè)菌落/平板，均應(yīng)進(jìn)

行細(xì)菌鑒定和藥敏，建議作血培養(yǎng)確證。

9臨床意義

判斷中心靜脈導(dǎo)管是否有細(xì)菌生長(zhǎng)，指導(dǎo)臨床醫(yī)師是否拔除導(dǎo)管

還是保留導(dǎo)管。

參考文獻(xiàn)

口］吳愛武主編.床微生物學(xué)與檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo).第三版.北京：人民

衛(wèi)士出版社，2007

⑵中華醫(yī)學(xué)重癥醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì).血管內(nèi)導(dǎo)管相關(guān)感染的預(yù)防

與治療指南(2007).2007

編寫人：AAA、BBB操作人：本室操作人員

批準(zhǔn)人：________

XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科真菌標(biāo)本檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操文件編號(hào)：

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作作規(guī)程XXX-JY-CZ-WSW-0576

業(yè)指導(dǎo)書版本:20140601

生效日期：20140615

共3頁

1.目的

規(guī)范真菌標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可

士.

4^o

2.適用范圍

各類真菌檢測(cè)的標(biāo)本。

3.標(biāo)本采集及處理

3.1標(biāo)本類型痰、尿、糞、膿液、腦脊液、血、拭子、皮屑、

甲屑、氣管穿刺抽取的痰液等。

3.2標(biāo)本采集與處理

3.2.1痰液、氣管穿刺抽取的痰液。

3.2.2尿液早晨中段尿10ml,離心取沉淀液1ml,作真菌涂片

及培養(yǎng)。

3.2.3口腔、咽喉、外耳道、陰道、和直腸粘膜的標(biāo)本應(yīng)迅速

放入內(nèi)裝l-2ml無菌蒸鐳水的試管送檢。常規(guī)KOH涂片及SDA培養(yǎng)。

3.2.4糞便無菌盒送檢，挑取黏液、膿血接種于含氯霉素培養(yǎng)

基上。

3.2.5膿液膿液標(biāo)本應(yīng)置無菌廣口有蓋玻璃瓶或小的無菌平皿

中，立即送檢。

3.2.6腦脊液采集于無菌試管3-5mL立刻送檢。離心后以無菌

吸管吸取離心沉淀物1mL作墨汁涂片鏡檢和培養(yǎng)(SDA)25°C及

37°一周。

3.2.7血液分別于左右兩側(cè)無菌抽血3-5mL立即置于腦心浸出

液肉湯。

3.2.8體液支氣管積液、關(guān)節(jié)腔積液、心包積液、腹水等10ml

離心沉淀后取0.5ml沉淀液作直接鏡檢（注意顆粒）及培養(yǎng)。

3.2.9組織標(biāo)本置于無菌平皿中立即送檢，置無菌研缽或組織

勻漿器加2ml蒸儲(chǔ)水，研磨成漿或切成l-2mm3的小塊作真菌直接鏡

檢（KOH涂片）及培養(yǎng)。

3.2.10皮屑皮損的邊緣、皰壁、膿液、深層趾（指）間皮屑或

活動(dòng)邊緣皮屑。取材前75%酒精棉球消毒取材處，標(biāo)本作真菌直接鏡

檢（KOH涂片）及培養(yǎng)。

3.2.11甲屑用細(xì)鏗或牙簽研磨鉆取病甲與正常甲交界處并且貼

近甲床部的甲屑，標(biāo)本用酒精浸泡待干燥后以十點(diǎn)接種法分別種于含

放線菌酮及不含放線菌酮的SDA平皿，25°C-28°C培養(yǎng)3周，并

同時(shí)作KOH涂片。

3.2.12毛發(fā)取病發(fā)15根、75%酒精消毒,3-5根作直接鏡檢，

5-10根種于SDA斜面（加氯霉素），稍劃破斜面掩埋。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)及處理參見《標(biāo)本拒收程序》

4.試劑、培養(yǎng)基及儀器

4.1接種針、電熱灼燒器、顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、全排式

生物安全柜等。

4.2常用培養(yǎng)基及血培養(yǎng)瓶放置于2-8°C冰箱，并在有效期內(nèi)

使用。

4.3沙氏葡萄糖瓊脂（SDA）,科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基米粉吐

溫瓊脂，察氏瓊脂，馬鈴薯葡萄糖瓊脂，七葉甘瓊脂，咖啡酸瓊脂，

API20CAUX板條，10%KOH,正常人或羊血清。

5.真菌鑒定的質(zhì)控（略）

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。

6.1涂片檢查標(biāo)本置于載玻片后加1滴10%KOH,覆上蓋玻片,

微加熱后輕壓蓋玻片，驅(qū)逐氣泡并壓勻標(biāo)本，再以濾紙條吸去周圍溢

液。先在低倍鏡下尋找（遮去強(qiáng)光源），發(fā)現(xiàn)真菌的菌絲或泡子后經(jīng)高

倍證實(shí)，報(bào)告“真菌直接鏡檢陽性”。

6.2培養(yǎng)

6.2.1糞、痰標(biāo)本可用無菌棉簽或接種針挑取帶血、黏液的病理

部分，接種于含氯霉素的沙氏葡萄糖瓊脂及科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)

基，置于37°C培養(yǎng)48小時(shí)。

6.2.2支氣管保護(hù)性毛刷標(biāo)本懸液、肺泡灌洗液、體液及尿等液

體標(biāo)本，可以無菌吸管吸取離心沉淀物約0.5mL接種于上述培養(yǎng)基,

37°C孵育48小時(shí)后如未見菌落生長(zhǎng)，可報(bào)告“無真菌生長(zhǎng)”。

6.2.3腦脊液取離心沉淀物約0.5ml接種于2管沙氏葡萄糖瓊脂斜

面，分別置25°C及37°C孵育一周。

6.2.4血分別左右兩側(cè)無菌抽血3?5m1,立即置于腦心浸出液

肉湯。

6.2.5皮屑、毛發(fā)接種于沙氏葡萄糖瓊脂斜面，置25°C?38°C

培養(yǎng)2周。

6.2.6甲屑以十點(diǎn)接種法分別種于含放線菌酮及不含放線菌酮的

沙氏平皿25°C?28°C

培養(yǎng)3周。

7.結(jié)果報(bào)告

所有的標(biāo)本如分離出真菌，應(yīng)盡可能鑒定至種，報(bào)告“XX菌生

長(zhǎng)”，尤其對(duì)于念珠菌中克柔念珠菌對(duì)氟康噗天然耐藥，光滑念珠菌

對(duì)嗖類藥物也逐漸表現(xiàn)出不敏感傾向。

8.注意事項(xiàng)

真菌血培養(yǎng)每天檢查完畢后需搖動(dòng)培養(yǎng)基，37°C振蕩培養(yǎng)可加

速真菌的生長(zhǎng)，提高檢出率；不作直接鏡檢，因其直接鏡檢陽性率低。

9.臨床意義

真菌根據(jù)感染部位不同分為淺部真菌和深部真菌兩大類，前者主

要累及皮膚、毛發(fā)及甲板，后者感染皮下組織及內(nèi)臟器官。準(zhǔn)確鑒定

至種的水平可以為臨床診斷及治療提供重要依據(jù)，特別四部分種對(duì)抗

真菌藥物的敏感性存在差異。制定真菌鑒定規(guī)范的操作程序是保證結(jié)

果的準(zhǔn)確性與可靠性的基礎(chǔ)。

危急值報(bào)告

血培養(yǎng)陽性涂片確定真菌及腦脊液墨汁涂片發(fā)現(xiàn)新型隱球菌后，

應(yīng)及時(shí)向臨床報(bào)告。

安全防護(hù)措施

12.1操作人員在工作過程中要穿隔離衣、戴口罩和手套。

12.2所有報(bào)告結(jié)果后的標(biāo)本及污染物，必須經(jīng)高壓滅菌、焚燒或

浸泡殺菌劑中。

12.3若送檢途中培養(yǎng)瓶不慎打破，應(yīng)封鎖現(xiàn)場(chǎng)，進(jìn)行消毒處理。

11.4標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用密封容器。

參考文獻(xiàn)

川孫鶴齡主編.醫(yī)學(xué)真菌鑒定初稿.北京:科學(xué)出版社,1987

⑵吳紹熙主編.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)真菌檢驗(yàn)手冊(cè).第二版.北京:中國協(xié)和醫(yī)

科大學(xué)出版社,2005

⑶上海第一醫(yī)院華山醫(yī)院皮膚科真菌室.臨床真菌檢驗(yàn).上海:上

海第一醫(yī)院出版社.1975

[4]王家俊主編，臨床真菌檢驗(yàn),上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,1995

[5]秦啟賢主編.臨床真菌學(xué).上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,2001

[6]王端禮主編，醫(yī)學(xué)真菌學(xué)一實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)指南，北京：人民衛(wèi)生

出版社，2004

[7]GlennSBulmer,鄭岳臣主編，漢英對(duì)照醫(yī)學(xué)真菌學(xué)，上海：

上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005

編寫人：AAA、BBB操作人：本室操作人員

批準(zhǔn)人：________

XXX醫(yī)院檢驗(yàn)科血液及骨髓標(biāo)本細(xì)菌文件編號(hào)：

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室作學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程XXX-JY-CZ-WSW-0577

業(yè)指導(dǎo)書版本:20140601

生效日期：20140615

共3頁

1.目的

規(guī)范血液及骨髓標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)

確可靠。

2.適用范圍

血液及骨髓。

3.標(biāo)本

3.1標(biāo)本類型血液及骨髓。

3.2標(biāo)本采集

3.2.1采血時(shí)間抗菌藥物治療前，發(fā)熱初期或高峰時(shí)抽血。

3.2.2采血頻率對(duì)懷疑菌血癥的成年病人，推薦同時(shí)在不同部位

采集2-3套（每套包括一瓶需氧瓶，一瓶厭氧瓶或者兩套需氧瓶），對(duì)

感染性心內(nèi)膜炎和真菌血癥則應(yīng)多次采血；嬰幼兒病人，推薦同時(shí)在

不同部位采集2套，可不做厭氧培養(yǎng)。

3.2.3采血量以培養(yǎng)基的1/10為宜，成人一次采血5-lOml,嬰

幼兒為l-2mlo

3.2.4骨髓標(biāo)本用骨髓穿刺針從骼骨采集。

3.3標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

3.3.1血培養(yǎng)瓶破裂或有明顯污染。

3.3.2血培養(yǎng)瓶標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符。

3.3.3用過期的培養(yǎng)瓶采集標(biāo)本、采血量不足等。

3.3.4對(duì)于不合格標(biāo)本，應(yīng)及時(shí)通知采集人員重新留取標(biāo)本。

3.3.5標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置

室溫，切勿放入冰箱。冬季血培養(yǎng)瓶在送檢過程應(yīng)采取一定的保暖措

施。

4.試劑、儀器

4.1革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、

麥糠凱平板、相關(guān)生化試劑等。

4.2BACT/ALERT3D或BACTEC9000全自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)、鑒

定系統(tǒng)。成人需氧培養(yǎng)瓶、厭氧培養(yǎng)瓶、兒童培養(yǎng)瓶、革蘭陰性菌鑒

定卡（GNI+）、革蘭陰性菌藥敏卡（GNS）、革蘭陽性菌鑒定卡（GPI）、

革蘭陽性菌藥敏卡（GBS）、真菌鑒定卡（TBC）、藥敏紙片、TTB板

條等。

4.3接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、co2培養(yǎng)

箱等。

4.4試劑的有效期和使用參照試劑說明書。

5.細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控。

參見《質(zhì)量管理程序》

6.檢驗(yàn)步驟

接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。門診病人要同時(shí)登記

住址，聯(lián)系電話等病人信息。

6.1自動(dòng)化培養(yǎng)將血培養(yǎng)瓶置全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中。當(dāng)標(biāo)本有菌

生長(zhǎng)時(shí)，儀器發(fā)出陽性報(bào)警，應(yīng)立即用無菌注射器抽取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液作

直接涂片革蘭染色，鏡檢，將結(jié)果向臨床醫(yī)師報(bào)告，同時(shí)轉(zhuǎn)種血瓊脂

平板，麥糠凱平板或加做巧克力平板，并進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)，置35°

C、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時(shí)。從瓊脂平板上挑取菌落進(jìn)行涂片

染色及觸酶和氧化酶試驗(yàn)。革蘭陽性菌和革蘭陰性菌分別選用GPI及

GNI上機(jī)進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)或者做K-B法藥敏試驗(yàn)(具體操作

見《藥物敏感性標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》)

6.2手工培養(yǎng)

6.2.1將血培養(yǎng)置35°孵育箱，經(jīng)18-20小時(shí)孵育在血瓊脂平板或

巧克力平板上盲目轉(zhuǎn)種一次。

6.2.2盲目轉(zhuǎn)種后，培養(yǎng)瓶繼續(xù)孵育至第五日，每日觀察一次有

無菌生長(zhǎng)，并搖勻繼續(xù)培養(yǎng)，下列幾種情況提示有細(xì)菌生長(zhǎng)。

根據(jù)肉眼觀察,對(duì)有細(xì)菌生長(zhǎng)跡象,取菌懸液涂片做革蘭染色,

同時(shí)分離培養(yǎng)，接種需氧血瓊脂平板、麥糠凱平板或加做巧克力平板,

并進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)，置35°C、CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時(shí)。次日

純培養(yǎng)再進(jìn)行鑒定及藥敏試驗(yàn)。