高中生物常用的菌種的篩選方法

高中生物常用的菌種的篩選方法高中生物常用的菌種的篩選方法〔1〕施加選擇性壓力分開(kāi)法主要是利用不同種類(lèi)的微生物其生長(zhǎng)繁殖對(duì)環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)的要求不同，如溫度、pH、滲透壓、氧氣、碳源、氮源等，人為控制這些條件，使之利于某類(lèi)或某種微生物生長(zhǎng)，而不利于其他種類(lèi)微生物的生存，以達(dá)到使目的菌種占優(yōu)勢(shì)。而得以快速分開(kāi)純化的目的。如可以控制培養(yǎng)時(shí)的氧，可將好氧微生物和厭氧微生物分開(kāi)；通過(guò)控制溫度，可將嗜熱微生物和非嗜熱微生物分開(kāi)；控制pH，可將嗜酸、嗜堿微生物分開(kāi)等。在分開(kāi)培養(yǎng)基中也可以加入不同的抗生素或試劑來(lái)增加選擇性。如在分開(kāi)放線菌和細(xì)菌時(shí)，可加入抗真菌抗生素；分開(kāi)真菌時(shí)，可加入抗細(xì)菌藥物。〔2〕隨機(jī)分開(kāi)方法有些微生物的產(chǎn)物對(duì)篩選沒(méi)有直接的選擇性指示作用，因此常采納隨機(jī)分開(kāi)方法分開(kāi)。A、抗生素產(chǎn)生菌的分開(kāi)抗生素產(chǎn)生菌的分開(kāi)常用抑菌圈法。實(shí)驗(yàn)必必需用工具菌：采納抗生素的敏感菌，傳統(tǒng)上常用金黃色葡萄球菌和枯草桿菌。B、抗腫瘤藥物產(chǎn)生菌的分開(kāi)抗腫瘤藥物產(chǎn)生菌的分開(kāi)常用方法：生化誘導(dǎo)法、SOS生色檢測(cè)法、DNA修復(fù)能力突變株。原理是利用DNA的損傷，微生物發(fā)生突變。B1、生化誘導(dǎo)法：將大腸桿菌的lacZ基因連接在λ噬菌體的PL啟動(dòng)子下，當(dāng)DNA損傷時(shí)，誘發(fā)λ阻遏物CI分解，PL啟動(dòng)子啟動(dòng)lacZ基因轉(zhuǎn)錄，測(cè)定表達(dá)的'?-半乳糖苷酶活性，來(lái)檢測(cè)藥物的存在。B2、SOS生色檢測(cè)法：利用當(dāng)DNA損傷時(shí)，可活化yecA蛋白，進(jìn)而分解噬菌體的阻遏蛋白，再引起sifA基因啟動(dòng)lacZ基因轉(zhuǎn)錄，測(cè)定表達(dá)的?-半乳糖苷酶活性，來(lái)檢測(cè)藥物的存在。C、生長(zhǎng)因子產(chǎn)生菌的分開(kāi)以氨基酸產(chǎn)生菌為例，介紹篩選方法。首先將待試菌接入加了抗真菌的化合物〔如亞胺環(huán)己酮〕的分開(kāi)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，然后采納影印法，將菌落復(fù)印到能支持氨基酸產(chǎn)生菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2-3天后，用紫外線殺司長(zhǎng)好的菌落，再往此平板上面鋪一層相應(yīng)營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株菌懸液，培養(yǎng)16小時(shí)后，被殺死的氨基酸產(chǎn)生菌的菌落四周應(yīng)有一檢測(cè)菌的生長(zhǎng)圈。〔3〕目的微生物分開(kāi)A、依據(jù)形態(tài)篩選突變株B、依據(jù)平板菌落生化反應(yīng)篩選變株透明圈法、呈色圈法、抑菌圈法、渾濁圈法等。①透明圈法：在平板培養(yǎng)基中加入溶解性較差的底物，使培養(yǎng)基混濁。能分解底物的微生物便會(huì)在菌落四周產(chǎn)生透明圈，圈的大小初步反應(yīng)該菌株利用底物的能力。該法在分開(kāi)水解酶產(chǎn)生菌時(shí)采納較多，如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核酸酶產(chǎn)生菌都會(huì)在含有底物的選擇性培養(yǎng)基平板上形成肉眼可見(jiàn)的透明圈。在分開(kāi)某種產(chǎn)生有機(jī)酸的菌株時(shí)，也通常采納透明圈法進(jìn)行初篩。在選擇性培養(yǎng)基中加入碳酸鈣，使平板成混狀，將樣品懸浮液涂抹到平板上進(jìn)行培養(yǎng)，由于產(chǎn)生菌能夠把菌落四周的碳酸鈣水解，形成清楚的透明圈，可以輕易地鑒別出來(lái)。分開(kāi)乳酸產(chǎn)生菌時(shí)，由于乳酸是一種較強(qiáng)的有機(jī)酸，因此，在培養(yǎng)基中加入的碳酸鈣不僅有鑒別作用，還有酸中和作用。②變色圈法：關(guān)于一些不易產(chǎn)生透明圈產(chǎn)物的產(chǎn)生菌，可在底物平板中加入指示劑或顯色劑，使所必需微生物能被快速鑒別出來(lái)。如篩選果膠酶產(chǎn)生菌時(shí)，用含0.2%果膠為惟一碳源的培養(yǎng)基平板，對(duì)含微生物樣品進(jìn)行分開(kāi)，待菌落長(zhǎng)成后，加入0.2%剛果紅溶液染色4h，具有分解果膠能力的菌落四周便會(huì)出現(xiàn)絳紅色水解圈。在分開(kāi)谷氨酸產(chǎn)生菌時(shí)，可在培養(yǎng)基中加入溴百里酚藍(lán)，它是一種酸堿指示劑，變色范圍在pH6.2～7.6，當(dāng)pH在6.2以下時(shí)為黃色，pH7.6以上為藍(lán)色。假設(shè)平板上出現(xiàn)產(chǎn)酸菌，其菌落四周會(huì)變成黃色，可以從這些產(chǎn)酸菌中篩選谷氨酸產(chǎn)生菌。③生長(zhǎng)圈法：生長(zhǎng)圈法通常用于分開(kāi)篩選氨基酸、核苷酸和維生素的產(chǎn)生菌。工具菌是一些相對(duì)應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株。將待檢菌涂布于含高濃度的工具菌并缺少所必需營(yíng)養(yǎng)物的平板上進(jìn)行培養(yǎng)，假設(shè)某菌株能合成平板所必需的營(yíng)養(yǎng)物，在該菌株的菌落四周便會(huì)形成一個(gè)混濁的生長(zhǎng)圈。如嘌呤營(yíng)養(yǎng)缺陷型大腸桿菌〔如E.coliP264〕與不含嘌呤的瓊脂混合倒平板，在其上涂布含菌樣品保溫培養(yǎng)，四周出現(xiàn)生長(zhǎng)圈的菌落即為嘌呤產(chǎn)生菌。④抑