食品理化檢驗(yàn) 脂類(lèi)的測(cè)定

脂類(lèi)的測(cè)定

《食品分析》課件

2021/5/91學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握：索氏提取法測(cè)定粗脂肪的原理及注意事項(xiàng)，不同提取溶劑的性質(zhì)與各自的優(yōu)缺點(diǎn)；掌握油脂酸價(jià)、過(guò)氧化值的定義和測(cè)定方法。熟悉：粗脂肪的概念；各類(lèi)脂肪測(cè)定方法的原理和適用范圍。了解：脂肪的存在狀態(tài)；油脂碘價(jià)和羰基價(jià)的測(cè)定原理及方法。2021/5/92主要內(nèi)容食品中脂類(lèi)物質(zhì)概述樣品處理方法和萃取劑食品中總脂的測(cè)定食品中磷脂的測(cè)定食用油的檢測(cè)指標(biāo)2021/5/93食品中的脂類(lèi)脂類(lèi)脂肪（甘油三酯）含95％類(lèi)脂(脂肪酸、糖脂、磷脂、甾醇、固醇)脂類(lèi)是脂肪和類(lèi)脂的總稱(chēng)大多數(shù)動(dòng)、植物食品都含有天然脂肪或類(lèi)脂化合物，但含量不同。2021/5/94脂類(lèi)物質(zhì)的功能和測(cè)定意義提供熱量；37.62kJ/g提供必需的脂肪酸：亞油酸、亞麻酸；脂溶性維生素的載體，VE、VD、VA；賦予食品特殊風(fēng)味、組織結(jié)構(gòu)、品質(zhì)、外觀(guān)、口感。脂類(lèi)含量是評(píng)價(jià)食品品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、加工和保藏工藝的指標(biāo)。2021/5/95脂類(lèi)物質(zhì)的化學(xué)特性脂類(lèi)物質(zhì)的存在形式不溶解于水，但溶于有機(jī)溶劑，如乙醚、石油醚、甲醇－氯仿等。游離態(tài)結(jié)合態(tài)2021/5/96測(cè)定脂類(lèi)的常用有機(jī)溶劑乙醚溶解脂肪的能力強(qiáng)，應(yīng)用最多乙醚沸點(diǎn)低（34.6℃），易燃乙醚可飽和2%的水，含水乙醚在萃取脂肪的同時(shí)，會(huì)抽提出糖分等非脂成分必須用無(wú)水乙醚作提取劑，被測(cè)樣品也要事先烘干2021/5/97沸點(diǎn)比乙醚高（30~60℃，60~90℃等）溶解脂肪能力比乙醚弱吸收水分比乙醚少，允許樣品含微量的水分有時(shí)也采取乙醚+石油醚共用石油醚測(cè)定脂類(lèi)的常用有機(jī)溶劑乙醚、石油醚都只能提取樣品中游離態(tài)的脂肪結(jié)合態(tài)的脂肪要用酸或堿處理破壞其結(jié)合態(tài)2021/5/98氯仿—甲醇我國(guó)油脂工業(yè)常用的一種溶劑。74.08％己烷，16.4％環(huán)己烷，另外還有戊烷、丁烷、烯烴等。6#輕汽油：對(duì)脂蛋白、磷脂提取效率較高特別適用于水產(chǎn)品、家禽、蛋制品中脂肪的提取測(cè)定脂類(lèi)的常用有機(jī)溶劑2021/5/99樣品的預(yù)處理1.固體樣品要粉碎注意粉碎過(guò)程中的溫度，防止脂肪氧化2.要干燥的樣品溫度低——酶活力高，脂肪易降解溫度高——脂肪易氧化成結(jié)合態(tài)較理想的方法是真空冷凍干燥法3.酸水解對(duì)于乙醚不能滲入內(nèi)部的或含結(jié)合態(tài)脂肪。4.易結(jié)塊樣品可加海砂增加樣品表面積、減少樣品含水量2021/5/910食品中脂類(lèi)物質(zhì)的測(cè)定索氏提取法（代表性方法）酸性乙醚提取法（結(jié)合態(tài)脂肪)羅茲－哥特里法（主要用于乳制品）巴布科氏法和蓋勃氏法氯仿－甲醇抽提法2021/5/911索氏提取法原理脂肪、磷脂、色素、固醇、芳香油等2021/5/912適用范圍與特點(diǎn)脂類(lèi)含量較高，結(jié)合態(tài)的脂類(lèi)含量較少能烘干磨細(xì)，不易吸濕結(jié)塊的樣品的測(cè)定測(cè)得的只是游離態(tài)脂肪，而結(jié)合態(tài)脂肪測(cè)不出來(lái)索氏提取法2021/5/913儀器

①索氏提取器。

②電熱恒溫水浴（50～80℃）

③電熱恒溫烘箱（80～120℃）索氏提取法2021/5/914樣品處理：1）固體樣品，稱(chēng)取干燥并研細(xì)的樣品2-5g，必要時(shí)伴以海沙，無(wú)損地移入濾紙筒2）半固體或液體樣品：稱(chēng)取5-10g于蒸發(fā)皿中，加入海砂約20g，于沸水浴上干燥后，再于95-105℃烘干、研細(xì)，全部移入濾紙筒內(nèi)。索氏提取法2021/5/915測(cè)定過(guò)程濾紙筒的制備樣品制備索氏提取器的準(zhǔn)備抽提回收溶劑稱(chēng)重計(jì)算索氏提取法2021/5/916將濾紙裁成8cm×15cm大小，以直徑為2.0cm的大試管為模型，將濾紙緊靠試管壁卷成圓筒型，把底端封口，內(nèi)放一小片脫脂棉，用白細(xì)線(xiàn)扎好定型，在100-1050C烘箱中烘至恒量（準(zhǔn)確至0.0002g）。濾紙筒的制備2021/5/917固體樣品:干燥→2~5g磨碎→加入濾紙筒半固體樣品或者液體樣品:5~10g蒸發(fā)皿中→加入沙子→烘干→磨碎

樣品制備2021/5/918索氏抽提取器的準(zhǔn)備回流冷凝管提脂管提脂燒瓶索氏抽提取器抽提脂肪之前應(yīng)將各部分洗滌干凈并干燥，提脂燒瓶需烘干并稱(chēng)至恒量

2021/5/919濾紙筒放入提脂管倒入乙醚乙醚量約為燒瓶體積2/3接上回流冷凝器恒溫水浴中抽提抽提水浴加熱，能否用明火？乙醚80滴/min左右抽提3－12h至抽提完全2021/5/920如何檢驗(yàn)脂肪是否抽提完全？可用濾紙或毛玻璃檢查，由提脂管下口滴下的乙醚滴在濾紙或毛玻璃上，揮發(fā)后不留下痕跡。2021/5/921

回收溶劑并稱(chēng)重取下接受瓶，于水浴上蒸去殘留乙醚。用紗布擦凈燒瓶外部，于100~105℃烘箱中烘至恒量并準(zhǔn)確稱(chēng)量。

接受燒瓶所增加的質(zhì)量即為脂肪重量濾紙筒及樣品在通風(fēng)廚風(fēng)干→100~105℃烘箱中烘至恒量→準(zhǔn)確稱(chēng)量。

濾紙筒及樣品所減少的質(zhì)量即為脂肪質(zhì)量2021/5/922m：試樣質(zhì)量，g;m1

：提脂瓶質(zhì)量，g;m2

：提脂瓶與樣品所含脂肪質(zhì)量，g;或計(jì)算2021/5/923樣品應(yīng)干燥，否則會(huì)增加水溶物質(zhì)的提取濾紙筒要嚴(yán)密，但不要過(guò)緊，以免影響溶劑滲透樣品不要超過(guò)回流管的高度，以防樣品中的脂肪不能提盡糖及糊精含量高的樣品。樣品→加入冷水→過(guò)濾→殘?jiān)?濾紙→烘干→放入抽提管注意事項(xiàng)2021/5/924水浴溫度不能過(guò)高，80滴/min為宜冷凝管上最好連一干燥管或塞上干燥脫脂棉揮發(fā)乙醚或石油醚時(shí)，切忌直接用火加熱反復(fù)加熱→脂類(lèi)氧化→待測(cè)樣增量。若質(zhì)量增加時(shí)，以增量前的質(zhì)量做為恒量。乙醚或石油醚應(yīng)純凈，不含水、過(guò)氧化物和醇類(lèi)。注意事項(xiàng)2021/5/925過(guò)氧化物檢查方法：取乙醚6ml加入10%碘化鉀溶液2ml，用水振搖放置1min，若碘化鉀層出現(xiàn)黃色證明有過(guò)氧化物存在。此乙醚需經(jīng)處理后方可使用。乙醚的處理：于乙醚中加入1/10~1/20體積的200g/L硫代硫酸鈉溶液洗滌，再用水洗，然后加入少量無(wú)水氧化鈣或無(wú)水硫酸鈉脫水，于水浴上進(jìn)行蒸餾。乙醚過(guò)氧化物檢查方法和乙醚的處理2021/5/926氯仿－甲醇抽提法P104原理氯仿-甲醇-水結(jié)合脂游離脂樣品過(guò)濾濾液濃縮蒸干，殘留物中加入石油醚抽提蒸餾、除去溶劑稱(chēng)重2021/5/927適宜于高結(jié)合脂含量的樣品，尤其是高磷脂含量，如雞蛋、魚(yú)類(lèi)、肉類(lèi)等。對(duì)于不含水分的樣品，如果用此法，則應(yīng)該加入適量水分。適用范圍及注意事項(xiàng)2021/5/928樣品+HCl+H2O游離態(tài)脂+乙醇+乙醚+石油醚回收溶劑,測(cè)定粗脂肪含量加熱水解抽提酸性乙醚提取法原理粗脂肪結(jié)合脂變游離2021/5/929適用范圍各類(lèi)食品中總脂肪的測(cè)定（游離脂肪+結(jié)合脂肪）尤其對(duì)于容易吸濕、結(jié)塊、不易烘干的食品，不能采用索氏提取法時(shí)，此法效果較好。不適合含糖高的食品（糖遇強(qiáng)酸易炭化）不適宜磷脂含量高的樣品2021/5/930樣品制備水解（加鹽酸）水浴70-80℃，40-50min反復(fù)抽提加乙醇,乙醚,石油醚取上層乙醚層，水浴蒸干干燥、稱(chēng)重計(jì)算過(guò)程2021/5/931乙醇的作用：促使蛋白沉淀、防止乳化、溶解碳水化合物。石油醚作用：降低乙醇和乙醚的相互作用，促進(jìn)分層。注意事項(xiàng)2021/5/932羅茲－哥特里法(堿性乙醚提取法）原理樣品+氨水+乙醇破壞膠體及脂肪球膜游離結(jié)合脂以上樣品+乙醚+石油醚抽提粗脂肪回收溶劑,干燥,稱(chēng)重2021/5/933羅茲哥特里抽脂瓶氨水+乙醇乙醚+石油醚2021/5/934此法用于測(cè)定乳制品中的脂含量。NH3.H2O能破壞膠體介質(zhì)和脂肪球，釋放脂肪。醇作用是沉淀蛋白，防止乳化，溶解醇可溶性物質(zhì)。石油醚的作用是降低乙醚極性，促進(jìn)乙醇、水和乙醚分層。注意事項(xiàng)2021/5/935巴布科克氏法和蓋勃氏法原理乳制品+高濃度H2SO4破壞脂肪球膜，脂肪游離出來(lái)加熱離心脂肪分層讀取脂肪層體積2021/5/936巴布科克乳脂瓶蓋勃氏乳脂瓶和離心機(jī)2021/5/937控制H2SO4濃度,如果太高，牛奶會(huì)碳化，如果太低，脂肪球不能完全破壞.用于乳制品的檢測(cè)，不適宜于高糖含量和巧克力等樣品。注意事項(xiàng)：巴布科氏法和蓋勃氏法2021/5/938磷脂測(cè)定

X=膽堿、乙醇胺、絲氨酸、肌醇甘油磷脂的結(jié)構(gòu)特征卵磷脂腦磷脂磷脂酰絲氨酸磷脂酰肌醇2021/5/940磷脂對(duì)油脂品質(zhì)的影響磷脂：營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高，有一定的生理功效使油色變深暗、混濁。遇熱（280℃）焦化發(fā)苦，生成黑色沉淀烹飪時(shí)產(chǎn)生大量泡沫（溢鍋）雙親結(jié)構(gòu)，使油脂水分增加，促水解氧化易溶于乙醚、三氯甲烷、正己烷，不溶于丙酮、水等極性溶劑。磷脂具有雙親性質(zhì)，當(dāng)與水接觸時(shí)，磷脂能吸水膨脹而使其在油脂中的溶解度大大降低。加水至油脂中，磷脂將沉淀下來(lái)，又依據(jù)磷脂不溶于丙酮的特性，用丙酮洗滌沉淀除去油脂等其他雜質(zhì)，烘干殘余物，稱(chēng)量即得磷脂含量。測(cè)定原理與方法油樣品+H2O丙酮洗滌沉淀混合離心棄去油層、沉淀收集收集沉淀干燥、稱(chēng)重、計(jì)算2021/5/942不同脂類(lèi)組分的檢測(cè)方法脂類(lèi)甘油三酯（TAG）甘油二酯（DAG）甘油一酯（MAG）脂肪酸，磷脂，糖脂，甾醇，固醇等2021/5/943不同脂類(lèi)組分的檢測(cè)方法檢測(cè)方法GCHPLCNP-HPLCRP-HPLCTLC2021/5/9442021/5/9452021/5/9462021/5/9472021/5/948油脂中脂肪酸組成的測(cè)定2021/5/949幾種油脂的主要脂肪酸組成脂肪酸組成大豆油葵花籽油玉米油菜籽油橄欖油芝麻油紅花油棕櫚酸（C16:0）10.325.512.102.813.711.06.5硬脂酸（C18:0）4.194.11.901.32.505.22.4油酸（C18:1,ω-9）22.9534.129.9023.871.1041.213.1亞油酸（C18:2,ω-6）52.2253.0254.5614.610.043.377.7α-亞麻酸（C18:3,ω-3)）5.9

7.3

2021/5/950脂肪酸檢測(cè)方法——

氣相色譜法油樣品皂化、脂肪酸甲酯化（比甘油酯沸點(diǎn)低）NaOH的甲醇溶液三氟化硼-乙醚-甲醇溶液正己烷萃取脂肪酸甲酯GC檢測(cè)2021/5/9512021/5/952食用油理化指標(biāo)測(cè)定油脂物理性質(zhì)分析油脂化學(xué)特性的測(cè)定2021/5/953

指油脂在20℃時(shí)的質(zhì)量與同體積純水在4℃時(shí)的質(zhì)量之比。相對(duì)密度是油脂的特征性參數(shù)。如：橄欖油的相對(duì)密度范圍（）0.9090-0.9150；棕櫚油相對(duì)密度范圍（）0.9170-0.9440相對(duì)密度2021/5/954密度瓶法原理由于密度瓶的容積一定，故在一定溫度下，用同一密度瓶分別稱(chēng)量樣品溶液和蒸餾水的質(zhì)量，兩者之比即為該樣品溶液的相對(duì)密度。儀器：普通密度瓶、帶溫度計(jì)密度瓶。2021/5/955帶溫度計(jì)的密度瓶帶毛細(xì)管的普通密度瓶2021/5/956密度瓶法具體操作步驟：將密度瓶洗凈后烘干冷卻稱(chēng)重快速裝入樣液20℃水浴恒溫20min濾紙吸去多余樣液或水樣品質(zhì)量密度瓶質(zhì)量裝入蒸餾水得到水質(zhì)量和密度瓶質(zhì)量取出稱(chēng)重2021/5/957按下式計(jì)算式中m0——空密度瓶質(zhì)量，g；

m1——密度瓶和水的質(zhì)量，g；

m2——密度瓶和樣品的質(zhì)量，g；

0.99823——20℃時(shí)水的密度，g／cm3。2021/5/958折射率折射率是油脂的特征性參數(shù)，如棕櫚油的折光指數(shù)（n4℃D）1.4560-1.4590

；橄欖油的折光指數(shù)(n20℃D)1.4635-1.4731阿貝折光儀2021/5/959透明度氣味和滋味菜籽油－辣味芝麻油－香味酸敗油－哈味冷凍試驗(yàn)感官檢驗(yàn)檢驗(yàn)色拉油在0℃有無(wú)結(jié)晶析出和不透明現(xiàn)象2021/5/960固體油脂完全轉(zhuǎn)變成液體狀態(tài)時(shí)的溫度測(cè)定方法：熔點(diǎn)油脂樣品水浴加熱記錄樣品完全轉(zhuǎn)變?yōu)橥该鞒吻逡后w時(shí)的溫度2021/5/961油脂黏度的測(cè)定同步電機(jī)刻度圓盤(pán)游絲轉(zhuǎn)子指針6被測(cè)液體旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)法2021/5/962酸價(jià)測(cè)定

酸價(jià)定義：指中和1g油脂中的游離脂肪酸所需KOH的質(zhì)量（mg）酸價(jià)產(chǎn)生：酶、氧化酸價(jià)測(cè)定意義：反映油脂酸敗的主要指標(biāo)，此指標(biāo)可以評(píng)定油脂品質(zhì)的好壞及貯藏方法是否恰當(dāng)；為油脂堿煉提供需要的加堿量。2021/5/963測(cè)定原理與方法：油樣油樣溶液油樣溶液3滴酚酞當(dāng)出現(xiàn)微紅色，且30s內(nèi)不消失，記錄KOH的消耗量，計(jì)算。加入中性乙醇和乙醚混合液KOH滴定2021/5/964碘價(jià)（碘值）測(cè)定100g油脂所吸收的氯化碘或溴化碘換算成的碘的質(zhì)量（g）。意義：反映油脂的不飽和程度碘價(jià)越高，不飽和程度越高，油脂越不穩(wěn)定，易氧化和分解。測(cè)定碘價(jià)，可以了解油脂脂肪酸的組成是否正常，有無(wú)摻假2021/5/965測(cè)定原理

CH3…CH=CH…COOH+ICl（過(guò)量）=…CHI-CHCl…

過(guò)量的KI與剩余的ICl反應(yīng)：KI+ICl=KCl+I2

I2

用Na2S2O3標(biāo)定I2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2NaI不飽和雙鍵與鹵素發(fā)生加成反應(yīng)試劑：氯化碘-乙酸溶液（韋氏法）2021/5/966過(guò)氧化值測(cè)定過(guò)氧化值的定義

1g油脂所需某種規(guī)定濃度Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）表示，或用碘的百分?jǐn)?shù)來(lái)表示，或每千克油脂中活性氧物質(zhì)的量（mmol），或每克油脂中活性氧的質(zhì)量（μg）。過(guò)氧化值測(cè)定的意義判斷油脂是否新鮮和酸敗的程度2021/5/967測(cè)定原理與方法原理：

油脂在氧化過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化物不穩(wěn)定，能氧化KI成為游離I2，用Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)析出的I2量來(lái)計(jì)算過(guò)氧化值。過(guò)程：油樣品乙酸-異辛醇油的溶液飽和KI密閉、振蕩均勻、避光反應(yīng)1min加水Na2S2O3滴定至淺黃色時(shí)，加入淀粉直至藍(lán)色消失2021/5/968不皂化物測(cè)定定義

油樣品中不能被皂化的物質(zhì)，一般有色素、維生素、蠟、固醇等。不皂化物可溶于醚類(lèi)，但不能溶于水。測(cè)定方法油樣品皂化用乙醚