檢驗(yàn)中級(jí)考試小結(jié)

臨床檢驗(yàn)根底血液檢驗(yàn)真空采血管灰色--氟化鈉、草酸鉀抗凝測定血糖金黃色-別離膠血涂片制備技術(shù)：血滴越大、角度越大、推片速度越快那么血膜越厚。進(jìn)行紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)時(shí)使用的抗凝劑為肝素凝血工程使用109mmol/l枸櫞酸鈉抗凝，抗凝劑與血液比例1:9。血沉用枸櫞酸鈉抗凝，抗凝劑與血液比例1:4。血細(xì)胞手工檢驗(yàn)〔1〕血細(xì)胞形態(tài)嗜多色紅細(xì)胞屬于未完全成熟的紅細(xì)胞，由于胞質(zhì)中含有RNA而被染成灰色、藍(lán)色，嗜多色性紅細(xì)胞增多提示骨髓造紅細(xì)胞功能活潑，常見于溶血性貧血。H-J小體位于成熟或幼紅細(xì)胞胞質(zhì)中，是保內(nèi)殘留的RNA，常見于巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血及脾切除術(shù)后。點(diǎn)彩紅細(xì)胞見于鉛中毒、溶血性貧血患者等?？úōh(huán)出現(xiàn)原因是核膜剩余物或胞質(zhì)脂蛋白變性。Russell小體是漿細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的一種數(shù)目不等、大小不一、染成肉紅色的球形小體，是漿細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌免疫球蛋白受阻或黏蛋白變性所致，常見于多發(fā)性骨髓瘤、傷寒、瘧疾。粒細(xì)胞自晚幼粒開始失去分裂能力，逐漸發(fā)育成熟。涂片法白細(xì)胞分類時(shí)，涂片尾部幼稚細(xì)胞多中性粒細(xì)胞增多并核左移稱再生性左移，常見于各種病原體的感染，特別是急性化膿性細(xì)菌感染。核左移伴中性粒細(xì)胞減少或者正常稱為退行性核左移，多見于機(jī)體抵抗力低下的嚴(yán)重感染，常見于傷寒感染。桿狀粒細(xì)胞》5%稱輕度左移》10%中度》25%并出現(xiàn)幼稚粒細(xì)胞時(shí)成為重度核左移〔2〕血細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板手工計(jì)數(shù)白細(xì)胞四角大方格N/4*10*106*稀釋倍數(shù)紅細(xì)胞、血小板中央大方格中的四角+中央中方格N*5*10*106*稀釋倍數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞、精子10個(gè)大方格N*106*稀釋倍數(shù)*計(jì)數(shù)域的誤差屬于固有誤差，無法防止，不屬于技術(shù)性誤差。Miller窺盤計(jì)數(shù)Ret大、小方格面積比為9:1小方格計(jì)數(shù)紅細(xì)胞數(shù)，大方格計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。少兒在6-9天和4-5歲時(shí)，外周血淋巴細(xì)胞與中性粒細(xì)胞根本相等約為50%。正常人外周血涂片中，中性桿狀粒細(xì)胞比例為1-5%。HCT測定WHO推薦的首選常規(guī)方法為微量離心管，經(jīng)典方法--溫氏法。溫氏法血細(xì)胞比容測定，EDTA-K2抗凝血參加溫氏管中離心后血液分為5層，自上而下分別為血漿層、血小板層、白細(xì)胞層和有核紅細(xì)胞層、復(fù)原紅細(xì)胞層、帯氧紅細(xì)胞層。讀數(shù)時(shí)讀取復(fù)原紅細(xì)胞層柱高即為血細(xì)胞比容。典型MCHC增高僅見于球形紅細(xì)胞增多癥，但罕見超過380g/l。巨幼細(xì)胞性貧血直方圖波峰右移，峰底增寬，明顯的大細(xì)胞不均一性。缺鐵性貧血時(shí)RDW最早出現(xiàn)變化。嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液中乙醇、丙酮、乙二醇等作用為嗜酸性粒細(xì)胞保護(hù)劑，伊紅、固綠等為嗜酸性粒細(xì)胞著色劑，甘油可以防止乙醇等液體揮發(fā)，碳酸鉀、草酸銨可破壞其他細(xì)胞和增強(qiáng)嗜酸性粒細(xì)胞著色。嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果可應(yīng)用于觀察急性傳染病的預(yù)后、判斷腎上腺皮質(zhì)功能、觀察大手術(shù)患者和燒傷患者的預(yù)后。猩紅熱急性期，可能乙型溶血性鏈球菌產(chǎn)生酶激活補(bǔ)體，引起嗜酸性粒細(xì)胞增多。血沉減慢見于紅細(xì)胞數(shù)量明顯增多以及纖維蛋白原含量下降。紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)多用于紅細(xì)胞膜缺陷篩查，對(duì)遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥具有重要診斷價(jià)值。Ham試驗(yàn)對(duì)診斷PNH有重要價(jià)值。Coombs試驗(yàn)對(duì)免疫性溶血性貧血有重要診斷價(jià)值。血紅蛋白電泳對(duì)異常血紅蛋白病有重要診斷價(jià)值。纖維蛋白原、球蛋白、CM、膽固醇等升高均加快血沉；清蛋白、卵磷脂增加能減緩紅細(xì)胞沉降率。正常人血漿比密約為1.025-1.030。濃縮血小板在20-24度溫度下，保存期為7天。再生障礙性貧血中MPV降低2.血細(xì)胞分析儀國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)公布的血細(xì)胞分析儀的性能評(píng)價(jià)指標(biāo)：可比性、準(zhǔn)確性、總重復(fù)性、精密度、線性范圍。血細(xì)胞計(jì)數(shù)參考方法：紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)參考方法為單通道電阻抗法；血小板為流式細(xì)胞儀。網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)〔RPI〕=網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)〔%〕*〔患者HCT/正常人HCT〕*〔1/網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟天數(shù)〕，反映的是網(wǎng)織紅細(xì)胞生成速度是正常人的多少倍。使用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞時(shí)，血小板聚集可引起假性升高。Hb測定：1.ICSH推薦參考方法--氰化高鐵血紅蛋白比色法：高鐵氰化鉀將各種血紅蛋白轉(zhuǎn)化為高鐵血紅蛋白〔SHb除外，無法轉(zhuǎn)化SHb〕，而后與CN-結(jié)合成HiCN，最大吸收峰540nm，轉(zhuǎn)化液推薦使用文-齊液。試劑保存不得使用塑料瓶，可冷藏，不可冰凍，因前兩者均會(huì)造成CN-喪失造成HB轉(zhuǎn)化不完全，測定結(jié)果偏低。缺點(diǎn)：試劑有毒；SHb無法轉(zhuǎn)化為氰化高鐵血紅蛋白。SDS-Hb法無公害血細(xì)胞分析儀采用多角度偏振光散射法〔MAPSS〕測定時(shí)：1、0度前角光散射可粗略測定細(xì)胞大?。?、10度狹角光散射可測定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對(duì)特征3、90度垂直光散射測定細(xì)胞內(nèi)部顆粒和核分葉情況；4、90度垂直去偏振散射光區(qū)分中粒與嗜酸粒。激光與細(xì)胞化學(xué)法即應(yīng)用激光散射與細(xì)胞化學(xué)法進(jìn)行白細(xì)胞分類過氧化物酶活性：嗜酸性粒細(xì)胞》中性粒細(xì)胞》單核》淋巴、嗜堿性粒細(xì)胞=0激光散射法血小板計(jì)數(shù)時(shí)，高角度〔5-10〕主要檢測細(xì)胞折射指數(shù)；低角度〔2-3〕主要測量細(xì)胞大小。電阻抗法血小板計(jì)數(shù)時(shí)采用浮動(dòng)界標(biāo)技術(shù)。電阻抗、射頻及特殊染色法進(jìn)行血細(xì)胞分類時(shí)，檢測幼稚細(xì)胞參加硫化氨基酸，幼稚細(xì)胞結(jié)合更多硫化氨基酸，因此幼稚細(xì)胞對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?，成熟?xì)胞隨后被破壞。3.血型檢驗(yàn)衛(wèi)生部要求：抗A、抗B效價(jià)》128，親和力《15s，凝集素效價(jià)《1:4，必須具有檢出A2、A2B的能力。Rh血型陰性確證應(yīng)做弱D鑒定，弱D抗原較弱一般不與鹽水中抗D試劑反響凝聚，必須采用酶法、抗球蛋白法、凝集胺試驗(yàn)等檢測。低離子凝聚胺技術(shù)對(duì)kell血型系統(tǒng)中的抗K不敏感。簡易致敏紅細(xì)胞血小板血清試驗(yàn)是檢測血小板血型較為理想的方法。ABO血型4種表現(xiàn)型、6種基因型ABO基因位于9號(hào)染色體短臂ABO基因中B編碼的糖基轉(zhuǎn)移酶是D-半乳糖轉(zhuǎn)移酶，A編碼的是N-乙酰-D-半乳糖轉(zhuǎn)移酶。血型物質(zhì)不存在于腦脊液中RH抗原目前僅發(fā)現(xiàn)在紅細(xì)胞上存在，血小板外表存在血小板特異抗原以及ABO、HLA等相關(guān)抗原。患者紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性可以導(dǎo)致Rh血型鑒定出現(xiàn)假陽性。孟買血型基因型為hh，但h基因?yàn)闊o效基因，其紅細(xì)胞外表無A、B、H抗原，血清中含有抗A、抗B、抗H抗體。稀有血型血液保存方式一般選用冷凍紅細(xì)胞。引起非溶血性發(fā)熱反響最常見的原因是抗白細(xì)胞抗原的抗體，因此可用少白紅細(xì)胞預(yù)防非溶血性發(fā)熱反響。為預(yù)防TA-GVHD，臨床選用輻照紅細(xì)胞，破壞免疫活性淋巴細(xì)胞。選用洗滌紅細(xì)胞來預(yù)防因輸血發(fā)生的嚴(yán)重過敏反響。輸注全血補(bǔ)充血小板時(shí)12h內(nèi)的全血視為新鮮血；補(bǔ)充粒細(xì)胞時(shí)8h內(nèi)全血視為新鮮血；補(bǔ)充凝血因子時(shí)24h內(nèi)全血視為新鮮血。用酶處理過的紅細(xì)胞進(jìn)行血型鑒定時(shí)，MN抗原會(huì)被破壞。尿液檢驗(yàn)：尿液理化檢驗(yàn)甲醛對(duì)尿中細(xì)胞、管型有固定作用，用于Addis計(jì)數(shù)防腐甲苯可在尿液外表形成一層薄膜，常用于尿糖、尿肌酐、蛋白等化學(xué)成分測定防腐；濃鹽酸用于17羥、17酮類固醇激素測定的防腐；冰乙酸用于24H尿醛固酮測定的防腐。痰液觀察分層情況，可用少量苯酚防腐。正常人尿液中GLU含量為《5.0mmol/24h尿液T-H蛋白紫外光譜分析出現(xiàn)最大吸收峰的波長為277nm尿本周蛋白檢測：篩選方法-熱沉淀-溶解法、對(duì)甲苯磺酸法確診方法SDS、免疫電泳、免疫固定電泳本周蛋白的本質(zhì)是免疫球蛋白輕鏈。腎小管重吸收功能受損多為小分子蛋白尿，腎病綜合征多為選擇性蛋白尿。重金屬中毒多引起腎間質(zhì)性腎炎，主要表現(xiàn)為腎小管損傷，重吸收與濃縮功能減退。Mb蛋白尿的特點(diǎn)Mb能溶于80%飽和硫酸銨溶液正常人尿膽紅素陰性，尿膽原陰性或弱陽性。苯丙酮酸尿癥患者新鮮尿液具有“老鼠屎”樣臭味。尿膽原測定常用Ehrlich法，苯丙酮酸尿癥的篩查試驗(yàn)為三氯化鐵定性法，酪氨酸尿的過篩試驗(yàn)為亞硝基萘酚定性法。加熱乙酸法測定本周蛋白尿PH要求為4.5-5.5。尿沉渣檢驗(yàn)?zāi)I移植后發(fā)生排斥反響尿液細(xì)胞學(xué)檢查改變：核退變，紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞形成混合細(xì)胞團(tuán)塊，淋巴細(xì)胞，腎小管細(xì)胞，管型和背景壞死物。其中兩項(xiàng)恒定指征為淋巴細(xì)胞和腎小管細(xì)胞。人巨細(xì)胞病毒感染，尿液中含有巨細(xì)胞病毒包涵體的細(xì)胞是上皮細(xì)胞。尿管型顯微鏡檢查應(yīng)在低倍鏡下觀察20個(gè)視野，正常人尿液檢查RBC0-3/HP，WBC0-5/HP。Addis1h尿白細(xì)胞計(jì)數(shù)，正常女性白細(xì)胞《14萬/小時(shí)。正常人尿滲量為600-1000mOsm/(KgH2O)尿液分析儀檢驗(yàn)干化學(xué)法中，高濃度尿蛋白可使尿比重測定偏高；Vc可尿糖測定假陰性；青霉素藥物偏酸可使尿蛋白測定假陰性；青霉素類藥物可使尿白細(xì)胞測定減少或假陰性；Vc可使尿隱血試驗(yàn)假陰性。干化學(xué)法測定尿膽原時(shí)，膽色素原、膽紅素、吲哚、吩噻嗪類都可產(chǎn)生干擾；大多數(shù)尿液試劑帶沒有測定尿膽原陰性，因此干化學(xué)不能用于梗阻性黃疸尿膽原測定。干化學(xué)法測定尿膽紅素時(shí)，維生素C、亞硝酸鹽、氯丙嗪、鹽酸苯偶氮吡啶都可產(chǎn)生干擾。CCCLS規(guī)定：干化學(xué)法確實(shí)證實(shí)驗(yàn)?zāi)虻鞍状_證實(shí)驗(yàn)磺基水楊酸法；尿葡萄糖確證實(shí)驗(yàn)葡萄糖氧化酶定量法；尿膽紅素確證實(shí)驗(yàn)Harrison法；尿白細(xì)胞和紅細(xì)胞鏡檢；尿比重折射儀法三、排泄物與分泌物檢驗(yàn)1.糞便檢驗(yàn)：檢查鉤蟲卵用飽和鹽水漂浮法，蟯蟲卵用透明膜試紙法，蛔蟲卵用離心沉淀集卵法，血吸蟲卵用毛蚴孵化法；阿米巴滋養(yǎng)體直接鏡檢大便鏡檢到巨噬細(xì)胞常見于急性菌痢。消化道出血》50ml開始出現(xiàn)黑便，糞便隱血陽性消化道出血5ml左右。消化道寄生蟲蟲卵中體積最小的是華支睪吸蟲卵。艾滋病相關(guān)性腹瀉，由寄生蟲引起腹瀉最常見的是隱孢子蟲。2..陰道分泌物檢驗(yàn)：BV的常見病原體是陰道加德納菌，患者白帶性狀多為奶油狀，含大量粘液與中性粒細(xì)胞。診斷加德納菌性陰道炎的指標(biāo)是：1.線索細(xì)胞；2.分泌物PH》4.5；3.胺試驗(yàn)陽性；4.陰道分泌物稀薄均勻。四、體腔液檢驗(yàn)1.腦脊液檢驗(yàn)：腦脊液蛋白質(zhì)定量比色法優(yōu)于比濁法，正常人腦脊液中蛋白質(zhì)含量不到血漿蛋白的1%；Froin綜合征是一種梗阻性腦??；潘氏實(shí)驗(yàn)靈敏度高，局部正常腦脊液可以呈極弱陽性。腦脊液蛋白電泳有前清蛋白帶，血清蛋白電泳一般無前清蛋白帶。化膿性腦膜炎LDH明顯增高，經(jīng)治療，LDH無明顯減低甚至進(jìn)一步增高，提示預(yù)后不好。結(jié)核性腦膜炎ADA增高明顯，多發(fā)性硬化癥腦脊液中髓鞘堿性蛋白MBP含量上升，MBP可以作為多發(fā)性硬化癥的輔助診斷指標(biāo)。正常人腦脊液無紅細(xì)胞，白細(xì)胞(0-10)*106主要是淋巴與單核細(xì)胞?；撔阅X膜炎，腦脊液明顯渾濁，靜置后可形成凝塊或沉淀；結(jié)核性腦膜炎，腦脊液毛玻璃樣輕度渾濁，靜置后外表可有網(wǎng)膜形成；蛛網(wǎng)膜下腔梗阻，腦脊液可呈黃色膠凍樣。腦脊液同時(shí)出現(xiàn)膠樣凝固、黃變癥和蛋白質(zhì)-細(xì)胞別離，稱為Froin-Nonne綜合征，是蛛網(wǎng)膜下腔梗阻的特點(diǎn)。正常人腦脊液壓力為80-180mmH2O，健康人腰穿所得腦脊液比密為1.006-1.008，正常人腦脊液PH為7.31-7.34。2.漿膜腔積液檢驗(yàn)：引起胸腔積液最常見的惡性腫瘤是肺癌，以周圍型肺癌常見。惡性間皮瘤染色質(zhì)分布于核的一側(cè)，病理性核分裂象多見，多核瘤細(xì)胞多見。小細(xì)胞未分化癌特征性表現(xiàn)-癌細(xì)胞體積小、胞質(zhì)少、裸核樣，核染色深呈墨水滴樣。心包積液草黃色常見于尿毒癥引起的心包積液，黃色多見于黃疸。胸腔積液中最常見的肺癌細(xì)胞類型為腺癌女性腹水常見類型為漿液性乳頭狀囊腺癌3.關(guān)節(jié)積液檢驗(yàn)：類風(fēng)濕患者關(guān)節(jié)積液中可發(fā)現(xiàn)膽固醇結(jié)晶RA主要累及小關(guān)節(jié)、腫大僵硬；關(guān)節(jié)腔積液白細(xì)胞《5000*106葡萄糖不明顯降低?；撔躁P(guān)節(jié)炎時(shí)WBC》6000*106葡萄糖明顯降低。正常人關(guān)節(jié)積液WBC〔0-50〕*106/L。4.羊水檢驗(yàn)：粘多糖沉積病產(chǎn)前診斷簡易指標(biāo)是羊水細(xì)胞內(nèi)甲苯胺藍(lán)定性試驗(yàn)和糖醛酸半定量測定，胰腺纖維囊性病產(chǎn)前診斷最正確指標(biāo)是羊水r-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶測定五、脫落細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)：絕經(jīng)期婦女陰道涂片中可見到陰道上皮高度萎縮，細(xì)胞出現(xiàn)退化現(xiàn)象，核染色質(zhì)疏松或消失，稱為“早熟角化細(xì)胞”。挖空細(xì)胞特指HPV感染出現(xiàn)的核周空穴細(xì)胞；瓢形核是產(chǎn)后性外底層細(xì)胞的特征；核內(nèi)包涵體多見于HSV病毒感染，印戒細(xì)胞是胃腺癌的一種細(xì)胞。宮頸癌以鱗狀細(xì)胞癌為主，脫落細(xì)胞中找到挖空細(xì)胞應(yīng)做HPV分型或活檢。宮頸鱗癌以非角質(zhì)化型常見。支氣管肺泡灌洗液，結(jié)節(jié)病時(shí)以T淋巴細(xì)胞為主；特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化以中性粒細(xì)胞增多為主，伴嗜酸粒增多；卡氏肺孢子蟲感染時(shí)，以淋巴細(xì)胞增多為主；急性呼吸窘迫綜合征以中性粒細(xì)胞為主。判斷細(xì)胞良性或惡性，主要依靠細(xì)胞核的改變判斷細(xì)胞分化傾向主要依靠細(xì)胞質(zhì)的改變臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)免疫分子及其檢測抗原抗體抗原制備：顆粒性抗原可溶性抗原：組織和細(xì)胞破碎，抗原粗提，而后是抗抗原抗體反響與制備原提純〔超速離心、選擇性沉淀、層析、電泳法〕免疫球蛋白片段與人工抗原制備抗體制備：多抗〔純化--SPA與IgG結(jié)合親和層析、鑒定〕單抗制備基因工程抗體木瓜蛋白酶可以將IgG裂解成一個(gè)Fc和兩個(gè)Fab片段胃蛋白酶將IgG裂解成F(ab’)2與小肽片段。制備單抗隆抗體時(shí)常用的細(xì)胞融合劑是PEG1000-2000?；蚬こ炭贵w較于雜交瘤單抗隆抗體最重要特點(diǎn)：非異源性免疫球蛋白分型依據(jù)是CL抗原性不同進(jìn)行分類PEG沉淀法或比濁法常用于檢測CIC，簡單易行，但特異性差；常用PEG最終濃度為3-4%，PEG沉淀試驗(yàn)不能反映小分子循環(huán)免疫復(fù)合物，2%只能沉淀大分子，》5%選擇性沉淀CIC的能力消失。PEG沉淀法中PH、離子強(qiáng)度等條件固定時(shí)，蛋白質(zhì)分子量越大，所用PEG濃度越小，別離血清免疫復(fù)合物一般采用PEG6000。補(bǔ)體參與檢測CIC方法包括C1q固相法、抗C3-CIC-ELISA法，由于IgA不能結(jié)合補(bǔ)體，所以補(bǔ)體參與檢測CIC法不能檢測IgA抗體。離子種類對(duì)免疫復(fù)合物形成速度的影響：H2P04->SO42->NO3->CLO4->SCN-單克隆抗體的特異性取決于克隆細(xì)胞的篩選免疫監(jiān)視功能腫瘤發(fā)生免疫自穩(wěn)功能--自身免疫病抗原抗體反響類型：凝集與沉淀反響〔1〕凝集反響RF采用散射比濁法檢測的主要是IgM膠乳凝集試驗(yàn)所用載體多為0.8um聚苯乙烯膠乳，〔2〕沉淀反響免疫散射比濁中，顆粒直徑遠(yuǎn)小于入射波長時(shí)，那么散射光分布比擬均勻，稱為Ray-leigh散射。假設(shè)顆粒直徑接近或大于入射波長時(shí)，那么散射光分布不均勻，稱為Mie散射。介于兩者之間，那么稱為Rayleigh-Mie散射。速率散射比濁中，參加PEG的目的是加速抗原抗體復(fù)合物的形成，縮短反響時(shí)間，常用PEG8000。速率散射比濁免疫分析是抗原抗體結(jié)合反響的動(dòng)態(tài)測定。速率散射比濁法，為防止出現(xiàn)后帶現(xiàn)象，常使抗體過量；此外還參加了抗原過量檢測系統(tǒng)，反響后再參加適量抗原，假設(shè)出現(xiàn)第二峰信號(hào)，那么提示第一峰信號(hào)均由待測抗原產(chǎn)生且結(jié)果可靠；假設(shè)未出現(xiàn)第二峰信號(hào)提示待測抗原過量?；鸺庖唠娪咀鳛榭乖恐荒軠y定ug/ml單向擴(kuò)散試驗(yàn)假設(shè)應(yīng)用多克隆抗體測量M蛋白時(shí)，測定會(huì)偏高？雙向擴(kuò)散試驗(yàn)試管法先后參加試管的是：含抗體的瓊脂、普通瓊脂、含抗原的瓊脂。目前臨床檢驗(yàn)中不推薦使用對(duì)流免疫電泳與火箭免疫電泳，共同原因是電泳載體的電滲作用？火箭免疫電泳結(jié)合放射自顯影技術(shù)靈敏度可提升1000倍CIEPcounterimmunnoelectrophoresisRIErocketimmunoelectrophoresisIEPimmunoelectrophoresisIFEimmunofixationelectrophoresis對(duì)流免疫電泳中IgG抗體四個(gè)亞型表現(xiàn)不同，IgG1和IgG2由于電滲作用向陰極移動(dòng)，而IgG3和IgG4向陽極移動(dòng)。化學(xué)交聯(lián)法常用炭化二亞胺將膠乳上的羥基與被交聯(lián)物上的氨基縮合在一起包被過程中最常用的緩沖液為PH9.6PBS標(biāo)記免疫技術(shù)〔1〕熒光免疫技術(shù)FITC激發(fā)光490-495nm發(fā)射光520-530nm黃綠色熒光RB200570nm600nm橘紅色熒光TRITC550nm620nm橙紅色熒光，適合與FITC配對(duì)雙標(biāo)記PE490nm595nm紅色，多與FITC用于流式細(xì)胞儀雙標(biāo)熒光抗體效價(jià)常用倍比稀釋，非特異性染色最弱的稀釋度作為其效價(jià)；假設(shè)采用瓊脂雙擴(kuò)散法測定，熒光抗體效價(jià)需大于1:16.熒光抗體染色技術(shù)中直接法較其他方法特異性高、非特異性染色少。FITC在酸性溶液中熒光強(qiáng)度顯著降低熒光素標(biāo)記抗體的鑒定：抗體效價(jià)〔抗體活性〕、熒光素和蛋白質(zhì)結(jié)合比〔F/P〕。F/P越高，說明抗體上結(jié)合的熒光素越多，反之越少。一般用于固定標(biāo)本的抗體F/P=1.5左右，用于活細(xì)胞染色F/P=2.4為宜。熒光偏振免疫測定主要用于測定小分子抗原，是臨床藥物濃度檢測的首選方法；缺點(diǎn)是不適用于大分子物質(zhì)?！?〕放射免疫技術(shù)RIA為標(biāo)記抗原競爭法測定抗原；IRMA分為直接和雙抗體夾心法均為標(biāo)記抗體測定抗原。125I衰變產(chǎn)生r射線，3H衰變產(chǎn)生的是β射線比放射性是指單位質(zhì)量標(biāo)記物的放射強(qiáng)度，常用Bq/ug，Ci/g或Ci/mol表示，一般標(biāo)記抗原的比放射性越高，試驗(yàn)靈敏度高。放射化學(xué)純度是指結(jié)合于抗原上的放射強(qiáng)度占總放射強(qiáng)度的百分率，一般要求》95%放免技術(shù)中滴度常采用一株抗血清做系列稀釋后再與標(biāo)記抗原反響。酶免疫技術(shù)〔4〕化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)發(fā)光免疫分析根據(jù)化學(xué)反響不同可以分為三類：1、直接參與發(fā)光反響，如吖啶酯類標(biāo)記物以發(fā)光酶標(biāo)記，如AP；3、以能量傳遞參與氧化復(fù)原反響的非酶標(biāo)記物，如三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記物?！?〕膠體金免疫技術(shù)〔6〕免疫組化免疫復(fù)合物與游離標(biāo)記物別離的方法：活性炭吸附法主要用于測定小分子抗原或藥物。補(bǔ)體及檢測CRP、甘露糖結(jié)合凝集素〔MBL〕與IgM、IgG1/2/3免疫復(fù)合物可以激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，而凝集的Ig、病原微生物〔內(nèi)毒素等〕可以激活補(bǔ)體替代途徑。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)含三個(gè)系統(tǒng)：反響系統(tǒng)、補(bǔ)體系統(tǒng)、指示系統(tǒng)。有五種成分參與：抗體、待測抗原、綿羊紅細(xì)胞、溶血素、補(bǔ)體。假設(shè)標(biāo)本中無待測抗原，那么抗體與溶血素-綿陽紅細(xì)胞結(jié)合，激活補(bǔ)體，產(chǎn)生溶血作用，假設(shè)標(biāo)本中含待測抗原，那么抗體與抗原結(jié)合，不產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。補(bǔ)體成分測定：CH50測定經(jīng)典途徑總補(bǔ)體活性，免疫溶血法測定的是單個(gè)補(bǔ)體的活性；補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是用于檢測某種抗原或者抗體，火箭免疫電泳可用于測定單個(gè)補(bǔ)體的含量。血清補(bǔ)體C3含量最高，C2含量最低抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，CH2補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)暴露出來才能激活補(bǔ)體。補(bǔ)體激活后C2b裂解為小片段。補(bǔ)體參與的溶血試驗(yàn)應(yīng)使用2個(gè)單位的溶血素，CH50法測定的是總補(bǔ)體活性，單位U/ml經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體的IC，可以用C1q結(jié)合試驗(yàn)來測定。細(xì)胞因子及其受體檢測IL-4能夠促進(jìn)免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換，IL-2能促進(jìn)B細(xì)胞增生、分泌抗體，同時(shí)IL-2可以促進(jìn)T細(xì)胞增殖與活化。IFN-r是由受抗原刺激后活化的T細(xì)胞產(chǎn)生〔Th1細(xì)胞產(chǎn)生〕，抑制Th0向Th2分化。IL-5不僅能刺激嗜酸性粒細(xì)胞增殖和分化，而且對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞有趨化作用IL-1、TNF-ɑ可阻止或減輕革蘭陰性菌感染所致休克的發(fā)生。IL-6常用于刺激B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞增殖。IL-1、IL-6刺激肝臟分泌急性期蛋白，TNF-ɑ刺激產(chǎn)生IL-1、IL-6。IL-18具有趨化活性細(xì)胞因子多數(shù)是低分子量蛋白質(zhì)、多以單體形式存在，以非特異性方式發(fā)揮作用，不受MHC限制。粘附因子與白細(xì)胞分化抗原檢測免疫細(xì)胞別離及檢測〔一〕免疫細(xì)胞別離、檢測淋巴細(xì)胞別離外周單個(gè)核細(xì)胞別離聚蔗糖-泛影葡胺分層液法最為常用Ficoll別離液法是一種單次差速密度梯度離心的別離方法，Percoll別離液法是一種連續(xù)密度梯度離心別離法。淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞別離經(jīng)別離后的PBMC中主要是單核細(xì)胞與淋巴細(xì)胞，少量血小板與RBC〔RBC可用NH4Cl或低滲法去除，血小板可屢次離心去除〕單核細(xì)胞去除可以利用單核細(xì)胞粘附玻璃、塑料和葡聚糖的特性以及吞噬鐵粉的能力去除。對(duì)玻璃和塑料制品的粘附性：巨噬細(xì)胞》樹突狀細(xì)胞》B細(xì)胞》T=RBC，常利用單核細(xì)胞這個(gè)特性將其別離。另外也可以用Percoll連續(xù)密度梯度離心法，四層：死細(xì)胞層〔死細(xì)胞、血小板〕、單核細(xì)胞層、淋巴細(xì)胞層、紅細(xì)胞和粒細(xì)胞層。淋巴細(xì)胞亞群的別離=1\*GB3①E花環(huán)別離法成熟T細(xì)胞都表達(dá)CD2，即E受體〔綿羊紅細(xì)胞受體〕=2\*GB3②尼龍綿柱別離法利用B細(xì)胞易粘附于尼龍棉外表=3\*GB3③補(bǔ)體細(xì)胞毒法剔除表達(dá)特定抗原的細(xì)胞，借助補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用=4\*GB3④親和板別離利用特定抗原抗體結(jié)合=5\*GB3⑤免疫磁珠=6\*GB3⑥流式細(xì)胞儀分選淋巴細(xì)胞數(shù)量檢測：正常人外周血B細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的8%-15%，T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的60%-80%，NK細(xì)胞占5%-8%。外表CD抗原：所有T細(xì)胞外表均表達(dá)CD3、TCR；成熟T細(xì)胞均表達(dá)CD2；局部表達(dá)CD4/CD8。微量細(xì)胞毒試驗(yàn)利用抗原抗體反響激活補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用，以此作為顯示系統(tǒng)花環(huán)試驗(yàn)B細(xì)胞數(shù)量檢測：外表標(biāo)志物所有B細(xì)胞均表達(dá)SmIgM，成熟B表達(dá)SmIgM、SmIgD、CD19、CD20，B1細(xì)胞CD5+、CD23-；B2那么CD5-/CD23+B細(xì)胞外表具有IgGFc受體及補(bǔ)體受體，用相應(yīng)抗體致敏的紅細(xì)胞〔EA〕能與B細(xì)胞結(jié)合成EA花環(huán)，或EA與補(bǔ)體結(jié)合后，借助補(bǔ)體受體與B細(xì)胞結(jié)合成EAC花環(huán)。B細(xì)胞外表EB病毒受體--C3d受體。Raji細(xì)胞是由B細(xì)胞建株而來，外表有大量C3b、C1q和C3d受體，沒有SmIg，利用這些受體與結(jié)合補(bǔ)體的循環(huán)免疫復(fù)合物結(jié)合，再參加標(biāo)記的抗人球蛋白，可檢測循環(huán)免疫復(fù)合物。CD19主要表達(dá)于外周血成熟B細(xì)胞，CD5用于區(qū)分B1/B2細(xì)胞。外周血中，未成熟B細(xì)胞表達(dá)mIgM，成熟B表達(dá)SmIgM和SmIgD，根據(jù)是否表達(dá)CD5可以將B細(xì)胞分為：B1和B2細(xì)胞。B1細(xì)胞表達(dá)CD5，不表達(dá)CD23；B2不表達(dá)CD5，表達(dá)CD23；B1、B2細(xì)胞都表達(dá)CD19、CD20、CD22。B1細(xì)胞與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)、自身免疫病以及B細(xì)胞源性腫瘤有關(guān)。B2細(xì)胞是執(zhí)行體液免疫的主要細(xì)胞，是外周血主要的B細(xì)胞群。CD2表達(dá)在全部T細(xì)胞和局部NK細(xì)胞，CD3表達(dá)于全部T細(xì)胞，是T細(xì)胞的共同抗原；CD4、CD8只表達(dá)于局部T細(xì)胞。CD80主要表達(dá)在活化的B淋巴細(xì)胞外表，能與T細(xì)胞外表的CD28分子相互作用，刺激T細(xì)胞活化。淋巴細(xì)胞功能檢測：T細(xì)胞增生試驗(yàn)，也稱淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)體外刺激T細(xì)胞增生的刺激物可分為非特異性〔PHA、刀豆素、美洲商陸〕和特異性〔PPD和白假絲酵母菌、白喉類毒素等〕，PHA僅能刺激T細(xì)胞增殖，LPS僅能刺激B細(xì)胞增殖。刀豆蛋白A、PHA、美洲商陸能刺激T細(xì)胞增殖分化，細(xì)菌脂多糖只能刺激B細(xì)胞增殖活化，PPD主要特異性刺激T細(xì)胞，也能刺激B細(xì)胞增殖。T細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗(yàn)主要用于檢測Tc細(xì)胞T細(xì)胞分泌功能測定細(xì)胞因子測定Th1細(xì)胞分泌IL-2、IFN-r、TNF-β，促進(jìn)細(xì)胞免疫Th2細(xì)胞分泌IL-4、IL-10、IL-5、IL-13，促進(jìn)體液免疫，抑制細(xì)胞免疫IL-4能夠增強(qiáng)Th2細(xì)胞反響，促進(jìn)IgE類別轉(zhuǎn)換的一類細(xì)胞因子，支氣管哮喘與過敏反響可見其上升。IL-4啟動(dòng)休止期B細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期。IL-6是支持漿細(xì)胞增殖分化的關(guān)鍵因子，骨髓瘤患者的骨髓間質(zhì)細(xì)胞和漿細(xì)胞瘤本身可以分泌高水平的IL-6。體內(nèi)試驗(yàn)OT試驗(yàn)、PHA試驗(yàn)等當(dāng)特異性抗原記憶T細(xì)胞再次與過敏原接觸時(shí)，可迅速增殖分化為CD4+Th1細(xì)胞〔TTDH細(xì)胞〕和CTL細(xì)胞。DiGeorge綜合征發(fā)病機(jī)制先天性胸腺發(fā)育不良B細(xì)胞功能檢測1、B細(xì)胞增生試驗(yàn)刺激物有LPS、SPA等2、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)是一種既能檢測抗體分泌細(xì)胞，又可檢測抗體分泌量的方法。原理是利用抗原包被固相載體，再參加抗體產(chǎn)生細(xì)胞，誘導(dǎo)抗體分泌，ELISA，測定出抗體分泌量，并且可以在光鏡下觀察抗體形成細(xì)胞。3、溶血空斑試驗(yàn)反向溶血空斑試驗(yàn)是一種體外檢測人類Ig分泌細(xì)胞的方法，利用SPA-RBC與IgG結(jié)合。4、各種Ig量定量測定重要指標(biāo)NK活性測定測定人NK細(xì)胞活性多以K562細(xì)胞株為靶細(xì)胞，測定小鼠NK細(xì)胞活性那么以YAC細(xì)胞株為靶細(xì)胞。吞噬細(xì)胞功能檢測中粒細(xì)胞功能檢測趨化功能：1、Boyden小室、皮窗試驗(yàn)Chediak-Higashi綜合征時(shí)中性粒細(xì)胞趨化功能下降吞噬、殺菌能力與單核巨噬細(xì)胞比擬，中粒細(xì)胞的吞噬殺傷活性最強(qiáng)。中粒吞噬能力明顯下降見于補(bǔ)體或抗體缺陷中粒細(xì)胞酶代謝能力降低慢性肉芽腫顯微鏡檢查白假絲酵母菌吞噬率溶菌法硝基藍(lán)四氮唑復(fù)原試驗(yàn)〔NBT〕〔活性與磷酸己糖旁路代謝活性相關(guān)，即與G6PD酶活性相關(guān)；慢性肉芽腫患者NBT陽性細(xì)胞降低〕巨噬細(xì)胞功能檢測1、炭粒廓清試驗(yàn)2、斑蝥敷貼法測吞噬功能3、溶酶體酶測定4、細(xì)胞毒作用測定巨噬細(xì)胞具有直接吞噬和殺傷病原體和腫瘤細(xì)胞的能力，還具有抗原加工、提呈和免疫調(diào)節(jié)的作用，巨噬細(xì)胞直接參與II和IV型超敏反響，不直接參與I、III型超敏反響。巨噬細(xì)胞外表含清道夫受體、FcrR、TLR、補(bǔ)體受體。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)是檢測淋巴細(xì)胞免疫功能的經(jīng)典試驗(yàn)，其中PHA屬于非特異性刺激物。臨床常見的B細(xì)胞功能缺陷是X連鎖無丙種球蛋白血癥。錫克試驗(yàn)是接種白喉類毒素，觀察機(jī)體是否產(chǎn)生抗毒素反響；該實(shí)驗(yàn)用以評(píng)價(jià)體液免疫功能流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子濃度要防止細(xì)胞因子向細(xì)胞外釋放和漏出，所以活化時(shí)需要參加莫能菌素等阻止蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞膜。流式細(xì)胞儀中收獲率與純度之間有負(fù)向?qū)?yīng)關(guān)系，鞘液的主要作用是包裹在樣本流周圍，使其處于噴嘴中心位置保證檢測精確性，同時(shí)可防止樣本細(xì)胞靠近噴孔壁堵塞噴孔。免疫器官〔略〕臨床免疫疾病與檢驗(yàn)1、超敏反響性疾病與免疫檢驗(yàn)變應(yīng)原在偏酸或偏堿環(huán)境可出現(xiàn)假陽性IgE與IgG4參與I型超敏反響I型超敏反響效應(yīng)細(xì)胞是肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞。目前診斷I型超敏反響方法多用：皮內(nèi)試驗(yàn)+特異性IgE測定，放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn)RAST用于檢測特異性IgE，斑貼試驗(yàn)主要用于尋找接觸性皮炎的過敏原。放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn)〔RAST〕是將純化的變應(yīng)原吸附于固相載體，參加待測血清，再用放射性核素標(biāo)記的抗IgE抗體，定量檢測特異性IgE水平。皮試時(shí)常設(shè)置陰性和陽性對(duì)照，變應(yīng)原的稀釋保存液或生理鹽水用于作陰性對(duì)照。陽性對(duì)照用鹽酸組胺。皮試假陽性見于：變應(yīng)原變質(zhì)或污染，變應(yīng)原稀釋液偏酸或偏堿，患者有皮膚劃痕癥。II型超敏反響〔ADCC效應(yīng)〕IgG和IgM與NK、巨噬細(xì)胞外表FcrR結(jié)合，激活補(bǔ)體產(chǎn)生溶細(xì)胞復(fù)合體，損傷細(xì)胞。糖尿病患者反復(fù)注射胰島素，體內(nèi)產(chǎn)生了大量抗胰島素抗體，再次注射胰島素時(shí)，形成免疫復(fù)合物沉積于血管基底膜上，激活補(bǔ)體，血管通透性增加，局部出現(xiàn)紅腫、出血，為人類局部過敏。使用化裝品引起面部水腫、滲出、癢痛等，屬于皮膚再次接觸相同抗原發(fā)生的IV型變態(tài)反響，即接觸性皮炎。接觸性皮炎-IV型變態(tài)反響血清病-、SLE、RA、鏈球菌感染后腎小球腎炎等III型變態(tài)反響新生兒溶血-II型蕁麻疹-I型自身免疫病與免疫檢驗(yàn)ANA性質(zhì)主要是IgG，無器官特異性和種屬特異性，間接免疫熒光法為抗核抗體檢測的最正確方法，免疫芯片法最敏感。高滴度抗RNP見于混合結(jié)締組織病〔MCTD〕I型自身免疫性肝炎血清標(biāo)記性抗體是高滴度的ASMA抗體。柯薩奇病毒能夠感染機(jī)體并激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)攻擊胰島β細(xì)胞引起糖尿病?？怪z點(diǎn)抗體對(duì)CREST綜合征有很高的敏感性和特異性自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)所用標(biāo)本為受檢者的全血免疫增生病與檢驗(yàn)IL-4可啟動(dòng)休止期B細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期，IL-5促進(jìn)B細(xì)胞增生，IL-6促使B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，正常情況下IL-6可反響抑制IL-4。高水平IL-6是漿細(xì)胞瘤的原因之一。M區(qū)帶的電泳位置可以大致反映出免疫球蛋白的類型，一般IgG型多位于α-慢r區(qū)，IgA型位于β-快r區(qū)，IgM型多位于β2或r區(qū)，IgD多位于β或r區(qū)。輕鏈病患者尿中可以檢測到本周蛋白，由于其分子量小，容易迅速從腎臟排出，故血中反而呈陰性，檢出率不如尿標(biāo)本。免疫缺陷病與檢驗(yàn)HIV除感染CD4+T細(xì)胞外，還能感染巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、B細(xì)胞和腦組織中的小膠質(zhì)細(xì)胞?！部乖f呈細(xì)胞〕HIV早中期B細(xì)胞克隆增多、Ig增多。ADA缺陷是種聯(lián)合免疫缺陷病，見于嬰兒。普通易變型免疫缺陷病屬于B細(xì)胞免疫缺陷病。感染性疾病與檢驗(yàn)?zāi)[瘤與免疫檢驗(yàn)移植免疫檢驗(yàn)同系移植是指移植物取自遺傳基因與受者完全相同或根本相似的供者，如同卵雙生者。HLAI類分子表達(dá)于各種有核細(xì)胞外表，以淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞外表最高；血小板與網(wǎng)織紅細(xì)胞也有表達(dá)，但成熟紅細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞與滋養(yǎng)層細(xì)胞不表達(dá)。HLAII類抗原主要表達(dá)于B細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及其他抗原遞呈細(xì)胞外表。移植反響中受者T細(xì)胞對(duì)供者M(jìn)HC分子直接識(shí)別稱為直接途徑，間接途徑是受者T細(xì)胞識(shí)別經(jīng)過受者APC加工處理的、來源于供者M(jìn)HC分子肽。間接識(shí)別以CD4+T細(xì)胞為主。移植物保存或處理不當(dāng)時(shí)，血液中存在微生物等可導(dǎo)致超急性排斥反響。HLA分型試驗(yàn)可用細(xì)胞分型、血清分型、基因分型和混合淋巴細(xì)胞反響，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)用于檢測T細(xì)胞功能。常用于檢測HLA抗原的血清學(xué)試驗(yàn)是補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)--微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)?；旌狭馨图?xì)胞反響，常用于檢測HLA-D抗原的細(xì)胞反響。B受者細(xì)胞與經(jīng)絲裂霉素C處理的A供體細(xì)胞之間的單相混合淋巴細(xì)胞反響可以預(yù)測相容性，結(jié)果可靠。移植前如果受者血清中存在抗供者淋巴細(xì)胞抗體，80%會(huì)發(fā)生超急性排斥反響，因此必須做HLA交叉配型，常用交叉配型試驗(yàn)是淋巴細(xì)胞交叉毒性試驗(yàn)。HLA-DR、DQ等II類抗原僅分布于B細(xì)胞或巨噬細(xì)胞等遞呈細(xì)胞外表，其檢測需排除HLAI類抗原干擾，多采用待測細(xì)胞為純化的B細(xì)胞。PCR-SBT方法是一種通過對(duì)擴(kuò)增后的HLA基因片段進(jìn)行核酸序列測定。MHCII類基因決定免疫應(yīng)答發(fā)生及強(qiáng)弱。MHC基因是復(fù)等位基因，均為共顯性，決定MHC分子多態(tài)性。HLAII類分子的免疫球蛋白樣區(qū)是ɑ1、β1區(qū)衰老免疫檢驗(yàn)生殖免疫檢驗(yàn)神經(jīng)系統(tǒng)免疫檢驗(yàn)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)三大營養(yǎng)物質(zhì)、維生素、微量元素等生化檢驗(yàn)蛋白質(zhì)和含氮化合物生化檢驗(yàn)清蛋白功能：1、維持血漿膠體滲透壓2、運(yùn)輸營養(yǎng)物質(zhì)與其他3、組織修補(bǔ)材料前清蛋白功能：1、運(yùn)輸甲狀腺激素、視黃醇等2、組織修補(bǔ)材料醋酸膜纖維蛋白電泳時(shí)，ɑ1帶含α1抗胰蛋白酶、α1酸性糖蛋白以及HDL、AFPα2帶主要含銅藍(lán)蛋白、結(jié)合珠蛋白以及α2巨球蛋白β帶有LDL、轉(zhuǎn)鐵蛋白、C3/C4以及β2微球蛋白、纖維蛋白原r帶主要是免疫球蛋白與CRP正常人血清蛋白電泳中白蛋白染色帶最深，α1帶最淺。凝膠過濾法利用蛋白質(zhì)分子量大小不同進(jìn)行別離瓊脂糖凝膠電泳主要利用蛋白所帶電荷以及分子量大小不同別離，SDS去除蛋白所帶電荷大小的影響，主要根據(jù)分子量大小精密別離。穩(wěn)態(tài)電泳，又稱為置換電泳，是指分子顆粒的電泳遷移在一定時(shí)間后到達(dá)穩(wěn)態(tài)，如等電聚焦電泳和等速電泳。電泳按原理可以分為：移動(dòng)界面電泳、區(qū)帶電泳和穩(wěn)態(tài)電泳雙縮脲測定蛋白質(zhì)波長為546nm。改進(jìn)酚試劑測定蛋白質(zhì)反響后有色物質(zhì)最大吸收峰在750nm附近。成人體內(nèi)水分占70%〔二〕糖代謝生化檢驗(yàn)糖原中主要化學(xué)鍵是1,6糖苷鍵糖原合成：由1-磷酸葡萄糖與UTP生成UDP葡萄糖，即葡萄糖的活化，而后每分子UDP葡萄糖參加糖原鏈。肌肉中含糖原的量最多饑餓一天時(shí)血糖主要來源是糖異生小腸上皮細(xì)胞吸收葡萄糖的主要形式是繼發(fā)性主動(dòng)運(yùn)輸，I型糖原累積癥缺乏葡萄糖-6-磷酸酶，6-PG不能轉(zhuǎn)化為GLU，智力低下多早亡。II型糖原累積癥全身糖原堆積，多早亡。III型糖原累積癥脫枝酶缺乏IV型糖原累積癥分枝酶缺乏葡萄糖測定IFCC推薦參考方法為己糖激酶法，我國常用方法為葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法。糖尿病出現(xiàn)白內(nèi)障，主要是由于過高的葡萄糖計(jì)入晶狀體轉(zhuǎn)化成山梨醇，而山梨醇脫氫酶減少導(dǎo)致山梨醇堆積溢出晶狀體，最終導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性沉淀，形成白內(nèi)障。OGTT試驗(yàn)--75g葡萄糖，250ml水溶解，5min內(nèi)口服完IGT--血漿FPG<7.0mmol/l，OGTT>=7.8mmol/l且<11.1mmol/l。ADP/AMP促進(jìn)糖分解產(chǎn)能，ATP促進(jìn)糖異生低血糖是指GLU<2.8mmol/lHbA1c>6.5%說明糖尿病控制不良脂質(zhì)和脂蛋白代謝生化檢驗(yàn)正常人血清膽固醇酯占總膽固醇的70%甘油三酯合成過程中第一個(gè)中間產(chǎn)物是磷脂酸，而后才是甘油一酯。甘油本身并不是脂類肝內(nèi)脂肪運(yùn)出障礙是導(dǎo)致脂肪肝的主要原因LDL受體能與ApoB、ApoE以及氧化修飾的LDL結(jié)合，介導(dǎo)LDL/VLDL、ox-LDL等進(jìn)入細(xì)胞代謝。清道夫受體能與殘粒ApoE、ox-LDL等有高親和力，是LDL受體途徑以外的脂質(zhì)攝取途徑。ApoCII激活脂蛋白脂肪酶LPL，ApoAI能激活卵磷脂脂蛋白脂酰轉(zhuǎn)移酶〔LCAT〕。脂肪發(fā)動(dòng)中限速酶是脂蛋白脂肪酶即甘油三酯脂肪酶，其他參與酶有：肝脂酶、LCAT等。TG酶法測定是先將TG水解為甘油和脂肪酸，然后利用甘油激酶測定甘油，所以TG酶法測定實(shí)際上是測定游離甘油+甘油三酯。HDL-C測定的參考方法是超速離心法，超速離心后HPLC測定。Friedewald公式：LDL-C=TC-(HDL-C+TG*0.2)使用條件：1、空腹血清不含CM；2、TG<4.6mmol/l；3、III型高脂血癥除外。酶學(xué)生化檢驗(yàn)一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品：已經(jīng)確定的穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，其數(shù)值已由決定性方法確定或由高度準(zhǔn)確的假設(shè)干方法確定，所含雜質(zhì)已經(jīng)定量。主要用于校正決定性方法，評(píng)價(jià)和校正參考方法以及為“二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品”定值。二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品：這類標(biāo)準(zhǔn)品可以是純?nèi)芤骸菜蛴袡C(jī)溶劑的溶液〕，也可以存在于相似基質(zhì)中?？捎蓪?shí)驗(yàn)室自己配制或?yàn)樯唐?，其中有關(guān)物質(zhì)的量由參考方法定值或用一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品比擬而確定。主要用于常規(guī)方法的標(biāo)化和控制物的定值。決定性方法--一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品--參考方法二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品常規(guī)方法在形成酶-底物復(fù)合物時(shí)，主要是酶的構(gòu)象發(fā)生變化對(duì)維持紅細(xì)胞正常生理環(huán)境具有極其重要意義的氧化復(fù)原體系是谷胱甘肽〔GSH〕人體中GGT含量最高組織是腎，血中GGT主要來自肝臟，紅細(xì)胞中幾乎沒有GGT。rGT同工酶中，rGT2/3見于正常人，rGT1僅見于重癥肝炎者，rGT4與膽紅素升高有關(guān)。朗伯比爾定律A=K〔摩爾吸光系數(shù)〕C〔溶液濃度〕L〔光徑〕，同一溶液A只與溶液濃度和光徑相關(guān)，與光強(qiáng)度無關(guān)。K=〔V總*106〕/(E*V樣品*L光徑)POD作為工具酶時(shí)，4-氨基安替比林〔4-AAP〕最后呈色為紅色；鄰聯(lián)甲苯胺最后呈藍(lán)色。Α1-抗胰蛋白酶缺乏可導(dǎo)致青壯年肺氣腫，延胡索酸乙酰乙酸水解酶缺陷可導(dǎo)致I型酪氨酸血癥；甲硫氨酸合成酶缺陷可導(dǎo)致同型胱氨酸尿癥，苯丙氨酸羥化酶缺陷可導(dǎo)致苯丙酮尿癥，患兒有智力障礙。生物芯片利用介電電泳別離待測標(biāo)記樣品，大大提高了別離效率鹽析法常用于粗提蛋白，吸附別離法多用于酶的粗制品別離，酶活性不受影響，有機(jī)溶劑沉淀法分辨率高，不需拖延，但易失活。維生素和微量元素代謝生化檢驗(yàn)宏量元素主要是：Na、K、Cl、Ca、Mg、N、S、P等微量元素是指占人體重量的1/10000以下，每人每天需要量在100mg以下，主要是鐵、錳、鋅、銅、鉻、鈷、硒、碘、氟等。有害元素主要：鎘、汞、鉛、鋁肝豆?fàn)詈俗冃杂址Q為Wilson病，是常染色體遺傳的銅代謝障礙病。慢性銅中毒會(huì)在眼角膜形成沉積環(huán)，可有語音模糊不清、震顫等病癥。鋅缺乏可表現(xiàn)異食癖、性發(fā)育障礙。VD缺乏-佝僂病B2缺乏--口角炎PP缺乏--癩皮病VC壞血病B12--惡性貧血甲硫氨酸合成酶的輔酶是維生素B12，四氫葉酸是一碳傳遞單位。胰島素輔助因子的元素是鉻，LDH與ALP中含有Cu微量元素硒能調(diào)節(jié)維生素A、C、E、K吸收與消耗原子吸收分光光度法測定鋅時(shí)，光源應(yīng)采用鋅元素空心陰極燈。體液、酸堿平衡紊亂檢驗(yàn)高滲性脫水，細(xì)胞外液水喪失多于鈉喪失，細(xì)胞內(nèi)外液均減少，水從細(xì)胞內(nèi)流向細(xì)胞外，以細(xì)胞內(nèi)液減少為主。等滲性脫水以血液濃縮為主，組織間液與細(xì)胞內(nèi)液變化不明顯。低滲性脫水，細(xì)胞內(nèi)外液均減少，以組織間液減少為主，細(xì)胞外滲透壓下降，水從組織間液流入細(xì)胞。血清鈉、鉀測定的參考方法是火焰光度法，常用方法為離子選擇性電極法。神經(jīng)細(xì)胞動(dòng)作電位產(chǎn)生是由于細(xì)胞外鉀離子順電勢差流入細(xì)胞內(nèi)，靜息時(shí)神經(jīng)細(xì)胞外正內(nèi)負(fù)，復(fù)極時(shí)是Ca2+外流。所以鉀升高時(shí)，神經(jīng)細(xì)胞興奮性增強(qiáng)，而心肌細(xì)胞靜息電位差下降，興奮性下降。心肌細(xì)胞動(dòng)作電位由Na離子快速流入，Ca流入也參與其中，復(fù)極時(shí)主要是鉀離子流出與鈉鉀泵。Ca離子上升時(shí)，心肌細(xì)胞興奮性增強(qiáng)，而神經(jīng)細(xì)胞由于復(fù)極效率下降，興奮性下降。光譜技術(shù)可以分為發(fā)射光譜、吸收光譜和散射光譜分析；紫外分光光度、原子吸收分光光度法都屬于吸收光譜分析，原子吸收分光光度法按激發(fā)原子化的方式分為火焰原子吸收分光光度法、化學(xué)原子吸收分光光度法、石墨爐原子吸收光度法。血氧含量是指隔絕空氣條件下，血液中實(shí)際含氧量。氧容量是指HB最大結(jié)合氧量。血液中緩沖堿BB包括HB、血漿蛋白、HCO3-/H2PO4-等波爾效應(yīng)是指PH改變會(huì)影響Hb攜氧能力的現(xiàn)象，何爾登效應(yīng)是氧氣與血紅蛋白的結(jié)合促使CO2釋放。血?dú)鈽?biāo)本不能及時(shí)測定，需要保存在有冰塊的水中，目的是防止糖代謝消耗O2，產(chǎn)生CO2，PH下降。持續(xù)嘔吐或鼻胃吸入使大量H+喪失，腎臟對(duì)HCO3-重吸收減少，使尿Cl-排除減少，引起Cl-響應(yīng)型代謝性堿中毒。原發(fā)性醛固酮增多使H+、K+排除增多，HCO3-與Na重吸收增加，Cl-排出增多，引起Cl-抵抗型代謝性堿中毒。酸中毒，HCO3-/H2CO3<20;堿中毒，HCO3-/H2CO3>20。二、各器官、各系統(tǒng)疾病生化檢驗(yàn)肝膽疾病生化檢驗(yàn)AFP半衰期4-5天結(jié)合膽紅素中葡萄糖醛酸的主要供體是UDPGA血膽紅素測定標(biāo)本須防止陽光直接照射，以免膽紅素結(jié)構(gòu)變型。肝臟是生成尿素的唯一器官，是因?yàn)楦闻K含有精氨酸酶，能催化精氨酸水解成鳥氨酸和尿素，還含有CPS-I，胞質(zhì)中含有精氨酸代琥珀酸合成酶、精氨酸酶。人體內(nèi)次級(jí)膽汁酸包括脫氧膽酸和石膽酸以及甘氨酸、?；撬岬慕Y(jié)合物。初級(jí)膽汁酸是指鵝脫氧膽酸和膽酸及其結(jié)合物。游離膽紅素與重氮試劑反響慢，為間接反映陽性；結(jié)合膽紅素與重氮試劑迅速作用產(chǎn)生顏色反響，稱為直接反響陽性。溶血性黃疸，IBIL高度增加，尿膽原強(qiáng)陽性，尿膽紅素陰性肝細(xì)胞性黃疸DBIL、IBIL均增加〔肝細(xì)胞活性下降與膽道堵塞均存在〕，尿膽原正?；蛏?，尿膽紅素增加。阻塞性黃疸時(shí)DBIL高度增加，尿膽原減少或消失，尿膽紅素強(qiáng)陽性腎臟疾病生化檢驗(yàn)慢性腎衰竭時(shí)活性VD3生成缺乏是導(dǎo)致低鈣血癥的主要原因。NAG反映腎小管〔近曲小管〕損傷一次性尿滲量可鑒別腎前性少尿與腎小管壞死導(dǎo)致的少尿，腎前性少尿，其腎小管濃縮稀釋功能正常，一次性尿滲量>450mOsm/(kg*H2O)；腎小管壞死那么一次性尿滲量<350mOsm/(kg*H2O)。腎小管酸中毒是指近端腎小管重吸收HCO3-或遠(yuǎn)端腎小管排H+障礙所致的代謝性酸中毒，根據(jù)腎小管損傷部位及其病理生理分為：I型遠(yuǎn)端腎小管酸中毒，遠(yuǎn)端腎小管排H+障礙引起；II型腎小管酸中毒，近端小管重吸收HCO3-障礙；III型腎小管酸中毒，混合型近曲、遠(yuǎn)曲腎小管均有障礙；IV型腎小管酸中毒由于醛固酮缺乏或醛固酮耐受，使總排H+減少，代酸合并高血鉀。堿性苦味酸顯色反響是一個(gè)非特異性反響，肌酸不與其發(fā)生顯色反響；葡萄糖、丙酮、丙酮酸、肌酐均與其產(chǎn)生反響生成紅色物質(zhì)。心臟疾病生化檢驗(yàn)Mb陰性預(yù)測值100%，是排除AMI最有效的心肌標(biāo)志物。0.5-2h即可升高CK/CK-MB4-6h開始升高，48-72h恢復(fù)CTnT、CTnI3-6h開始升高，10d左右才恢復(fù)胃腸胰疾病生化檢驗(yàn)卓-艾綜合征是指促胃液素瘤骨代謝異常生化檢驗(yàn)成骨細(xì)胞合成骨鈣素骨是脫氧吡啶酚的主要來源，所以脫氧吡啶酚作為骨吸收標(biāo)志物特異性及靈敏度均較高。骨形成標(biāo)志物包括骨鈣素、骨ALP、前膠原肽。膠原交聯(lián)是骨吸收標(biāo)志物。慢性腎衰時(shí)β2微球蛋白排泄受損，沉積于骨可發(fā)生骨淀粉樣變。依替膦酸鈉影響肝臟對(duì)維生素D的代謝，干擾腸道對(duì)鈣的吸收和骨細(xì)胞的功能，引起骨軟化癥。變形性骨炎是指一種病因不明，以進(jìn)行性風(fēng)濕樣骨關(guān)節(jié)痛、脊柱和四肢畸形、病理性骨折及腦、脊髓壓迫病癥為主要表現(xiàn)的慢性骨病，又稱佩吉特病、畸形性骨炎。內(nèi)分泌疾病生化檢驗(yàn)甲狀腺紊亂的檢查指標(biāo)TSH為首選指標(biāo)，游離T3、T4為確診指標(biāo)。131I攝取試驗(yàn)對(duì)甲亢患者有誘發(fā)嚴(yán)重心臟反響的危險(xiǎn)。TRH興奮試驗(yàn)〔TRHstimulatingtest〕是利用促甲狀腺激素釋放激素〔TRH〕具有興奮腺垂體〔垂體前葉〕合成分泌TSH的作用。當(dāng)給受試者外源性TRH后，連續(xù)取血觀察血清中TSH濃度的變化，可以反映垂體對(duì)TRH的反響能力，用于評(píng)價(jià)下丘腦-垂體-甲狀腺軸的調(diào)節(jié)功能。甲狀腺病變性甲亢過高甲狀腺激素抑制TSH分泌，因此TRH興奮試驗(yàn)〔-〕；垂體腺瘤性甲亢TRH興奮試驗(yàn)〔+〕；原發(fā)性甲減時(shí)TRH興奮試驗(yàn)〔++〕，垂體性甲減陰性反響，下丘腦性加減呈延遲反響。高血糖素激發(fā)試驗(yàn)對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷特異性為100%，靈敏度81%。可樂定抑制試驗(yàn)特異性93%，靈敏度87%。成人血漿皮質(zhì)醇峰值與谷值比大于2腎上腺皮質(zhì)功能紊亂首選檢查工程為皮質(zhì)醇水平及晝夜規(guī)律，血漿ACTH一般不作為篩查首選，多配合皮質(zhì)醇用于鑒別皮質(zhì)功能紊亂的種類和病變部位。ACTH興奮試驗(yàn)用于判斷腎上腺皮質(zhì)功能紊亂病變部位。ACTH、皮質(zhì)醇均升高，提示下丘腦、垂體病變〔庫欣病〕或異源性ACTH綜合征，ACTH降低，而皮質(zhì)醇升高提示原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)及單純性肥胖，ACTH升高，皮質(zhì)醇下降提示原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退二者均下降提示繼發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退。腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)者，皮質(zhì)醇水平升高，尤其午夜水平異常升高，晝夜節(jié)律消失；腎上腺皮質(zhì)功能減退者，皮質(zhì)醇水平下降，尤其清晨水平顯著下降，晝夜節(jié)律消失。胰島素原比胰島素多一段C肽。神經(jīng)及精神疾病生化檢驗(yàn)病毒性腦炎，腦脊液中葡萄糖含量常正常。妊娠期相關(guān)疾病生化檢驗(yàn)?zāi)[瘤標(biāo)志物遺傳代謝疾病生化檢驗(yàn)一般染色體基因突變或連鎖分析采用外周血有核細(xì)胞DNA，胎兒產(chǎn)前診斷多采用絨毛膜或羊水DNA，腫瘤基因分析多采用脫落細(xì)胞DNA。治療藥物檢測氨基糖苷類藥物可與肝素形成復(fù)合物影響測定，因此不宜用肝素抗凝血測定。三環(huán)類抗抑郁藥存在特殊“治療窗”，即低于治療窗范圍無效，高于治療窗范圍不但毒副作用增強(qiáng)，療效也下降。穩(wěn)態(tài)電泳，又稱為置換電泳，是指分子顆粒的電泳遷移在一定時(shí)間后到達(dá)穩(wěn)態(tài)，如等電聚焦電泳和等速電泳。電泳按原理可以分為：移動(dòng)界面電泳、區(qū)帶電泳和穩(wěn)態(tài)電泳熒光強(qiáng)度影響因素：1、熒光物質(zhì)濃度，熒光物質(zhì)濃度太高會(huì)發(fā)生自熄滅現(xiàn)象2、溫度升高熒光效率下降3、溶液PH4、溶劑極性增強(qiáng)，熒光強(qiáng)度下降臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)技術(shù)干烤法主要用于玻璃器皿、瓷器消毒；紫外線照射法只能用于消毒物體外表和手術(shù)室、無菌操作室等空氣及不耐熱物外表消毒；高壓蒸汽滅菌適于耐高壓不怕濕熱的物體，過濾除菌法用于空氣消毒及一些不耐高溫的血清、抗生素等；巴氏消毒主要用于牛乳等消毒。紫外線消毒效果生物學(xué)監(jiān)測指示菌常用枯草芽孢黑色變種ATCC9372。標(biāo)本采集細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)未染色活菌檢查常用暗視野顯微鏡，在不染色微生物或者組織切片中尋找微生物多用相差顯微鏡。別離L型細(xì)菌常用的高深培養(yǎng)基屬于特殊培養(yǎng)基，膽鹽肉湯管屬于選擇培養(yǎng)基。碳水化合物代謝試驗(yàn)：糖發(fā)酵、O/F、ONPG、七葉苷水解試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、VP蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)：吲哚試驗(yàn)、氨基酸脫羧酶試驗(yàn)、明膠液化實(shí)驗(yàn)、尿素分解試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)均為蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)。酶類試驗(yàn)：CAMP試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)、脂酶試驗(yàn)、硝酸鹽復(fù)原試驗(yàn)、膽汁溶菌試驗(yàn)。抑菌試驗(yàn)：桿菌肽試驗(yàn)、Optochin、O/129DNA瓊脂陽性質(zhì)控菌粘質(zhì)沙雷菌，陰性質(zhì)控菌表皮葡萄球菌苯丙氨酸脫氨酶陽性質(zhì)控菌雷極變形桿菌，陰性質(zhì)控菌弗勞地枸櫞酸桿菌膽汁-七葉苷陽性質(zhì)控菌糞腸球菌，陰性質(zhì)控菌化膿性鏈球菌。細(xì)菌耐藥性檢測轉(zhuǎn)化受體菌直接攝取外界游離DNA接合--細(xì)菌通過性菌毛傳遞質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體將供體菌的DNA片段帶到受體菌中并整合溶原性轉(zhuǎn)換噬菌體的遺傳物質(zhì)整合到受體菌中原生質(zhì)融合兩種不同細(xì)菌除去細(xì)胞壁后直接融合。大環(huán)內(nèi)酯類藥物：阻礙核蛋白體50S亞基聯(lián)接，通過抑制蛋白合成產(chǎn)生抑菌作用。環(huán)丙沙星作用機(jī)制：抑制DNA旋轉(zhuǎn)酶，阻礙DNA合成呋喃妥因作用機(jī)制：干擾細(xì)菌的氧化復(fù)原系統(tǒng)AmpC酶能水解一、二、三代頭孢菌素、單酰胺類抗生素如氨曲南和頭霉素類抗生素如頭孢西丁。細(xì)菌對(duì)氯霉素耐藥機(jī)制多為細(xì)菌獲得編碼氯霉素轉(zhuǎn)乙?；傅馁|(zhì)粒，編碼乙酰轉(zhuǎn)移酶滅活氯霉素。自然界細(xì)菌多四環(huán)素耐藥多為產(chǎn)生泵出系統(tǒng)。革蘭陰性菌由于含有外膜，使其免受溶菌酶的水解，也因此萬古霉素對(duì)革蘭陰性菌無殺菌作用。抑菌濃度指數(shù)FIC<0.5協(xié)同作用0.5-1相加作用1-2無關(guān)作用>2拮抗作用CAZ≤22mm、ATM≤27mm、CTX≤27mm、CRO≤25mm其中一個(gè)，那么提示菌株可能產(chǎn)ESBLs；那么對(duì)青霉素類、第三代頭孢菌素〔頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢哌酮、頭孢曲松等〕、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素〔氨曲南〕耐藥。通常不水解頭霉素類〔頭孢西丁、頭孢美唑等〕和碳青霉烯類〔亞胺培南、美羅培南等〕。其活性可以被克拉維酸、舒巴坦、他唑巴坦等β-內(nèi)酰胺酶抑制劑所抑制。我國的產(chǎn)ESBLs菌株主要是分解頭孢噻肟的CTX-M型。肺炎鏈球菌K-B法測定青霉素類敏感性用苯唑西林代替，MICs〔如ETest〕可以測定青霉素敏感。MRSA不管體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)所有β-內(nèi)酰胺類藥物均無療效，包括加酶抑制劑者均無效。β-內(nèi)酰胺酶檢測推薦采用頭孢硝噻酚紙片法；超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測對(duì)象為大腸埃希菌、克雷伯菌、奇異變形等；碳青霉烯酶檢測包括EDTA協(xié)同試驗(yàn)和改進(jìn)Hodge試驗(yàn)；耐甲氧西林葡萄球菌檢測包括頭孢西丁紙片法和苯唑西林瓊脂稀釋法；氨基糖苷高水平耐藥的腸球菌有紙片法、液體稀釋法和瓊脂稀釋法；萬古霉素耐藥常用液體稀釋法和瓊脂稀釋法。二、臨床細(xì)菌學(xué)外毒素主要由革蘭陽性菌產(chǎn)生，少數(shù)革蘭陰性菌也可以產(chǎn)生；外毒素大多數(shù)是多肽，對(duì)組織具有高度選擇性；外毒素經(jīng)甲醛作用脫毒后，保存免疫原性，稱為類毒素。第一局部需氧菌球菌凝固酶試驗(yàn)：金葡、中間葡萄球菌均呈陽性，路登葡萄球菌結(jié)合型凝固酶陽性而不分泌游離凝固酶。肺炎鏈球菌膽汁溶菌試驗(yàn)陽性，多數(shù)菌株分解菊糖；草綠色鏈球菌不被膽汁溶解，不分解菊糖。A群鏈球菌產(chǎn)生紅疹毒素導(dǎo)致猩紅熱。齲齒--變異性鏈球菌。腸桿菌科我國飲水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定大腸桿菌數(shù)應(yīng)小于或等于3/LETEC主要引起旅行者腹瀉EIEC引起志賀樣腹瀉〔粘液膿血便〕EHEC又稱產(chǎn)志賀樣毒素大腸埃希菌，O157：H7引起出血性大腸炎和溶血性尿毒綜合征EPEC主要引起嬰幼兒腹瀉。傷寒沙門菌周身鞭毛食物中毒是最常見的沙門菌感染。傷寒最早表現(xiàn)為發(fā)熱、腹瀉持續(xù)一周，可見玫瑰疹，脈搏出現(xiàn)相對(duì)緩脈，血常規(guī)檢查白細(xì)胞不升高，嗜酸粒細(xì)胞消失。志賀菌屬一般不侵入血流，產(chǎn)生內(nèi)毒素，易形成內(nèi)毒素血癥，另外A群志賀菌能產(chǎn)生一種外毒素志賀毒素〔ST〕,能引起Vero細(xì)胞病變，又稱為Vero毒素〔VT〕。腸道桿菌菌落S-R變異，是由于失去了特異性多糖。七葉苷水解試驗(yàn)中，F(xiàn)e2+與七葉素反響生成黑色化合物。非發(fā)酵格蘭陰性桿菌熒光假單胞菌能在4攝氏度環(huán)境下生長，故可以在冰箱儲(chǔ)存的血液制品中生長繁殖，易導(dǎo)致醫(yī)源性感染。鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)全部氨基青霉素、一代二代頭孢和一代喹諾酮類天然耐藥。其他革蘭陰性桿菌氣單胞菌屬腸道外感染，主要為皮膚和軟組織感染，主要由嗜水氣單胞菌和維隆氣單胞菌引起。棒狀桿菌白喉棒狀桿菌菌體一端或兩端膨大的革蘭陽性菌，無莢膜、無芽孢、無鞭毛、無菌毛。在細(xì)菌的一端或兩端有濃染的顆粒，和菌體著色不均一，稱為異染顆粒。白喉棒狀桿菌能在亞碲酸鹽瓊脂平板上將碲鹽復(fù)原為元素碲，使菌落呈黑色。白喉棒狀桿菌致病主要靠外毒素。錫克試驗(yàn)是利用毒素和抗毒素的中和試驗(yàn)，用以檢測機(jī)體對(duì)白喉有無免疫力，還可以用于白喉預(yù)防接種后檢測是否產(chǎn)生免疫力。其他革蘭陽性桿菌分枝桿菌、放線菌、諾卡菌卡介苗是減毒牛型結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分支桿菌細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)，故抗酸染色時(shí)不易著色，且因此對(duì)理化因素抵抗力較強(qiáng)，但對(duì)濕熱敏感。結(jié)核分枝桿菌不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素以及侵襲酶，其致病性可能與菌體成分以及代謝物質(zhì)的毒性及菌體成分產(chǎn)生的免疫損傷有關(guān)。麻風(fēng)桿菌是典型的胞內(nèi)寄生菌，有麻風(fēng)桿菌存在的細(xì)胞呈泡沫狀稱為麻風(fēng)細(xì)胞，是與結(jié)核分枝桿菌區(qū)別的重要標(biāo)志。諾卡菌屬形態(tài)與放線菌相似，但菌絲末端不膨大，革蘭染色著色不均，抗酸染色弱陽性。壓碎顆粒，中心部位革蘭陽性，邊緣的流蘇樣小體革蘭陰性。引起人類放線菌病的常見菌種為牛放線菌，衣氏放線菌在牛心腦浸液瓊脂上可形成面包屑營養(yǎng)菌落。第二局部厭氧菌脆弱類擬桿菌為革蘭陰性，著色不均，中間不著色或較淺，培養(yǎng)物圖片染色呈明顯多形性，膽汁七葉苷中生長旺盛。常寄生于人口腔、腸道和女性生殖道。第三局部非典型細(xì)菌〔細(xì)菌門中其他原核生物〕螺旋體腓腸肌痛，接觸污水等是鉤體病比擬典型的特征。鉤端螺旋體可接種于含10%兔血清的Kothof培養(yǎng)基，28攝氏度培養(yǎng)最正確疏螺旋體接種于改進(jìn)Kelly培養(yǎng)基。伯氏螺旋體萊姆病--移行性紅斑蜱傳播梅毒螺旋體檢測中非特異性密螺旋體抗原試驗(yàn)：VDRL、USR、快速血漿反響素環(huán)狀卡片試驗(yàn)〔RPR〕、自動(dòng)反響素試驗(yàn)〔ART〕。特異性密螺旋體抗原試驗(yàn)有：梅毒密螺旋體微量血凝試驗(yàn)〔MHA-TP〕和熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)〔FTA-ABS〕。硬下疳--梅毒一期軟下疳杜克雷嗜血桿菌引起的性傳播疾病回歸熱螺旋體虱傳播流行性斑疹傷寒人體虱地方性斑疹傷寒鼠蚤或鼠虱支原體支原體主要以二分裂形式進(jìn)行繁殖，生長需要膽固醇和酵母，菌落能夠吸附豚鼠紅細(xì)胞，能產(chǎn)生溶血素，在培養(yǎng)皿上初代菌落“草莓”狀，反復(fù)傳代后呈“荷包蛋”菌落。肺炎支原體冷凝集試驗(yàn)常用于肺炎支原體的快速篩查試驗(yàn)。支原體P1膜蛋白和菌體蛋白是支原體的主要型特異性抗原，其抗原性常用生長抑制試驗(yàn)和代謝抑制試驗(yàn)鑒定。ELISA檢測P1蛋白和多肽相應(yīng)抗體，是目前診斷MP感染的可靠方法；補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是診斷MP常用的血清學(xué)方法。衣原體衣原體具有獨(dú)特發(fā)育周期：原體，有細(xì)胞壁，內(nèi)含致密核質(zhì)，無繁殖能力，但有高度感染性；網(wǎng)狀體又稱為始體，無細(xì)胞壁，胞質(zhì)內(nèi)不含致密核質(zhì)，有繁殖能力，但無感染性。沙眼衣原體的包涵體中含有糖原，碘染色可以著色呈陽性。沙眼分泌物Giemsa染色鏡下可見包涵體，有診斷價(jià)值。Giemsa染色可以鑒別衣原體原體和始體。二乙氨基乙基葡萄糖用于處理細(xì)胞，提高沙眼衣原體培養(yǎng)成功率。立克次體立克次體含有DNA和RNA，專性活細(xì)胞內(nèi)寄生，以二分裂方式繁殖，有群特異性抗原和種特異性抗原。斑疹傷寒、恙蟲病、Q熱立克次體別離多用動(dòng)物接種；埃里克體用細(xì)胞培養(yǎng)；羅沙利馬體〔巴通體屬〕可用培養(yǎng)基培養(yǎng)。貝納柯克斯體有莢膜，在雞胚卵黃囊中可以形成芽孢。流行斑疹傷寒普氏立克次體地方性斑疹傷寒--莫氏立克次體Q熱貝納柯克斯體恙蟲病恙蟲病立克次體，恙蟲病重要體征黑色焦痂+外斐試驗(yàn)OXK陽性，傳播媒介為恙螨。Gimenez染色可以鑒別恙蟲病立克次體。外斐試驗(yàn)陰性Q熱、立克次體病及羅沙利馬體感染立克次體常用染色方法：Giemsa普氏立克次體--紫紅色Gimenez染色普氏立克次體紅色GimenezQ熱紅色一般斑疹傷寒與OX19凝集試驗(yàn)陽性、OX2低滴度陽性；恙蟲病時(shí)OXK高滴度陽性。三、真菌球孢子菌、組織胞漿菌等均為雙相性真菌，隱球菌是酵母菌，是單細(xì)胞真菌。孢子是真菌的繁殖器官，分為有性孢子和無性孢子，有性孢子有：卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔(dān)孢子；無性孢子分為：葉狀孢子、分生孢子、孢子囊孢子。芽生孢子是有菌絲體細(xì)胞出芽生成孢子，是葉狀孢子的一種，常見于假絲酵母菌與隱球菌。孢子囊孢子是菌絲末端膨大形成，內(nèi)含大量孢子，成熟時(shí)破囊而出。由生殖菌絲在末端分裂或收縮而成的是分生孢子。尿素培養(yǎng)基可以鑒別酵母菌與類酵母菌，酵母菌如新型隱球菌能產(chǎn)生脲酶。厚壁孢子試驗(yàn)：假絲酵母菌在玉米粉培養(yǎng)基25攝氏度條件下培養(yǎng)1-2天后，僅白假絲酵母菌在菌絲頂端、側(cè)緣或中間形成厚壁孢子。隱球菌不發(fā)酵糖。假菌絲是指菌絲向培養(yǎng)基下生長瑞氏染色液適合檢出莢膜組織胞漿菌。真菌常量肉湯稀釋法藥敏試驗(yàn)，最終接種菌量為1*103--5*103/ml。病毒呼吸道病毒呼吸道病毒檢驗(yàn)：正粘病毒科流感病毒副粘病毒科副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒其他病毒科--鼻病毒、腺病毒、風(fēng)疹病毒、冠狀病毒、呼腸病毒科〔如：輪狀病毒〕等腺病毒為雙鏈DNA病毒。流行性感冒特征表現(xiàn)多為急性起病、高熱、頭痛和全身肌肉痛。全身中毒病癥明顯而呼吸道病癥較輕。流感兒童忌用阿司匹林，因其與流感患兒肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥有關(guān)，偶爾可致死。流感病毒雞胚培養(yǎng)初次別離病毒應(yīng)接種于羊膜腔，傳代培養(yǎng)接種于尿囊腔。流感病毒細(xì)胞培養(yǎng)首選猴腎細(xì)胞或犬腎傳代細(xì)胞。鑒定副流感病毒最常用的方法是紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)，也可用血凝抑制、中和試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。麻疹出疹期皮疹開始為不規(guī)那么的紅色斑丘疹，始于耳后、頸部、發(fā)際邊緣，24h普及全身丘疹大局部壓之褪色。頰部黏膜相當(dāng)于下部磨牙位置外側(cè)出現(xiàn)白斑點(diǎn)，即麻疹黏膜斑，對(duì)麻疹的早期診斷有決定性意義。麻疹肺炎是麻疹最常見并發(fā)癥，占麻疹死亡病例的90%，麻疹重癥期首選丙種球蛋白治療。麻疹病毒與亞急性硬化性全腦炎〔SSPE〕相關(guān)。呼吸道合胞病毒不能在雞胚中繁殖，只能在人猴細(xì)胞如Hep-2、Hela等細(xì)胞株中繁殖。呼吸道合胞病毒不引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。嬰幼兒下呼吸道感染最常見的病毒?；撔匀傺锥嗍且粋?cè)腮腺腫大，局部紅腫壓痛明顯，有膿液。流行性腮腺炎時(shí)雙側(cè)腫大，發(fā)熱但不紅腫，白細(xì)胞不升高。腺病毒不能在雞胚中生長，人胚腎細(xì)胞對(duì)其最敏感。腸道病毒腸道病毒：柯薩奇病毒、ECHO病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、腸道病毒71型脊髓灰質(zhì)炎癱瘓型患者特征表現(xiàn)肢體馳緩性癱瘓。臨床上絕大多數(shù)病毒性心肌炎由柯薩奇病毒和?？刹《疽穑滤_奇病毒B組是人體心肌炎的首位病原體?？滤_奇病毒主要經(jīng)糞口途徑傳播。腸道病毒：小RNA病毒科腸道病毒屬--脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒、?？刹《尽⑿履c道病毒鑒定腸道病毒標(biāo)準(zhǔn)方法為中和試驗(yàn)。輪狀病毒具有雙層衣殼，從內(nèi)向外放射狀排列，呈車輪狀。輪狀病毒A組是世界性嬰幼兒重癥腹瀉最常見病原體。輪狀病毒A組主要侵襲嬰幼兒，以秋冬季流行為主；B組主要引起成人腹瀉，無明顯季節(jié)性。肝炎病毒HBeAg不是HBV結(jié)構(gòu)蛋白，故不是HBV病毒復(fù)制所必須的成分，但是HBV復(fù)制和感染性的指標(biāo)。HBV基因組比擬奇特，DNA雙鏈可分別編碼。HEV在胞漿中裝配，可形成包涵體。HBV感染后第一個(gè)出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志物--HBsAg，HBV存在和復(fù)制活潑的直接指標(biāo)為HBcAg，診斷HBV感染最直接指標(biāo)HBV-DNA。皰疹病毒幼兒急疹潛伏期8-14天，平均10天，起病急，體溫突然升高達(dá)39-41攝氏度，持續(xù)3-5天，一般情況好，熱退9-12小時(shí)出現(xiàn)皮疹，伴有斑丘疹，散在分布于軀干、頸部及上肢，幾小時(shí)內(nèi)皮疹開始消退，一般2-3天內(nèi)消失，無色素沉積。帶狀皰疹多發(fā)生于成人，發(fā)熱后1-4天出現(xiàn)皮疹，常成群分布，迅速變?yōu)樗?，帶狀排列。黃病毒、出血熱病毒流行性乙腦傳播媒介為三帶喙庫蚊，登革病毒傳播媒介為伊蚊腎病出血熱漢坦病毒流行性出血熱表現(xiàn)為明顯的感染中毒病癥，結(jié)膜充血水腫，腎臟損害表現(xiàn)為蛋白尿、尿量減少和氮質(zhì)血癥。逆轉(zhuǎn)錄病毒HIV特異性糖蛋白是P24，其外表刺突蛋白gp120、gp41由Env基因編碼。HIV為脂蛋白包膜，HCV為蛋白包膜，腮腺炎病毒、麻疹病毒為脂質(zhì)雙分子層包膜，腺病毒無包膜。AIDS最常見、最嚴(yán)重的時(shí)機(jī)感染性疾病為卡氏肺孢子菌感染，可引起致死性感染。其他病毒、朊粒朊病毒感染常見于器官移植或者或者神經(jīng)外科手術(shù)患者，主要因手術(shù)器械消毒不徹底引起。水痘-帶狀皰疹病毒在感染細(xì)胞核內(nèi)可見嗜酸性包涵體；單純皰疹病毒在細(xì)胞核內(nèi)可見嗜酸性包涵體；呼吸道合包病毒在胞漿內(nèi)形成嗜酸性包涵體；麻疹病毒胞核與胞漿內(nèi)均可見嗜酸性包涵體；漢坦病毒不形成嗜酸性包涵體。流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、漢坦病毒均為單負(fù)鏈RNA病毒丙型肝炎病毒是有蛋白包膜的單正鏈RNA病毒。HSV主要通過接觸傳播，HHV-6主要經(jīng)口口傳播或口手傳播，VZV主要通過呼吸傳播。HPV-6型--鋒利濕疣HPV16、18型宮頸內(nèi)瘤變臨床血液學(xué)檢驗(yàn)造血檢驗(yàn)根底理論與方法1.造血理論根底造血：卵黃囊胚胎2-9w造血干細(xì)胞絕大多數(shù)表達(dá)CD34和Thy-1，特定條件下，可在脾內(nèi)形成造血結(jié)節(jié)，具有自我更新能力和多向分化能力，只進(jìn)行不對(duì)稱分裂。造血祖細(xì)胞CD34弱表達(dá)，可表達(dá)CD38，局部或全部失去了自我更新能力，定向分化，進(jìn)行對(duì)稱分裂。紅細(xì)胞早期集落形成單位〔BFU-E〕是骨髓中紅細(xì)胞系造血細(xì)胞形成的細(xì)胞集落，BFU-E增加見于真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性骨髓纖維化，減少見于再障、急性白血病、急性紅白血病及鐵粒幼細(xì)胞性貧血等。造血檢驗(yàn)方法〔1〕血象、骨髓象骨髓檢查：正常骨髓象一般觀察200個(gè)細(xì)胞進(jìn)行分類，增生明顯活潑者應(yīng)計(jì)數(shù)400-500，甚至1000個(gè)細(xì)胞；對(duì)于增生極度減低者可計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞。正常人骨髓象核分裂細(xì)胞<1%骨髓細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)泡沫細(xì)胞是指尼曼-匹克細(xì)胞。骨髓活檢：AA可見殘存孤立性幼紅細(xì)胞島；巨幼細(xì)胞貧血可見不同階段紅細(xì)胞增生，分裂象易見；慢粒中晚幼粒增多，同時(shí)吞噬細(xì)胞增加，形成“星空樣”圖像；MDS最重要特征是檢出不典型微巨核細(xì)胞和未成熟前體細(xì)胞異常定位；MM是骨髓內(nèi)漿細(xì)胞均一性、結(jié)節(jié)性聚集。骨髓增生性疾病是骨髓組織持續(xù)增生引起的疾病，通常指真性紅細(xì)胞增多癥、CML、原發(fā)性骨髓纖維化、原發(fā)性血小板增多。細(xì)胞化學(xué)染色NAP積分增加見于細(xì)菌感染、再障、急淋、惡性淋巴瘤、慢性粒細(xì)胞白血病急變期等，NAP積分下降見于慢性粒細(xì)胞白血病、PNH、MDS、急粒、惡性組織病等。NAP主要用于區(qū)別類白血病反響和慢粒，慢粒確實(shí)診有賴Ph染色檢出。POX特異性高于SBB，POX染色要求新鮮涂片；SBB敏感性高于POX，SBB較繁瑣，可以用舊片。POX染色成功標(biāo)志--成熟粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽性；鑒別急性白血病首選細(xì)胞化學(xué)染色POX，POX染色原始粒細(xì)胞可呈陽性，原淋及幼稚淋巴細(xì)胞陰性，急單時(shí)少數(shù)細(xì)胞可呈陽性。脂酶染色分為特異性脂酶染色〔NAS-DCE〕和非特異性(α-NAE/NAS-DAE、α-NBE)萘酚AS-D氯乙酸脂酶(NAS-DCE)，又稱特異性脂酶，主要用于鑒別急性白血病，急粒白血病細(xì)胞陽性，急單和急淋均為陰性，急粒單白血病局部細(xì)胞陽性；肥大細(xì)胞可呈陽性，其余細(xì)胞均為陰性。α-醋酸萘酚酯酶染色〔α-NAE〕和NAS-DAE是一類反響，單核系統(tǒng)細(xì)胞陽性且陽性可以被NaF抑制，粒細(xì)胞少局部陽性、少數(shù)淋巴細(xì)胞以及巨核細(xì)胞、血小板均為陽性，且不能被NaF抑制。α-丁酸萘酚酯酶染色〔α-NBE〕單核細(xì)胞呈陽性且能被NaF抑制，粒細(xì)胞各階段均為陰性反響，組織細(xì)胞可呈陽性且不能被NaF抑制。PAS染色粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、成熟巨核細(xì)胞、血小板均為陽性，戈謝細(xì)胞強(qiáng)陽性，尼曼-匹克細(xì)胞胞質(zhì)陽性，空泡陰性；有核紅細(xì)胞與紅細(xì)胞均為陰性，大局部淋巴細(xì)胞陰性，少數(shù)淋巴細(xì)胞可呈陽性。糖原染色〔PAS〕主要用于紅系良惡性疾病鑒別，α-NBE+NaF可用于鑒別急性單核細(xì)胞白血病與惡性組織??；ACP用于鑒別毛細(xì)胞白血病和脂質(zhì)代謝障礙性疾病。ACP染色可以鑒別T/B淋巴細(xì)胞白血病，T細(xì)胞陽性，而B細(xì)胞陰性或弱陽性；ACP染色戈謝細(xì)胞強(qiáng)陽性，尼曼匹克細(xì)胞陰性。T〔8；21〕M2bT〔8；14〕B-ALL紅細(xì)胞檢驗(yàn)貧血：Hb極重--30--重--60--中90輕骨髓中細(xì)胞外鐵主要存在骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)鐵存在于中晚幼紅細(xì)胞、鐵粒幼紅細(xì)胞、環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞等。感染和某些慢性病導(dǎo)致貧血，細(xì)胞外鐵增加而鐵粒幼紅細(xì)胞減少，鐵利用障礙。G6PD缺乏時(shí)高鐵血紅蛋白復(fù)原率下降?？箟A