G -B- 7300.502-2023 飼料添加劑 第5部分：微生物 植物乳桿菌（正式版）

飼料添加劑第5部分：微生物植物乳桿菌Lactobacillusplantarum國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)本文件為GB7300《飼料添加劑》的第502部分。GB7300已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第1部分：氨基酸、氨基酸鹽及其類似物——第1部分：氨基酸、氨基酸鹽及其類似物——第1部分：氨基酸、氨基酸鹽及其類似物蛋氨酸羥基類似物(GB7300.103);——第2部分：維生素及類維生素——第2部分：維生素及類維生素——第2部分：維生素及類維生素——第2部分：維生素及類維生素甜菜堿鹽酸鹽(GB7300.204);——第3部分：礦物元素及其絡(螯)合物——第3部分：礦物元素及其絡(螯)合物亞硒酸鈉(GB7300.302);——第4部分：酶制劑木聚糖酶(GB7300.401);——第4部分：酶制劑纖維素酶(GB7300.403);——第5部分：微生物——第5部分：微生物植物乳桿菌(GB7300.502);——第5部分：微生物——第5部分：微生物嗜酸乳桿菌(GB7300.504);——第6部分：非蛋白氮尿素(GB7300.601);——第8部分：防腐劑、防霉劑和酸度調(diào)節(jié)劑碳酸氫鈉(GB7300.801);——第10部分：調(diào)味和誘食物質(zhì)谷氨酸鈉(GB7300.1001);——第10部分：調(diào)味和誘食物質(zhì)大蒜素(GB7300.1002)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出并歸口。Ⅱ1飼料添加劑第5部分：微生物植物乳桿菌本文件規(guī)定了飼料添加劑植物乳桿菌的技術要求、采樣、檢驗規(guī)則、標簽、包本文件適用于以植物乳桿菌為菌種，經(jīng)液態(tài)發(fā)酵、干燥等工藝后制得的飼料添加劑產(chǎn)品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于GB/T5917.1飼料粉碎粒度測定兩層篩篩分法GB/T6435飼料中水分的測定GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB10648飼料標簽GB13078飼料衛(wèi)生標準GB/T13079飼料中總砷的測定GB/T13080—2018飼料中鉛的測定原子吸收光譜法GB/T13081飼料中汞的測定GB/T13082飼料中鎘的測定GB/T13091飼料中沙門氏菌的測定GB/T13092飼料中霉菌總數(shù)測定方法GB/T13093飼料中細菌總數(shù)的測定GB/T14699.1飼料采樣GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B?的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T18869飼料中大腸菌群的測定GB/T28716飼料中玉米赤霉烯酮的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法GB/T30956飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。植物乳桿菌Lactobacillusplantarum屬于細菌界厚壁菌門芽孢桿菌綱乳桿菌目乳桿菌科乳桿菌屬，為革蘭氏陽性桿菌，菌體為直或彎的24技術要求載體和稀釋劑品種來自《飼料原料目錄》或《飼料添加劑品種目錄》,并符合GB13078物質(zhì)及微生物的限量要求。中有毒有害理化指標應符合表1的要求。植物乳桿菌活菌計數(shù)/(CFU/g)活菌數(shù)以每克產(chǎn)品中菌落形成單位(colonyformingunits,CFU)表示。衛(wèi)生指標應符合表2的要求。表2衛(wèi)生指標總砷/(mg/kg)鉛/(mg/kg)汞/(mg/kg)鎘/(mg/kg)黃曲霉毒素B?/(μg/kg)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇“/(mg/kg)玉米赤霉烯酮/(mg/kg)大腸菌群/(MPN/g)霉菌總數(shù)/(CFU/g)不得檢出表中所列限量，除特別注明外，均以干物質(zhì)含量88%為基礎計算(大腸菌群、霉菌總數(shù)、沙門氏菌除外)此類指標僅適用于植物性載體生產(chǎn)的產(chǎn)品。3樣品的采集應遵循隨機性、代表性的原則，采樣過程應符合無菌采樣要求，防止一切可能的外來5.2.1應在同一批次產(chǎn)品中采集樣品，每件樣品的采樣量應滿足微生物指標檢驗的要求，一般不少于5.2.2獨立包裝小于或等于500g的產(chǎn)品，取完整包裝。5.2.3獨立包裝大于500g的產(chǎn)品，應用無菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品，放入同5.3.1應盡快將樣品送往實驗室檢驗。5.3.2應在運輸過程中保持樣品完整。5.3.3應在接近原有貯存溫度條件下貯存樣品，或采取必要措施防止樣品中微生物數(shù)量的變化。6試驗方法6.2植物乳桿菌鑒定按附錄A規(guī)定的方法測定。按附錄B規(guī)定的方法測定。若為包被植物乳桿菌產(chǎn)品，應提供溶解方法。按GB/T6435規(guī)定的方法測定。按GB/T5917.1規(guī)定的方法測定。按GB/T13079規(guī)定的方法測定。按GB/T13080—2018規(guī)定的方法測定。4按GB/T13081規(guī)定的方法測定。按GB/T13082規(guī)定的方法測定。按GB/T17480規(guī)定的方法測定。6.11脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)按GB/T30956規(guī)定的方法測定。按GB/T28716規(guī)定的方法測定。按GB/T18869規(guī)定的方法測定。按GB/T13091規(guī)定的方法測定。7檢驗規(guī)則以相同材料、相同的生產(chǎn)工藝，經(jīng)連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批，但每批產(chǎn)品不應超過50t。型式檢驗項目為第4章規(guī)定的所有項目，在正常生產(chǎn)情況下，每半年至少進行1次型式檢驗。有下a)產(chǎn)品定型投產(chǎn)時；b)生產(chǎn)工藝、配方或主要原料來源有較大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時；c)停產(chǎn)3個月以上，重新恢復生產(chǎn)時；d)出廠檢驗結果與上次型式檢驗結果有較大差異時；e)管理部門提出檢驗要求時。56(規(guī)范性)植物乳桿菌菌種鑒別方法A.1形態(tài)鑒別蛋白胨牛肉粉吐溫80磷酸氫二鉀(K?HPO?·7H?O)乙酸鈉(CH?COONa·3H?O)檸檬酸三銨硫酸鎂(MgSO?·7H?O)硫酸錳(MnSO?·4H?O)pH將各成分加入蒸餾水中，加熱不斷攪拌，煮沸使瓊脂完全溶解，115℃高壓滅菌15min～20min。臨用時加熱使培養(yǎng)基熔化，冷卻至45℃~50℃時使用。A.1.2菌落選擇用接種針或接種環(huán)隨機挑取5個菌落。A.1.3菌體染色及形態(tài)檢驗革蘭氏染色陽性。菌體細胞呈圓端直桿狀，通常寬為0.9μm～1.2μm,長為3.0μm～8.0μm,單A.1.4菌落形態(tài)在MRS培養(yǎng)基的瓊脂平板上菌落生長形態(tài)特征為：白色、偶爾呈淺黃或深黃色，邊緣整齊、表面光A.2生理生化特征接種并培養(yǎng)24h,進行表A.1中各項試驗。7表A.1植物乳桿菌生理生化特征試驗項目結果試驗項目結果十十十山梨醇十十十十十一 注1:“十”表示為90%以上的菌株為陽性反應；“一”表示90%以上菌株為陰性反應。A.3分子生物學鑒定采用核酸序列分析法對菌株rRNA酸序列數(shù)據(jù)庫中模式菌株ATCC14917判定該菌株為植物乳桿菌(Lactobacillus基因中16SrRNA全基因序列進行分析，與GenBank等國際核的16SrRNA基因序列進行同源性比較，序列差異小于1%,則8(規(guī)范性)植物乳桿菌活菌計數(shù)B.1.2生理鹽水B.1.2.2制法將氯化鈉加入蒸餾水中，攪拌溶解，分裝，121℃高壓滅菌15min。在按照GB/T14699.1進行采樣基礎上，稱取25.0g樣品，加入225mL無菌生理鹽水(對于包被產(chǎn)品，可采用廠家提供的方法進行預處理)中均質(zhì)。待均勻后，再將樣品用無菌溶劑按十倍稀釋法制成不同濃度稀釋液。取1.0mL合適濃度稀釋液，注入無菌平皿，每個稀釋度做兩個平皿。將融化并冷卻至45℃~50℃的MRS培養(yǎng)基，向每個培養(yǎng)皿中倒入15mL～20mL,搖勻并凝固，制