《六堡茶鮮葉中噻蟲嗪、啶蟲脒、吡蟲啉、呋蟲胺、水胺硫磷5種農(nóng)藥殘留檢測 膠體金免疫層析法》征求意見稿

Q/LB.□XXXXX-XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由梧州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全綜合檢測中心提出。本文件由廣西農(nóng)業(yè)農(nóng)村產(chǎn)業(yè)振興促進會歸口。本文件起草單位：梧州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全綜合檢測中心、山東美正生物科技有限公司、廣西益譜檢測技術(shù)公司、廣西-東盟食品檢驗檢測中心、蒼梧縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心、蒼梧縣六堡鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心、藤縣濛江鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村中心、蒼梧縣六堡茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司、蒼梧縣六堡鎮(zhèn)官營坪六堡茶專業(yè)合作社、蒼梧縣不倚恭州茶業(yè)有限公司、蒼梧縣心怡六堡茶業(yè)有限公司。本文件主要起草人：楊桂強、吳玉鈞、高君、黃海軍、王瀅、趙長軍、李吉生、田華麗、甘祥鴻、陳小聰、劉楓、劉薏、黃演勛、陳英海、嚴洲芬、潘金新、石紹明、秦永強、黃利華、黃東喬、譚愛云。六堡茶鮮葉中噻蟲嗪、啶蟲脒、吡蟲啉、呋蟲胺、水胺硫磷5種農(nóng)藥殘留檢測膠體金免疫層析法范圍本文件界定了六堡茶鮮葉中噻蟲嗪、啶蟲脒、吡蟲啉、呋蟲胺、水胺硫磷5種農(nóng)藥殘留檢測膠體金免疫層析法的術(shù)語和定義，規(guī)定了原理、試劑耗材、儀器和設(shè)備、試驗方法、測定、結(jié)果分析和性能指標的技術(shù)內(nèi)容。本文件適用于六堡茶鮮葉中噻蟲嗪、啶蟲脒、吡蟲啉、呋蟲胺、水胺硫磷5種農(nóng)藥殘留檢測膠體金免疫層析法。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法NY/T2102茶葉抽樣技術(shù)規(guī)范術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中殘留的噻蟲嗪、啶蟲脒、吡蟲啉、呋蟲胺、水胺硫磷與膠體金標記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和檢測線(T線)上包被原的結(jié)合，從而導致檢測線(T線)顏色變淺或消失，通過檢測線(T線)與控制線(C線)顏色深淺比較，對樣品中殘留的噻蟲嗪、啶蟲脒、吡蟲啉、呋蟲胺、水胺硫磷進行定性判定。試劑耗材除另有說明外，本文件使用分析純（含）以上試劑，用水符合GB/T6682要求的二級水。試劑噻蟲嗪、啶蟲脒、吡蟲啉、呋蟲胺、水胺硫磷：純度≥99％，或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。甲醇(CH3OH)：ρ=0.79?g/cm3。氯化鈉(NaC1)：ρ=2.165?g/cm3，含量≥99.5％。氯化鉀(KC1)：ρ=1.98?g/cm3，含量≥99.0％。磷酸氫二鈉(Na2HPO4)：ρ=1.064?g/cm3，含量≥98.0％。磷酸氫二鉀(KH2PO4)：ρ=2.44?g/cm3，含量≥98.0％。水胺硫磷（C11H16NO4PS）：ρ=1.275?g/cm3，含量≥90.0％。啶蟲脒（CHClN4）：ρ=1.330?/cm3，含量≥98.0％。呋蟲胺（C7H14N4O3）：ρ=1.425?g/cm3，含量≥90.0％。噻蟲嗪（C8HClN5O3S）：ρ=1.7?g/cm3，含量≥97.0％。吡蟲啉（C9HClN5O2）：ρ=1.543?g/cm3，含量≥97.0％。溶液配制10％甲醇溶液吸取10?mL甲醇（5.1.2），用水定容至100?mL，混勻。稀釋液分別稱取8?g氯化鈉（5.1.3）、0.2?g氯化鉀（5.1.4）、1.44?g磷酸氫二鈉（5.1.5）、0.24?g磷酸二氫鉀（5.1.6）于1000?mL燒杯中，加水充分攪拌溶解后定容至1000?mL。標準儲備液、中間液、工作液的制備水胺硫磷標準儲備液、中間液、工作液100?g/L?的水胺硫磷標準儲備液準確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)水胺硫磷（5.1.7），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個月。1?g/L的水胺硫磷標準中間液準確移取100?g/L的水胺硫磷標準儲備液（5.2.3.1.1）100?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個月。0.01?g/L的水胺硫磷標準工作液準確移取1?g/L的水胺硫磷標準中間液（5.2.3.1.2）100μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個月。啶蟲脒標準儲備液、中間液、工作液100?g/L?的啶蟲脒標準儲備液準確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)啶蟲脒（5.1.8），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個月。10?g/L的啶蟲脒標準中間液準確移取100?g/L?的啶蟲脒標準儲備液（5.2.3.2.1）1000?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個月。1?g/L的啶蟲脒標準工作液準確移取10g/L?的啶蟲脒標準中間液（5.2.3.2.1）1000?μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個月。呋蟲胺標準儲備液、中間液、工作液100?g/L的呋蟲胺標準儲備液準確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)呋蟲胺（5.1.9），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個月。10?g/L的呋蟲胺標準中間液準確移取100g/L的呋蟲胺標準儲備液（5.2.3.3.1）1000?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個月。2?g/L的呋蟲胺標準工作液準確移取呋蟲胺10?g/L的水胺硫磷標準中間液（5.2.3.3.2）2000?μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個月。噻蟲嗪標準儲備液、中間液、工作液100?g/L?的噻蟲嗪標準儲備液準確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)噻蟲嗪（5.1.10），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個月。10?g/L的噻蟲嗪標準中間液準確移取100?g/L?的噻蟲嗪標準儲備液（5.2.3.4.1）1000?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個月。1?g/L?的噻蟲嗪標準工作液準確移取噻蟲嗪10?g/L的噻蟲嗪標準中間液（5.2.3.4.2）1000?μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個月。吡蟲啉標準儲備液、中間液、工作液100?g/L的吡蟲啉標準儲備液準確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)吡蟲啉（5.1.11），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個月。1?g/L的吡蟲啉標準中間液準確移取100?g/L的吡蟲啉標準儲備液（5.2.3.5.1）100?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個月。0.1?g/L?的吡蟲啉標準工作液準確移取吡蟲啉1g/L?的吡蟲啉標準中間液（5.2.3.5.2）1000?μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個月。儀器和設(shè)備電子天平：分別精確至0.01?g、0.0001?g和0.01?mg。移液器：20?μL～200?μL，100?μL～1000?μL，1?μL～10?mL。旋渦混合器。離心管：1.5?mL、2?mL、5?mL、50?mL。膠體金免疫層析檢測卡試驗方法樣品采集茶葉鮮葉采集按照NY/T2102的規(guī)定執(zhí)行。鮮茶樣品前處理樣品混合液制備選取一定量的有代表性樣本，剪成1?cm左右見方碎片；準確稱取1?g±0.1?g樣品于15?mL或50?mL離心管中；加入3?mL稀釋液（5.2.2），劇烈振蕩2?min～3?min即為樣品混合液。樣品待測液的制備水胺硫磷項目測定的樣品待測液按照7.2.1的要求執(zhí)行。啶蟲脒項目測定的樣品待測液吸取5?μL樣品混合液（7.2）于5?mL離心管中，加入3495?μL稀釋液（5.2.2），混勻后即為待測液。呋蟲胺項目測定的樣品待測液吸取10?μL樣品混合液（7.2）于2?mL離心管中，加入1000?μL稀釋液（5.2.2），混勻后即為待測液。噻蟲嗪項目測定的樣品待測液吸取50?μL樣品混合液（7.2）于2?mL離心管中，加入950?μL稀釋液（5.2.2），混勻后即為待測液。吡蟲啉項目測定的樣品待測液吸取50?μL樣品混合液（7.2）于2?mL離心管中，加入700?μL稀釋液（5.2.2），混勻后即為待測液。空白樣品前處理稱取空白試樣，按照7.2的要求執(zhí)行?？瞻自嚇樱翰缓?種農(nóng)藥的鮮茶葉。加標質(zhì)控樣品前處理分別準確稱取6個空白試樣1.0?g(精確至0.01?g)置于15?mL或50?mL離心管中，加入適量水胺硫磷（5.2.3.1.3）、啶蟲脒（5.2.3.2.3）、呋蟲胺（5.2.3.3.3）、噻蟲嗪（5.2.3.4.3）、吡蟲啉（5.2.3.5.3）標準工作液，使待測液中的終濃度分別為0.05?mg/kg水胺硫磷、10?mg/kg啶蟲脒、20?mg/kg呋蟲胺、10?mg/kg噻蟲嗪、0.5?mg/kg吡蟲啉。再加入3?mL稀釋液（5.2.2），劇烈振蕩2?min～3?min即為樣品混合液,按照7.2.2的要求執(zhí)行。測定所有操作需在室溫下(20?℃±5?℃)進行。鮮茶樣品待測液測定水胺硫磷、吡蟲啉項目測定分別吸取7.2.2.1和7.2.2.5的樣品待測液體100?μL（滴管約3～4滴）于微孔中，緩慢抽吸多次至待測液與微孔試劑充分混勻；孵育3?min后將微孔內(nèi)所有液體轉(zhuǎn)移至檢測卡的加樣孔中，加樣同時開始計時；反應(yīng)5min后判讀結(jié)果。啶蟲脒、呋蟲胺、噻蟲嗪項目測定分別吸取7.2.2.2、7.2.2.3和7.2.2.4的樣品待測液100?μL（滴管約3～4滴）于加樣孔中，加樣同時開始計時，反應(yīng)5min后判讀結(jié)果?？瞻讟悠窚y定按照8的要求執(zhí)行。加標質(zhì)控樣品測定按照8的要求執(zhí)行。結(jié)果分析結(jié)果判定陽性檢測線(T線)不顯色或檢測線(T線)顏色比控制線(C線)顏色淺，表明樣品中噻蟲嗪、啶蟲脒、吡蟲啉、呋蟲胺、水胺硫磷殘留的含量高于方法檢測限，判定為陽性。判定示意圖見圖1。目視判定示意圖陰性檢測線（T線）顏色比控制線（C線）顏色深或者檢測線（T線）顏色與控制線（C線）顏色相當，表明樣品中腐霉利殘留低于方法檢測限，判定為陰性。判定示意圖見圖1。無效控制線(C線)不顯色，表明操作不正確或試劑條無效。判定示意圖見圖1。質(zhì)控試驗要求空白試驗測定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標質(zhì)控試驗測定結(jié)果應(yīng)為陽性。否則表示不滿足質(zhì)控試驗要求，此批樣品結(jié)果無效。性能指標靈敏度靈敏度應(yīng)≥95％。特異性特異性應(yīng)≥95％。假陰性率假陰性率應(yīng)≤5％。假陽性率假陽性率應(yīng)≤5％。性能指標計算方法見附錄A。

（資料性）

定性方法性能指標計算方法性能指標計算表見表A.1。性能指標計算表樣品情況a監(jiān)測結(jié)果b總數(shù)陽性陰性陽性NNN1.=N11陰性NNN2.=N21總數(shù)N.1=N11N.2=N12N=N1.+N2