水質(zhì) 草甘膦的測定 高效液相色譜法（征求意見稿）

目次

前言.................................................................................................................................................ii

1適用范圍.........................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................1

3方法原理.........................................................................................................................................1

4試劑和材料.....................................................................................................................................1

5儀器和設(shè)備.....................................................................................................................................2

6樣品.................................................................................................................................................2

7分析步驟.........................................................................................................................................3

8結(jié)果計算與表示.............................................................................................................................4

9精密度和準確度.............................................................................................................................5

10質(zhì)量保證和質(zhì)量控制...................................................................................................................6

11廢物處理.......................................................................................................................................6

i

前言

為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護法》和《中華人民共和國水污染防治法》，保護生態(tài)

環(huán)境，保障人體健康，規(guī)范水中草甘膦的測定方法，制定本標準。

本標準規(guī)定了測定地表水、地下水、生活污水、工業(yè)廢水中草甘膦的高效液相色譜法。

本標準為首次發(fā)布。

本標準由生態(tài)環(huán)境部生態(tài)環(huán)境監(jiān)測司、法規(guī)與標準司組織制訂。

本標準起草單位：環(huán)境保護部南京環(huán)境科學研究所。

本標準驗證單位：江蘇省環(huán)境監(jiān)測中心、安徽省環(huán)境監(jiān)測中心站、常州市環(huán)境監(jiān)測中心、

無錫市環(huán)境監(jiān)測中心站、泰州市環(huán)境監(jiān)測中心站、南京市環(huán)境監(jiān)測中心站。

本標準環(huán)境保護部201□年□□月□□日批準。

本標準自201□□年□□月□□日起實施。

本標準由生態(tài)環(huán)境部解釋。

ii

水質(zhì)草甘膦的測定高效液相色譜法

警告：實驗中使用的部分溶劑及標準樣品具有一定的毒性，對健康具有潛在的危害，

其溶液配制應在通風櫥中進行；操作時應按規(guī)定要求佩帶防護器具，避免接觸皮膚和衣

物。

1適用范圍

本標準規(guī)定了測定水中草甘膦的柱前衍生-高效液相色譜法。

本標準適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中草甘膦的測定。

當進樣量為20μl時，方法的檢出限為2μg/L，測定下限為8μg/L。

2規(guī)范性引用文件

本標準內(nèi)容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本適

用于本標準。

HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

HJ/T164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3方法原理

在水樣（pH=4~9）中加入檸檬酸三鈉絡(luò)合金屬離子，經(jīng)固相萃取柱凈化，凈化后水樣

中的草甘膦與9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）進行衍生化反應，生成的熒光產(chǎn)物經(jīng)二氯甲

烷凈化，去除衍生化副產(chǎn)物后用高效液相色譜分離，經(jīng)熒光檢測器檢測。以保留時間和特征

波長定性，外標法定量。

4試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為無目標化合物檢

出的去離子水。

4.1乙腈（CH3CN）：HPLC級。

4.2甲醇（CH3OH）：HPLC級。

4.3二氯甲烷（CH2Cl2）。

4.4磷酸（H3PO4）：ρ（H3PO4）=1.69g/ml，優(yōu)級純。

4.5磷酸溶液：2+998。

取2.0ml磷酸（4.4）于1000ml容量瓶中，用去離子水定容至刻度，混勻。

4.6二水合檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7·2H2O）。

4.7十水合四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）。

1

4.8四硼酸鈉溶液：c=0.05mol/L。

稱取十水合四硼酸鈉（4.7）1.91g溶于少量去離子水中，定容至100ml。

4.99-芴甲基氯甲酸酯（C15H11ClO2）標準品：純度不低于99.0%，4℃保存。

4.109-芴甲基氯甲酸酯乙腈溶液：ρ=1000mg/L。

稱取50.0mg9-芴甲基氯甲酸酯標準品（4.9），溶解于少量乙腈（4.1）中，轉(zhuǎn)移至50ml

容量瓶，用乙腈定容至刻度并超聲使其充分溶解，4℃保存，保質(zhì)期3個月。使用時應恢復至

室溫，并搖勻。

4.11草甘膦（C3H8NO5P）標準品：純度不低于99.0%，4℃保存。

4.12草甘膦標準貯備液：ρ=1000mg/L。

準確稱取50.0mg草甘膦標準品（4.11），用去離子水溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用去

離子水定容至刻度并超聲使其充分溶解，4℃保存，保質(zhì)期6個月，或直接購買有證標準溶液。

使用時應恢復至室溫，并搖勻。

4.13草甘膦標準使用液：ρ=10.0mg/L。

用去離子水稀釋草甘膦標準貯備液（4.12），配置濃度為10mg/L的草甘膦標準使用液，4℃

保存，保質(zhì)期2個月。使用時應恢復至室溫，并搖勻。

5儀器和設(shè)備

5.1高效液相色譜儀（HPLC）：具有熒光檢測器。

5.2色譜柱：填料為十八烷基鍵合硅膠（C18）的色譜柱，或其他等效類型液相色譜柱。參

考規(guī)格250mm×4.6mm，5μm。

5.3pH計（可精確到0.1）。

5.4水平振蕩器。

5.5固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或填料為十八烷基硅膠的萃

取柱，或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為500mg/6ml。

5.6聚乙烯塑料（PE）管：10ml。

5.7電子天平：精度為0.1mg。

5.8一般實驗室常用儀器和設(shè)備。

6樣品

6.1樣品的采集

參照HJ/T91和HJ/T164的相關(guān)規(guī)定采集樣品。

用預先洗滌干凈并干燥的磨口棕色玻璃瓶（250ml）采集水樣，水樣滿瓶采集。

6.2樣品的保存

樣品采集后，調(diào)pH至4~9，密閉儲存于棕色玻璃瓶中，避光4℃冷藏保存，7天內(nèi)完成

樣品萃取及分析工作。

2

6.3試樣的制備

6.3.1固相萃取凈化

依次用6ml甲醇（4.2）和6ml去離子水活化固相萃取柱（5.5），保證小柱柱頭浸潤。

量取10ml水樣，加入29.3mg檸檬酸三鈉（4.6），混勻后在自然重力作用下通過固相萃取

柱，收集過濾后的水樣，待衍生。

6.3.2衍生化反應

取2.0ml凈化后的水樣于聚乙烯塑料（PE）管（5.6）中，加入0.5ml四硼酸鈉溶液（4.8），

1.0ml9-芴甲基氯甲酸酯乙腈溶液（4.10），充分混勻后置于水平振蕩器（5.4）上，40℃條

件下衍生1h。

6.3.3液液萃取

在衍生后的水樣中加入5ml二氯甲烷（4.3），渦旋萃取2min，取水相層，經(jīng)0.45μm

濾膜過濾后待測。

6.4空白試樣的制備

用實驗用水代替樣品，按照與試樣的制備（6.3）相同的步驟進行實驗室空白試樣的制

備。

7分析步驟

7.1測量條件

流動相：乙腈（A），0.2%磷酸水溶液（B），梯度洗脫程序如表1所示。

流速：1.0ml/min。

柱溫：30℃。

進樣量：20μl。

熒光條件：激發(fā)波長254nm；發(fā)射波長315nm、302nm。

表1梯度洗脫程序

時間（min）比例A（%）比例B（%）

03565

102575

158020

203565

7.2工作曲線的建立

分別取適量的草甘膦標準使用液（4.13），用水稀釋，制備至少5個濃度點的標準系列，

3

草甘膦的質(zhì)量濃度分別為10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L（此為參考

濃度）。按6.3.2步驟進行衍生化反應，按6.3.3步驟液液萃取，然后按儀器參考條件（7.1），

濃度由低到高依次進樣，以草甘膦的濃度為橫坐標，對應的色譜峰面積為縱坐標，建立標準

曲線。

7.3試樣測定

按照與校準曲線的建立（7.2）相同的儀器條件進行試樣（6.3）的測定。

7.4空白試驗

按照與試樣測定（7.3）相同的儀器條件進行（實驗室）空白試樣（6.4）的測定。

8結(jié)果計算與表示

8.1定性分析

根據(jù)樣品中目標化合物的保留時間定性，必要時可采用標準加入法、不同波長下的熒光

強度比值等方法輔助定性。

在本標準推薦的色譜條件下（7.1），草甘膦的標準色譜圖見圖1。

圖1草甘膦標準色譜圖（10μg/L）

8.2定量分析

水樣中的草甘膦用外標法定量，按公式（1）進行計算：

（1）

ul

=

式中：ρ——水樣中草甘膦的質(zhì)量濃度，μg/L；

A——草甘膦的峰面積或峰高；

4

a——校準曲線的截距；

b——校準曲線的斜率；

f——水樣的稀釋倍數(shù)。

8.3結(jié)果表示

當測定結(jié)果小于100μg/L時，保留整數(shù)位；當結(jié)果大于100μg/L時，保留三位有效數(shù)字。

9精密度和準確度

9.1精密度

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的地表水樣品進行了6次重復測定，實

驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：2.1%～9.1%、2.4%～8.4%；實驗室間相對標準偏差為6.7%、

6.3%；重復性限分別為2μg/L、14μg/L，再現(xiàn)性限分別為3μg/L、8μg/L。

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的地下水樣品進行了6次重復測定，實

驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：1.6%～9.9%、1.3%～3.9%；實驗室間相對標準偏差為2.0%、

4.8%；重復性限分別為2μg/L、9μg/L，再現(xiàn)性限分別為2μg/L、7μg/L。

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的生活污水樣品進行了6次重復測定，

實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：3.3%～7.6%、2.7%～7.5%；實驗室間相對標準偏差為6.2%、

8.5%；重復性限分別為2μg/L、14μg/L，再現(xiàn)性限分別為3μg/L、9μg/L。

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L、100μg/L、1000μg/L的工業(yè)廢水（總排口）樣品

進行了6次重復測定，實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：2.4%～9.5%、3.4%～7.8%、1.7%～8.4%；

實驗室間相對標準偏差為7.5%、4.8%、8.4%；重復性限分別為2μg/L、15μg/L、34μg/L，再

現(xiàn)性限分別為3μg/L、7μg/L、26μg/L。

9.2準確度

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的地表水樣品進行了分析測定，加標回

收率分別為91.5%～105%、92.9%～109%，加標回收率最終值為97.2%±13.0%、98.7%±

12.4%。

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的地下水樣品進行了分析測定，加標回

收率分別為89.4%～103%、92.9%～107%，加標回收率最終值為98.8%±10.2%、100%±9.6%。

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的生活污水樣品進行了分析測定，加標

回收率分別為88.5%～105%、85.0%～108%，加標回收率最終值為97.8%±12.0%、97.7%±

16.6%。

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L、100μg/L、1000μg/L的工業(yè)廢水（總排口）樣品

進行了分析測定，加標回收率分別為84.6%～105%、92.3%～106%、89.7%～111%，加標回

收率最終值為96.4%±14.4%、98.7%±9.4%、98.0%±16.8%。

6家實驗室對草甘膦濃度為14.5μg/L的工業(yè)廢水（車間排口）分別加標10μg/L、100μg/L

進行了分析測定，加標回收率分別為87.0%～108%、87.7%～107%，加標回收率最終值為

5

97.7%±15.4%、95.8%±13.4%。

10質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

10.1空白試驗

每20個樣品或每批次（少于20個樣品）應至少做一個空白試驗，空白中草甘膦的濃度應

低于方法檢出限。

10.2初始校準

校準曲線的相關(guān)系數(shù)≥0.995。

10.3工作曲線核查

每20個樣品或每批次（少于20個樣品）應測定一個校準曲線中間濃度點標準溶液，測定

結(jié)果與曲線該點濃度的相對誤差應≤15%，否則，應建立新的校準曲線。

10.4平行樣

每10個樣品或每批次（少于10個樣品）應帶一個平行樣，平行樣的相對偏差≤20%。

10.5基體加標

每20個樣品或每批次（少于20個樣品）應進行一個基體加標樣的分析，基體加標回收率

應控制在70%~130%。

11廢物處理

實驗中產(chǎn)生的廢液應集中收集，并做好相應標識，委托有資質(zhì)的單位進行處理。

6

中華人民共和國國家環(huán)境保護標準

HJ□□□-20□□

水質(zhì)草甘膦的測定

高效液相色譜法

Waterquality—Determinationofglyphosate

—Highperformanceliquidchromatography

（征求意見稿）

水質(zhì)草甘膦的測定高效液相色譜法

警告：實驗中使用的部分溶劑及標準樣品具有一定的毒性，對健康具有潛在的危害，

其溶液配制應在通風櫥中進行；操作時應按規(guī)定要求佩帶防護器具，避免接觸皮膚和衣

物。

1適用范圍

本標準規(guī)定了測定水中草甘膦的柱前衍生-高效液相色譜法。

本標準適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中草甘膦的測定。

當進樣量為20μl時，方法的檢出限為2μg/L，測定下限為8μg/L。

2規(guī)范性引用文件

本標準內(nèi)容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本適

用于本標準。

HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

HJ/T164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3方法原理

在水樣（pH=4~9）中加入檸檬酸三鈉絡(luò)合金屬離子，經(jīng)固相萃取柱凈化，凈化后水樣

中的草甘膦與9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）進行衍生化反應，生成的熒光產(chǎn)物經(jīng)二氯甲

烷凈化，去除衍生化副產(chǎn)物后用高效液相色譜分離，經(jīng)熒光檢測器檢測。以保留時間和特征

波長定性，外標法定量。

4試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為無目標化合物檢

出的去離子水。

4.1乙腈（CH3CN）：HPLC級。

4.2甲醇（CH3OH）：HPLC級。

4.3二氯甲烷（CH2Cl2）。

4.4磷酸（H3PO4）：ρ（H3PO4）=1.69g/ml，優(yōu)級純。

4.5磷酸溶液：2+998。

取2.0ml磷酸（4.4）于1000ml容量瓶中，用去離子水定容至刻度，混勻。

4.6二水合檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7·2H2O）。

4.7十水合四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）。

1

4.8四硼酸鈉溶液：c=0.05mol/L。

稱取十水合四硼酸鈉（4.7）1.91g溶于少量去離子水中，定容至100ml。

4.99-芴甲基氯甲酸酯（C15H11ClO2）標準品：純度不低于99.0%，4℃保存。

4.109-芴甲基氯甲酸酯乙腈溶液：ρ=1000mg/L。

稱取50.0mg9-芴甲基氯甲酸酯標準品（4.9），溶解于少量乙腈（4.1）中，轉(zhuǎn)移至50ml

容量瓶，用乙腈定容至刻度并超聲使其充分溶解，4℃保存，保質(zhì)期3個月。使用時應恢復至

室溫，并搖勻。

4.11草甘膦（C3H8NO5P）標準品：純度不低于99.0%，4℃保存。

4.12草甘膦標準貯備液：ρ=1000mg/L。

準確稱取50.0mg草甘膦標準品（4.11），用去離子水溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用去

離子水定容至刻度并超聲使其充分溶解，4℃保存，保質(zhì)期6個月，或直接購買有證標準溶液。

使用時應恢復至室溫，并搖勻。

4.13草甘膦標準使用液：ρ=10.0mg/L。

用去離子水稀釋草甘膦標準貯備液（4.12），配置濃度為10mg/L的草甘膦標準使用液，4℃

保存，保質(zhì)期2個月。使用時應恢復至室溫，并搖勻。

5儀器和設(shè)備

5.1高效液相色譜儀（HPLC）：具有熒光檢測器。

5.2色譜柱：填料為十八烷基鍵合硅膠（C18）的色譜柱，或其他等效類型液相色譜柱。參

考規(guī)格250mm×4.6mm，5μm。

5.3pH計（可精確到0.1）。

5.4水平振蕩器。

5.5固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或填料為十八烷基硅膠的萃

取柱，或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為500mg/6ml。

5.6聚乙烯塑料（PE）管：10ml。

5.7電子天平：精度為0.1mg。

5.8一般實驗室常用儀器和設(shè)備。

6樣品

6.1樣品的采集

參照HJ/T91和HJ/T164的相關(guān)規(guī)定采集樣品。

用預先洗滌干凈并干燥的磨口棕色玻璃瓶（250ml）采集水樣，水樣滿瓶采集。

6.2樣品的保存

樣品采集后，調(diào)pH至4~9，密閉儲存于棕色玻璃瓶中，避光4℃冷藏保存，7天內(nèi)完成

樣品萃取及分析工作。

2

6.3試樣的制備

6.3.1固相萃取凈化

依次用6ml甲醇（4.2）和6ml去離子水活化固相萃取柱（5.5），保證小柱柱頭浸潤。

量取10ml水樣，加入29.3mg檸檬酸三鈉（4.6），混勻后在自然重力作用下通過固相萃取

柱，收集過濾后的水樣，待衍生。

6.3.2衍生化反應

取2.0ml凈化后的水樣于聚乙烯塑料（PE）管（5.6）中，加入0.5ml四硼酸鈉溶液（4.8），

1.0ml9-芴甲基氯甲酸酯乙腈溶液（4.10），充分混勻后置于水平振蕩器（5.4）上，40℃條

件下衍生1h。

6.3.3液液萃取

在衍生后的水樣中加入5ml二氯甲烷（4.3），渦旋萃取2min，取水相層，經(jīng)0.45μm

濾膜過濾后待測。

6.4空白試樣的制備

用實驗用水代替樣品，按照與試樣的制備（6.3）相同的步驟進行實驗室空白試樣的制

備。

7分析步驟

7.1測量條件

流動相：乙腈（A），0.2%磷酸水溶液（B），梯度洗脫程序如表1所示。

流速：1.0ml/min。

柱溫：30℃。

進樣量：20μl。

熒光條件：激發(fā)波長254nm；發(fā)射波長315nm、302nm。

表1梯度洗脫程序

時間（min）比例A（%）比例B（%）

03565

102575

158020

203565

7.2工作曲線的建立

分別取適量的草甘膦標準使用液（4.13），用水稀釋，制備至少5個濃度點的標準系列，

3

草甘膦的質(zhì)量濃度分別為10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L（此為參考

濃度）。按6.3.2步驟進行衍生化反應，按6.3.3步驟液液萃取，然后按儀器參考條件（7.1），

濃度由低到高依次進樣，以草甘膦的濃度為橫坐標，對應的色譜峰面積為縱坐標，建立標準

曲線。

7.3試樣測定

按照與校準曲線的建立（7.2）相同的儀器條件進行試樣（6.3）的測定。

7.4空白試驗

按照與試樣測定（7.3）相同的儀器條件進行（實驗室）空白試樣（6.4）的測定。

8結(jié)果計算與表示

8.1定性分析

根據(jù)樣品中目標化合物的保留時間定性，必要時可采用標準加入法、不同波長下的熒光

強度比值等方法輔助定性。

在本標準推薦的色譜條件下（7.1），草甘膦的標準色譜圖見圖1。

圖1草甘膦標準色譜圖（10μg/L）

8.2定量分析

水樣中的草甘膦用外標法定量，按公式（1）進行計算：

（1）

ul

=

式中：ρ——水樣中草甘膦的質(zhì)量濃度，μg/L；

A——草甘膦的峰面積或峰高；

4

a——校準曲線的截距；

b——校準曲線的斜率；

f——水樣的稀釋倍數(shù)。

8.3結(jié)果表示

當測定結(jié)果小于100μg/L時，保留整數(shù)位；當結(jié)果大于100μg/L時，保留三位有效數(shù)字。

9精密度和準確度

9.1精密度

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的地表水樣品進行了6次重復測定，實

驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：2.1%～9.1%、2.4%～8.4%；實驗室間相對標準偏差為6.7%、

6.3%；重復性限分別為2μg/L、14μg/L，再現(xiàn)性限分別為3μg/L、8μg/L。

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的地下水樣品進行了6次重復測定，實

驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：1.6%～9.9%、1.3%～3.9%；實驗室間相對標準偏差為2.0%、

4.8%；重復性限分別為2μg/L、9μg/L，再現(xiàn)性限分別為2μg/L、7μg/L。

6家實驗室對草甘膦加標濃度為10μg/L和100μg/L的生活污水樣品進行了6次重復測定，

實驗室內(nèi)相對