《傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處置技術(shù)規(guī)范 第10部分：病毒類檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（征求意見稿）》

32范：）I 2 2 2 3本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起學(xué)合理、快速準(zhǔn)確開展實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急檢測(cè)提供標(biāo)準(zhǔn)操作流程，以規(guī)范全省傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事——第1部分：范圍。規(guī)定了本規(guī)范流程適用的場(chǎng)景和檢測(cè)——第2部分：規(guī)范性引用文件。規(guī)定了本規(guī)范引用的既有的法律法規(guī)、技術(shù)方案、標(biāo)準(zhǔn)。1傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處置技術(shù)規(guī)范第10部分：病毒類檢測(cè)技術(shù)規(guī)范WS233-2017病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則WS271-2007感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)GB/T40226-2021環(huán)境微生物宏基因組檢測(cè)高通量測(cè)序法WS/T799-2022污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)又稱下一代測(cè)序技術(shù)（Next-generationsequencing,NGS），或大規(guī)模平行測(cè)序（Massively行平行序列測(cè)定的技術(shù)，通常一次測(cè)序反應(yīng)能產(chǎn)出不低于100兆的測(cè)序數(shù)據(jù)。簡(jiǎn)稱宏基因組測(cè)序，無(wú)需培養(yǎng),直接從臨床或環(huán)境樣品中提取DNA或RNA核酸進(jìn)行高通量測(cè)序，性可完成多種病原體的檢測(cè)鑒定,同時(shí)可研究微生物種群結(jié)構(gòu)、基因功能、相互協(xié)作關(guān)系以及微生物與靶向高通量測(cè)序targetednext-generation基于多重PCR擴(kuò)增或探針雜交捕獲得到大量的特定基因序列，同時(shí)與高通量測(cè)序技術(shù)結(jié)合，能夠?qū)CR擴(kuò)增的擴(kuò)增子測(cè)序和基于探針雜交的雜交捕獲測(cè)序兩種方法.24生物安全要求4.2實(shí)驗(yàn)人員、場(chǎng)所、感染性標(biāo)本處置及消毒等4.3《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》對(duì)醫(yī)療廢物和整個(gè)處置流程5.1準(zhǔn)備工作5.1.1準(zhǔn)備相對(duì)應(yīng)的檢測(cè)試劑盒、耗材、漩渦震蕩儀、離心機(jī)及專用儀器。根據(jù)需要，相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器5.1.2核酸提取。按照核酸提取試劑盒說(shuō)明書，取適量標(biāo)本進(jìn)行核酸提取，提取完成后應(yīng)立即封蓋并馬上進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)。剩余的標(biāo)本和核酸應(yīng)5.2.1每一批次反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)利用試劑盒內(nèi)部的質(zhì)控品至少分別做一個(gè)陰性及陽(yáng)性質(zhì)控，必要時(shí)增加6.1.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程：反應(yīng)體系及反應(yīng)程6.1.2結(jié)果判定：當(dāng)陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果、內(nèi)參（如有）成立時(shí)，再進(jìn)行結(jié)果判斷。陰性顯示無(wú)3共同置于一定溫度下（60℃-65℃),經(jīng)一個(gè)步驟即可完成。6.2.2結(jié)果判定：當(dāng)陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果、成立時(shí)，再進(jìn)行判斷結(jié)果。常使用以下方法對(duì)結(jié)果進(jìn)渾濁判定為陽(yáng)性，未渾濁判為陰性；2熒光檢測(cè)：加泳進(jìn)行檢測(cè)，呈現(xiàn)瀑布狀梯形條帶判為陽(yáng)性，未出現(xiàn)擴(kuò)增條帶判為進(jìn)行PCR反應(yīng)。使用熒光染料或探針監(jiān)測(cè)目標(biāo)核酸的擴(kuò)增，最6.4.2結(jié)果判定：當(dāng)陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果、內(nèi)參（如有）成立時(shí)，再進(jìn)行判斷結(jié)果。查看各樣品再結(jié)合儀器檢測(cè)到的Ct值，對(duì)照試劑盒說(shuō)明書規(guī)定值進(jìn)行判的樣品編號(hào)，報(bào)告該樣品為對(duì)應(yīng)病原體檢測(cè)項(xiàng)目陽(yáng)性6.5.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程：?jiǎn)我徊≡w及靶向測(cè)序按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行目的基因的擴(kuò)增富集純化，純化后產(chǎn)物析等步驟。具體反應(yīng)體系及反應(yīng)程序參照相應(yīng)測(cè)序平臺(tái)及試劑盒說(shuō)明書6.5.2結(jié)果判定：?jiǎn)我徊≡w及靶向測(cè)序：當(dāng)序列覆蓋度、測(cè)序深度滿足質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可進(jìn)行病毒分7.1.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程：檢測(cè)標(biāo)本的類型、上樣體積及操作步驟參照相應(yīng)的試劑盒7.1.2結(jié)果判定：實(shí)驗(yàn)完成后按照試劑盒的要求的時(shí)間對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察，當(dāng)檢測(cè)線和質(zhì)控線均為陽(yáng)性7.2.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程：參照說(shuō)明書依次進(jìn)行抗原包被（如需要）、加入待檢標(biāo)本及對(duì)照、加酶標(biāo)記物、加47.3.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程：磁性顆?？乖患訅A性磷酸酶催化底物液發(fā)光，具體流程參照相應(yīng)病毒化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書。7.