HYT 0344-2022 海水中痕量活性磷酸鹽的測(cè)定 流動(dòng)分析-磷鉬藍(lán)固相萃取-分光光度法（正式版）

中華人民共和國(guó)海洋行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)海水中痕量活性磷酸鹽的測(cè)定流動(dòng)分析-磷鉬藍(lán)固相萃取-分光光度法DeterminationofseawatertracedissolvedreactiveFlowanalysis,solidphaseextractionofphosphomolybdenumblueand中華人民共和國(guó)自然資源部發(fā)布I 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14方法原理 15試劑與材料 26儀器和設(shè)備 37樣品采集與保存 38分析步驟 49結(jié)果計(jì)算與記錄 510精密度和準(zhǔn)確度 511質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 612注意事項(xiàng) 6附錄A(資料性)海水中痕量活性磷酸鹽的測(cè)定分析記錄 7附錄B(規(guī)范性)海水中痕量活性磷酸鹽測(cè)定的質(zhì)量控制要求 8參考文獻(xiàn) 9Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國(guó)自然資源部提出。本文件由全國(guó)海洋標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC283)歸口。本文件起草單位：廈門大學(xué)、自然資源部第三海洋研究所。1海水中痕量活性磷酸鹽的測(cè)定流動(dòng)分析-磷鉬藍(lán)固相萃取-分光光度法本文件描述了采用流動(dòng)分析-磷鉬藍(lán)固相萃取-分光光度法測(cè)定海水中痕量活性磷酸鹽的方法原密度和準(zhǔn)確度、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制等的技術(shù)要求。本文件適用于海水中納摩爾每升(nmol/L)級(jí)別痕量活性磷酸鹽的測(cè)定。樣品富集體積為60mL時(shí)，本方法的檢出限為6nmol/L,測(cè)定下限為10nmol/L。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于GB/T12763.4海洋調(diào)查規(guī)范第4部分：海水化學(xué)要素調(diào)查GB17378.2海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第2部分：數(shù)據(jù)處理與分析質(zhì)量控制3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4方法原理樣品與試劑在蠕動(dòng)泵的推動(dòng)下進(jìn)入分析模塊，在密閉的管道中按設(shè)定的順序和比例進(jìn)行混合、反在酸性條件下，海水樣品中的活性磷酸鹽在酒石酸銻鉀的催化下，與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸化合物，進(jìn)而被抗壞血酸還原生成磷鉬藍(lán)化合物，該化合物富集在固相萃取小柱上，經(jīng)堿光光度檢測(cè)器在710nm波長(zhǎng)處測(cè)定。參考分析流路圖見圖1。2S標(biāo)引符號(hào)說明.P?——蠕動(dòng)泵1;R?——氯化鈉使用液(見5.15);P?——蠕動(dòng)泵2;E——固相萃取小柱(見5.22);R?——抗壞血酸使用液(見5.13);圖1流動(dòng)分析-磷鉬藍(lán)固相萃取-分光光度法測(cè)定痕量活性磷酸鹽的分析流路圖5試劑與材料除非另有說明，在分析中均使用確認(rèn)為分析純的化學(xué)試劑，實(shí)驗(yàn)用水均為新制備的超純水(電阻率大于或等于18.0MΩ·cm)。5.1硫酸(H?SO?):p(H?SO?)=1.84g/5.2鉬酸銨[(NH?)sMo?O??·4H?O]。5.8磷酸二氫鉀(KH?PO?):優(yōu)級(jí)純，在110℃~115℃烘干并恒重后，保存在干燥器中。5.9硫酸溶液(1+1)。配制方法為：在不斷攪拌下將150mL濃硫酸(見5.1)緩緩加入到150mL水中。5.10鉬酸銨混合貯備液。配制方法為：稱取13g鉬酸銨(見5.2)溶于100mL水中；稱取0.35g酒石酸銻鉀(見5.3)溶于100mL水中。在不斷攪拌下，將鉬酸銨溶液緩緩加入到300mL硫酸溶液(見5.9)中，再加入酒石酸銻鉀溶液，混合均勻。該溶液貯存于棕色玻璃瓶中，在4℃下避光保存。溶液變混濁時(shí)，應(yīng)重配。5.11鉬酸銨混合使用液。配制方法為：量取36mL鉬酸銨混合貯備液(見5.10),用水稀釋至100mL,盛于高密度聚乙烯瓶中，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.12抗壞血酸貯備液：p(C?H?O?)=100g/L。配制方法為：稱取10g抗壞血酸(見5.4)溶于100mL水中，貯存于棕色試劑瓶中，在4℃下避光保存，可穩(wěn)定1個(gè)月。5.13抗壞血酸使用液：p(C?H?O?)=18g/L。配制方法為：量取18mL抗壞血酸貯備液(見5.12),用水稀釋至100mL,盛于高密度聚乙烯瓶中，現(xiàn)用現(xiàn)配。35.14氯化鈉貯備液：c(NaCl)=2mol/L。配制方法為：稱取58.4g氯化鈉(見5.5)溶于500mL水中，貯存于高密度聚乙烯瓶中，室溫下可保存6個(gè)月。5.15氯化鈉使用液：c(NaCl)=0.2mol/L。配制方法為：量取10mL氯化鈉貯備液(見5.14),用水稀釋至100mL,盛于高密度聚乙烯瓶中，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.16氫氧化鈉貯備液：c(NaOH)=10mol/L。配制方法為：稱取40g氫氧化鈉(見5.6)溶于100mL水中，貯存于高密度聚乙烯瓶中，室溫下可保存6個(gè)月。5.17氫氧化鈉使用液：c(NaOH)=0.2mol/L。配制方法為：量取2mL氫氧化鈉貯備液(見5.16),用水稀釋至100mL,盛于高密度聚乙烯瓶中，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.1810%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液。配制方法為：量取139mL鹽酸(見5.7),用水稀釋至500mL,盛于高5.19磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液：c(KH?PO?)=8000μmol/L。配制方法為：準(zhǔn)確稱取1.0880g磷酸二氫鉀(見5.8)溶于水中，并定容至1000mL,貯存于高密度聚乙烯瓶中，在4℃下保存，可穩(wěn)定6個(gè)月。5.20磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)中間液：c(KH?PO?)=200μmol/L。配制方法為：準(zhǔn)確量取2.50mL磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液(見5.19),用水稀釋并定容至100mL,盛于高密度聚乙烯瓶中，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.21磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液：c(KH?PO?)=10.0μmol/L。配制方法為：準(zhǔn)確量取5.00mL磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)中間液(見5.20),用水稀釋并定容至100mL,盛于高密度聚乙烯瓶中，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.22固相萃取小柱(HLB小柱):3cm3/60mg。5.23蠕動(dòng)泵泵管。試劑泵管內(nèi)徑0.89mm,樣品泵管內(nèi)徑2.06mm。5.24聚四氟乙烯管。流路管道和混合盤管內(nèi)徑0.75mm,進(jìn)樣管和反應(yīng)盤管內(nèi)徑1.5mm。6.1商品化或?qū)嶒?yàn)室自制的流動(dòng)分析裝置，參見圖1,主要由下列各部分組成：——蠕動(dòng)泵；——多位選擇閥；——六通閥；——流動(dòng)分析用分光光度檢測(cè)器，配20mm流通池；——數(shù)據(jù)處理及儀器控制軟件。6.2分析天平：感量為0.0001g。6.4一般化學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的儀器和設(shè)備。7樣品采集與保存樣品采集與保存措施如下：a)采樣前，應(yīng)依次用10%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液(見5.18)、超純水清洗所有接觸樣品的器皿；b)采樣過程注意防止污染，應(yīng)戴無營(yíng)養(yǎng)鹽污染的一次性手套，每采一次樣品應(yīng)更換手套；c)先用樣品將高密度聚乙烯瓶潤(rùn)洗3次以上，再將樣品采集于瓶中；d)采集的樣品一般無需過濾，如果必須過濾，要特別注意防止過濾過程中引入污染；e)樣品采集后宜現(xiàn)場(chǎng)分析，若無法及時(shí)分析，可置于冰箱中冷藏或一20℃冷凍保存，冷藏不應(yīng)超過48h,冷凍不宜超過30d。48分析步驟8.1儀器調(diào)試按照?qǐng)D1所示連接分析系統(tǒng)。開機(jī)后，先用超純水代替試劑，檢查整個(gè)分析流路的密閉性及液體流動(dòng)的通暢性，待基線穩(wěn)定后(約20min),將各管道的入口端置入對(duì)應(yīng)的試劑或樣品中。8.2儀器運(yùn)行程序設(shè)定按表1設(shè)定運(yùn)行程序和參數(shù)，分析流路參見圖1,具體步驟如下：a)步驟1,在P?(蠕動(dòng)泵1)的推動(dòng)下，樣品和R?(鉬酸銨混合使用液)、R?(抗壞血酸使用液)進(jìn)入管路，清洗并充滿反應(yīng)盤管；在P?(蠕動(dòng)泵2)的推動(dòng)下，R?(氯化鈉使用液)預(yù)淋洗固相萃取小柱；b)步驟2,在P?(蠕動(dòng)泵2)的推動(dòng)下，R?(氫氧化鈉使用液)洗脫已富集在柱上的前一個(gè)樣品的反應(yīng)產(chǎn)物磷鉬藍(lán)，送往檢測(cè)器測(cè)定前一個(gè)樣品的吸光值，檢測(cè)波長(zhǎng)為710nm,流通池長(zhǎng)度為c)步驟3,在P?(蠕動(dòng)泵2)的推動(dòng)下，超純水清洗固相萃取小柱；d)步驟4,在P?(蠕動(dòng)泵1)的推動(dòng)下，樣品和R?(鉬酸銨混合使用液)、R?(抗壞血酸使用液)混合并反應(yīng)，生成的反應(yīng)產(chǎn)物磷鉬藍(lán)在固相萃取小柱上富集。表1分析系統(tǒng)的運(yùn)行程序P?流速“持續(xù)時(shí)間S說明112.0(樣品)2.2(試劑)使用液)1樣品和R?(鉬酸銨混合使用液)、R?(抗壞血酸使用液)清洗管路；R?(氯化鈉使2使用液)2R?(氫氧化鈉使用液)洗脫固相萃取小柱上前一個(gè)樣品的反應(yīng)產(chǎn)物磷鉬藍(lán)，檢32.0(超純水)347.5(樣品)1.4(試劑)3480或240?樣品和R?(鉬酸銨混合使用液)、R?(抗’選擇標(biāo)準(zhǔn)系列I繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，時(shí)間設(shè)置為480s;選擇標(biāo)準(zhǔn)系列Ⅱ繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，時(shí)間設(shè)置為240s。8.3標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)系列I:分別量取0.00mL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、0.75mL和1.00mL的磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液(見5.21),用超純水稀釋并定容至100mL,制備6個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列?；钚粤姿猁}的濃度分別標(biāo)準(zhǔn)系列Ⅱ:分別量取0.00mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL和3.00mL的磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液(見5.21),用超純水稀釋并定容至100mL,制備7個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列?；钚粤姿猁}的5300.0nmol/L。對(duì)8.4繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行線性擬合后，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方程。樣品中活性磷酸鹽的濃度按照式(1)進(jìn)行計(jì)算。測(cè)定分析記錄表見附錄A?；オ?dú)立進(jìn)行測(cè)試獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不大于這兩個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的20%,以大于20%的情況不超過5%為前提。進(jìn)行測(cè)試獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不大于這兩個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的20%,以大于20%的情況不超過5%為前提。10.2準(zhǔn)確度6樣品，由7家實(shí)驗(yàn)室分別使用本方法進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果的相對(duì)偏差范圍為一3.4%～5.1%。7家實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)濃度為8.4nmol/L～20.6nmol/L的實(shí)際海水樣品進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)定，加標(biāo)濃度為25.0nmol/L~30.0nmol/L,回收率范圍為91.0%～107.3%。11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制質(zhì)量保證和質(zhì)量控制應(yīng)按照GB17378.2和GB/T12763.4的規(guī)定執(zhí)行。每批樣品或連續(xù)測(cè)定8h后應(yīng)測(cè)定一個(gè)方法空白樣、一組檢測(cè)樣品加標(biāo)樣、一組平行雙樣；有條件的再測(cè)定一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)樣品。方法空白樣以超純水替代樣品，測(cè)定步驟同樣品。測(cè)定結(jié)果應(yīng)符合附錄B的規(guī)定。建議每分析10個(gè)樣品，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度溶液進(jìn)行校準(zhǔn)核查。如果測(cè)定值與理論值的相對(duì)誤差在±10%之內(nèi)，說明分析系統(tǒng)在可控范圍內(nèi)。如果相對(duì)誤差超過±10%,說明分析系統(tǒng)失控，則應(yīng)檢查儀器、試劑溶液是否正常，確定無疑后重新配制、測(cè)定、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，上一個(gè)合格檢查值之后測(cè)定的樣品需重新測(cè)定，并依照新的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。12注意事項(xiàng)本方法操作中應(yīng)注意如下事項(xiàng)：——實(shí)驗(yàn)用超純水應(yīng)當(dāng)天制備，以避免空白過高；——試劑和環(huán)境溫度會(huì)影響分析結(jié)果，冰箱內(nèi)貯存的試劑應(yīng)放置至室溫后再使用，分析過程中宜保持室溫恒定，溫度波動(dòng)不宜過大； 每批樣品分析均應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)過程中使用新配制的試劑或標(biāo)準(zhǔn)系列溶液時(shí)，應(yīng)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；——建議每測(cè)定約100個(gè)樣品更換一次固相萃取小柱，并重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；——每批樣品測(cè)試前、測(cè)試后或測(cè)試過程中出現(xiàn)基線漂移、管路堵塞等情況時(shí)，可采用以下方式清洗管路：移除固相萃取小柱，使用超純水清洗管路20min。7(資料性)海水中痕量活性磷酸鹽的測(cè)定分析記錄海水中痕量活性磷酸鹽的測(cè)定分析記錄見表A.1。(流動(dòng)分析-磷鉬藍(lán)固相萃取-分光光度法)