(高清版)GBT 40833-2021 甘蔗皮渣中對(duì)香豆酸檢測(cè)方法 高效液相色譜法VIP

甘蔗皮渣中對(duì)香豆酸檢測(cè)方法高效液相色譜法2021-10-11發(fā)布2022-05-01實(shí)施國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口。本文件起草單位：北京化工大學(xué)、深圳市標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院、北京電子科技職業(yè)學(xué)院、中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、食藥環(huán)檢驗(yàn)研究院(山東)集團(tuán)有限公司、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、大連依利特分析儀器有限公司、天津阿爾塔科技有限公司、華測(cè)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)股份有限公司、中山內(nèi)得農(nóng)業(yè)科技有限公司、捷科思農(nóng)業(yè)科技(徐州)有限公司。1甘蔗皮渣中對(duì)香豆酸檢測(cè)方法高效液相色譜法本文件描述了甘蔗皮渣中對(duì)香豆酸含量的高效液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于甘蔗皮渣中對(duì)香豆酸的定性定量測(cè)定。對(duì)含有對(duì)香豆酸產(chǎn)品的含量檢測(cè)可參照使用。本文件檢出限為26.8mg/g,定量限為89.2mg/g。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T6379.2測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度)第2部分：確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。甘蔗皮渣試樣用2mol/LNaOH溶液提取，6mol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)pH至2.0左右，乙酸乙酯萃取后經(jīng)C18色譜柱分離，紫外-可見光檢測(cè)器檢測(cè)，色譜峰保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5試劑和材料5.1試劑除非另有說明，所有試劑均為色譜純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1.1甲醇(色譜純)。5.1.2乙酸(色譜純)。5.1.3乙酸乙酯(色譜純)。5.1.4鹽酸(優(yōu)級(jí)純36%～38%)。5.1.5氫氧化鈉(分析純)。5.2試劑配制乙酸水溶液(0.1%):移取0.25mL乙酸(5.1.2)于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。25.3標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)品(C?HaO?,CAS號(hào)：501-98-4):純度大于98.0%。5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.4.1對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1.0mg/mL):準(zhǔn)確稱取對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)品25.0mg(精確至0.1mg)于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。放置于4℃冰箱避光保存，有效期為一個(gè)月。5.4.2對(duì)香豆酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(5.4.1)40μL、0.20mL、0.80mL、1.00mL、4.00mL、8.00mL、10.00mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為4.0μg/mL、20.0μg/mL、80.0μg/mL、100μg/mL、配制。6儀器和設(shè)備6.1高效液相色譜儀，配有紫外-可見光檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。6.2天平：感量為0.0001g和0.001g。6.3烘箱。6.4磁力攪拌器。6.5抽濾裝置。6.7離心機(jī)。6.90.45μm針筒式有機(jī)相及水相過濾器。7檢測(cè)步驟7.1試樣制備7.1.1甘蔗皮渣粉末，置于80℃烘箱中烘干2h,保存待用。7.1.2稱取0.200g(精確至0.001g)甘蔗皮渣粉末樣品與梭形轉(zhuǎn)子放于25mL燒瓶中，移取10mL2mol/L氫氧化鈉溶液，輕輕搖晃使樣品和溶劑混合均勻，調(diào)節(jié)磁力攪拌器使轉(zhuǎn)子能夠帶動(dòng)溶液在室溫下攪拌6h。7.1.3取下燒瓶將溶液倒入放置兩層中速定量濾紙的抽濾裝置中，過濾，移取5mL2mol/L氫氧化鈉溶液分3次加入燒瓶中沖洗內(nèi)壁，洗液全部倒入抽濾裝置中，搖勻。7.1.4將濾液倒入100mL燒杯中，用少量2mL純水清洗抽濾瓶，洗液并入燒杯中。移取4.0mL6mol/L鹽酸溶液充分搖勻后再逐滴加入6mol/L鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH至2.0左右，用1mL純水沖洗pH計(jì)電極，洗液倒入燒杯中。7.1.5將上述酸性溶液轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，加水定容至刻度，混勻后以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min,取部分溶液用0.45μm針筒式水相過濾器過濾，即為試樣液，待測(cè)。7.2色譜測(cè)定7.2.1參考色譜條件色譜柱：C?柱，柱長(zhǎng)250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm,或具有同等性能的色譜柱。3GB/T40833—2021流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.1%乙酸溶液。梯度洗脫條件見表1。表1液相色譜梯度洗脫條件時(shí)間/minA/%B/%7.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液注入高效液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的保留時(shí)間和峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見附錄A中圖A.1)。7.2.3試樣測(cè)定將試樣液注入高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，同時(shí)記錄其峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出試樣液中對(duì)香豆酸的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于3次。待測(cè)試樣中對(duì)香豆酸的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)行分析。甘蔗皮渣粗提物色譜圖見附錄A中圖A.2。除不稱取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。8分析結(jié)果的表述試樣中對(duì)香豆酸的含量由色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按式(1)計(jì)算： (1)式中：X——試樣中對(duì)香豆酸的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——試樣液中對(duì)香豆酸的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——被測(cè)試樣的總體積，單位為毫升(mL);m——稱取試樣的質(zhì)量，單位為克(g);1000——換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的3次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。9精密度9.1一般規(guī)定本文件的精密度按照GB/T6379.2的規(guī)定確定，重復(fù)性和再現(xiàn)性的值以95%的可信度來計(jì)算。49.2重復(fù)性在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10