(高清版)GBT 40641-2021 松針聚戊烯醇含量的測(cè)定 高效液相色譜法

松針聚戊烯醇含量的測(cè)定高效液相色譜法國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由國家林業(yè)和草原局提出。本文件由全國林化產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC558)歸口。本文件起草單位：中國林業(yè)科學(xué)研究院林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所、中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院、北京林業(yè)大學(xué)、浙江科技學(xué)院、南京林業(yè)大學(xué)、深圳市標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院、中山洪力健康食品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司。1松針聚戊烯醇含量的測(cè)定高效液相色譜法本文件描述了用高效液相色譜法測(cè)定松針聚戊烯醇含量的方法。本文件適用于松科植物松針中的聚戊烯醇含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。松針聚戊烯醇polyprenolfrompineneedles從松科植物的針狀葉子中得到的由一系列異戊烯基(isoprenyl)單元聚合構(gòu)成的，具有不同鏈長(zhǎng)的松針原料經(jīng)石油醚熱回流提取、皂化、石油醚萃取、硅膠柱層析、乙酸乙酯-石油醚溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，再用0.22μm濾膜過濾后得澄清液，將酯變成游離的醇，經(jīng)反相色譜柱分離后，用高效液相色譜儀測(cè)5試劑或材料本文件所用試劑除另有說明外，皆為分析純，用水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水；未指明用何種溶劑5.2石油醚(60℃~90℃),乙酸乙酯。5.35%氫氧化鈉-甲醇溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)):稱取5g氫氧化鈉，用95mL甲醇溶解，經(jīng)0.22μm濾膜過濾。5.4聚戊烯醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%。5.5聚戊烯醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精確稱取500mg(精確到0.1mg)聚戊烯醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于50mL棕色容量2瓶中，加正己烷使其溶解并定容至刻度，混勻，此溶液可在溫度低于4℃冰箱中冷藏保存兩個(gè)月。5.6聚戊烯醇標(biāo)準(zhǔn)工作液：將聚戊烯醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用正己烷稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0.10mg/mL、0.60mg/mL、1.00mg/mL、2.00mg/mL、4.00mg/mL、6.00mg/mL,臨用時(shí)配制。5.7無水Na?SO?。6儀器設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器。6.2分析天平：感量0.1mg。6.3粉碎機(jī)。6.4旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。6.5水浴鍋。6.6真空干燥箱。6.7干燥器。6.8層析柱：300mm×16mm(內(nèi)徑)。7樣品7.1試樣的制備將松針原料干燥(含水率不大于3%)處理后，用粉碎機(jī)將其粉碎，得到試樣后，裝入潔凈干燥器中，于常溫下密閉、干燥保存?zhèn)溆谩?.2試樣溶液制備精確稱取試樣10g(精確到0.1mg)于500mL圓底燒瓶中，加200mL石油醚，65℃下熱回流2h;50℃下減壓濃縮回收溶劑，得石油醚軟膏抽提物；然后加入50mL5%氫氧化鈉-甲醇溶液，于80℃水浴中皂化水解并攪拌3.5h,冷卻；加水稀釋至100mL,用石油醚萃取3次，每次100mL,合并3次石油將7.2.1中所得軟膏用適量石油醚溶解后，上硅膠層析柱進(jìn)行分離(上樣量與硅膠質(zhì)量比為1:30);先用石油醚洗脫4個(gè)柱體積，再用乙酸乙酯-石油醚(體積比4:96)溶劑洗脫8個(gè)柱體積，洗脫液減壓濃縮回收溶8測(cè)定步驟8.1高效液相色譜參考條件高效液相色譜條件參考如下：GB/T40641—2021a)色譜柱：Cg,150mm×4.6mm(內(nèi)徑),粒徑5μm,或相當(dāng)者；b)流動(dòng)相：甲醇-異丙醇(體積比9:16);d)進(jìn)樣量：5μL;8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作向液相色譜柱中注入濃度為0.10mg/mL、0.60mg/mL、1.00mg/mL、2.00mg/mL、4.00mg/mL、6.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在上述色譜條件下得到色譜峰面積(以C65、C70、C75、C80、C85為主要特征峰計(jì)算，下同),以峰面積對(duì)相應(yīng)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。濃度為6.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的高效液相色譜圖參見附錄A中的圖A.1。8.3試樣溶液的測(cè)定對(duì)同一試樣平行做兩份試驗(yàn)。向高效液相色譜柱中注入樣品試驗(yàn)溶液得到色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液聚戊烯醇的濃度。8.4空白實(shí)驗(yàn)除不加試樣外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行測(cè)定。9結(jié)果計(jì)算與表示試樣中聚戊烯醇含量利用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計(jì)算或按式(1)計(jì)算。式中：X——試樣中聚戊烯醇的含量，單位為毫克每克(mg/g)c——試樣中聚戊烯醇的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);50——試樣定容體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為(g)。測(cè)定結(jié)果以兩次平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后兩位有效數(shù)字。樣品吸收峰應(yīng)在聚戊烯醇標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的校準(zhǔn)范圍內(nèi)，若樣品吸收峰高于6.00mg/mL濃度的聚戊烯醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的吸收峰，則應(yīng)重新配制高濃度聚戊烯醇標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行校準(zhǔn)。10精密度在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作者使用相同設(shè)備，按相同的測(cè)試方法，并在短時(shí)間內(nèi)對(duì)同一