醫(yī)學(xué)實驗室校準與比對(浦春)

醫(yī)學(xué)實驗室校準與比對

皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院浦春

philipcpu@163.com衛(wèi)生部規(guī)定衛(wèi)生部《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》第三章醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室質(zhì)量管理第二十四條醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室應(yīng)當保證檢測系統(tǒng)的完整性和有效性，對需要校準的檢驗儀器、檢驗項目和對臨床檢驗結(jié)果有影響的輔助設(shè)備定期進行校準。安徽省等級醫(yī)院評審標準中相關(guān)條例二級醫(yī)院評審標準三級醫(yī)院評審標準ISO15189

5.3實驗室設(shè)備

注：適用時，在本準則中實驗室設(shè)備指儀器設(shè)備、參考物質(zhì)、消耗品、試劑和分析系統(tǒng)。5.3.4應(yīng)保持影響檢驗性能的每件設(shè)備的記錄，至少應(yīng)包括：

h)項中提到的性能記錄應(yīng)包括所有校準和/或驗證報告/證明的復(fù)件，內(nèi)容包括日期、時間、結(jié)果、調(diào)整、可接受標準以及下次校準和/或驗證的日期，在兩次維護/校準之間的核查頻次.5.6檢驗程序的質(zhì)量保證5.6.2適用且可能時，實驗室應(yīng)確定檢驗結(jié)果的不確定度。5.6.3應(yīng)設(shè)計并實施測量系統(tǒng)校準和正確度驗證計劃，

a)參加適當?shù)膶嶒炇冶葘τ媱滳LIA’884、化驗結(jié)果的比較如果實驗室對某一項目的測定采用兩種相似的方法，則所在組室的負責(zé)人必須每年兩次對有關(guān)的化驗結(jié)果進行比較工作，步驟如下：一、選擇適當數(shù)量的標本二、確定可接受的標準三、進行兩種方法測定結(jié)果的比較，如達不到標

準，要有解決措施四、記錄全過程，并保存兩年

校準比對一.幾個基本概念

1.溯源

2.標準品

3.檢測系統(tǒng)

4.不確定度

5.校準和校準確認

1.溯源溯源（traceability）:通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準（通常是與國家標準或國際標準）聯(lián)系起來的特性。［VIM：1993，定義6.10］溯源目的對病人的標本進行檢驗并報告可靠的結(jié)果。醫(yī)學(xué)檢驗的傳統(tǒng)：對收集的患者標本只做一次檢驗，就發(fā)出報告。因此，發(fā)出報告的可靠性必須體現(xiàn)兩個基本要求:

精密度：重復(fù)性好；準確度：和參考方法具有可比性。溯源性臨床檢驗始終以分析過程準確度度量結(jié)果的準確度。分析過程準確度：檢測均值和作為真值的可接受值間的一致性。度量分析過程準確度的方法稱方法學(xué)比較。溯源性在方法學(xué)比較中，“真值”即是參考方法對患者標本的檢測結(jié)果。因此，常用檢測系統(tǒng)對患者標本的檢測結(jié)果，在計量單位相同的前提下，若能使結(jié)果的量值和參考方法的結(jié)果量值一致，說明結(jié)果準確。所以在溯源性和標準化中，傳遞結(jié)果可靠性的最重要方法為方法學(xué)比較。實現(xiàn)溯源性的必備條件

1．建立“公司一級參考品”，由公司選擇國際上知名的參考實驗室委托定值。

2.設(shè)立公司內(nèi)部使用的“一級校準品”。

3.需要建立公司生產(chǎn)用的商品應(yīng)用校準品（WorkingCalibrator），日常供應(yīng)的校準品為商品校準品（BusinessCalibrator）。2.校準品

1．衡量一個檢測系統(tǒng)（檢驗方法）的基本分析性能有4點：不精密度、不準確度、病人結(jié)果可報告范圍、分析靈敏度。校準品2．標準品傳統(tǒng)的臨床檢驗，要使檢驗結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往有一個標準品(Standard)。校準品

3．校準品和定值為了克服因純標準液和病人樣品間的基體差異，對檢驗結(jié)果的嚴重誤差，20年前開始引用具有與病人樣品基體相似的校準品替代標準品，用于日常工作。校準品使用了自動化分析儀，日常檢驗的精密度得到了顯著的提高；在優(yōu)良試劑盒的配合下，病人結(jié)果的可報告范圍也可以滿足臨床要求；大多常規(guī)檢驗項目沒有對極低濃度的臨床要求。這樣，結(jié)果的可靠性的關(guān)鍵是準確度。因此，實現(xiàn)新鮮病人標本結(jié)果的溯源性，成為使校準品值實現(xiàn)溯源性。常規(guī)臨床化學(xué)測定的

校準品定值過程

SI制單位定義一級校準品二級校準品生產(chǎn)應(yīng)用校準品

產(chǎn)品校準品

常規(guī)樣品二級參考檢測方法一級參考檢測方法廠商選擇的檢測方法廠商常備的檢測方法

用戶常規(guī)的檢測方法結(jié)果不確定度理解校準品可是，盡管校準品的主要來源是人的血清，為了使校準品內(nèi)的一些分析物水平達到某個程度，而且形成穩(wěn)定的產(chǎn)品，所有的校準品、控制品、室間調(diào)查品等都是處理過的血清。和原來的天然血清間又產(chǎn)生了新的基體差異。理解校準品使用校準品的目的，是使檢測系統(tǒng)對病人標本檢測結(jié)果，實現(xiàn)溯源性。校準品定值在系列標準化內(nèi)容中，是一個最突出的課題。實現(xiàn)病人結(jié)果的溯源性，必須在校準品定值過程中，自始至終使用病人新鮮標本。堅持使用方法學(xué)比較實驗，驗證結(jié)果的可靠性。理解校準品新鮮病人標本是最佳校準品須明確的，所有用于檢驗中的檢測方法、儀器、試劑等都是用來檢測病人新鮮標本的，不是用來檢測校準品這樣的處理過樣品。標準化1972年，由ISO出版T．R．B．Sanders主編的《標準化的目的與原理》一書對標準化下的定義是：“在所有有關(guān)方面的協(xié)作下，進行有秩序的特定活動所制定并實施各項規(guī)則的過程。”

標準品是標準化必備條件和臨床檢驗的實踐和需求結(jié)合起來，可以簡單理解為：為了實現(xiàn)臨床檢驗結(jié)果的溯源性，檢測系統(tǒng)的生產(chǎn)廠商的所有努力，進行有秩序的特定活動所制定并實施各項規(guī)則的過程為標準化。

理解校準品如果先用公認的參考方法檢測病人標本，再以具有參考值的病人標本去校準某檢測系列（包括方法、試劑、儀器），此時該檢測系列再檢測其他新鮮病人標本時，被檢測的病人標本結(jié)果的溯源性可上溯至公認的參考方法。也即用新鮮病人標本是校準檢測系列的最佳校準品。由于新鮮病人標本的局限性，加工的穩(wěn)定血清將成為商品化的校準品材料。

標準化的各要素校準品試劑分析儀檢測系統(tǒng)的要素3.檢測系統(tǒng)完成一個檢驗項目檢測所涉及的儀器、試劑、校準品、操作程序、質(zhì)量控制、保養(yǎng)計劃等的組合，稱為檢測系統(tǒng)。若是手工操作，還必須包括具體的操作人員。檢測系統(tǒng)儀器試劑校準品檢測方法的分類檢測方法分類大致上可以分為三類：確認方法（Definitivemethod）；參考方法（Referencemethod）；常規(guī)方法（Routinemethod）。參考方法示例總膽固醇測定確認方法為同位素稀釋質(zhì)譜（ID-MS）法；參考方法為硫磷鐵法（皂化-抽提-濃硫酸、磷酸顯色）；常規(guī)方法為酶法（膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過氧化物酶、Trinder顯色終點法）。美國NIST建立的標準參考品有：純膽固醇SRM911；凍干人血清SRM909。常用的參考品代碼1．CRM＝歐洲共同體認可的參考品，2．SRM＝美國的標準參考品3．ID-MS＝同位素稀釋－質(zhì)譜分析4．CDC=疾病控制中心5．NIBSC＝英國的國家生物標準和控制研究院通過方法學(xué)比較確定定值儀器校驗公司組合的檢測系統(tǒng)和初步校準品定值（·）方法學(xué)比較標準化過程信號Ctar為具有參考值血清在公司組合的檢測系統(tǒng)上的檢測結(jié)果。Cref為參考血清的參考值。校準品的溯源性依據(jù)（示例）火焰光度法

K〔鉀（ISE）〕

SRM927ProteinTotal〔總蛋白〕

一級標準（稱量法）

Lactate〔乳酸〕

WHO，SP1-01Apo-A1〔載脂蛋白A1〕

ID-MSAbellKendallCHOL〔膽固醇〕

電量滴定法Cl〔氯（ISE）〕

Doumas方法TBIL〔總膽紅素〕

IFCC1983

手工方法

ALP〔堿性磷酸酶〕

CRM470Alb〔白蛋白（BCP）〕

參考方法或參考品項目（分析物）檢測系統(tǒng)性能基本內(nèi)容六大性能：不精密度（總不精密度）不準確度（方法學(xué)比較結(jié)果）病人結(jié)果可報告范圍分析靈敏度（檢測限）分析特異性參考范圍4.不確定度不確定度(uncertaintyofameasurement)

：表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。

1999年:我國發(fā)布《測量不確定度評定與表示》在國家標準GB/T15481-2000中，5.4.6明確規(guī)定：“校準實驗室應(yīng)具有并應(yīng)用評定測量不確定度的程序?！辈淮_定度可較好表明基準、校準的水平，產(chǎn)生測量不確定度的原因1.測量過程中隨機效應(yīng)及系統(tǒng)效應(yīng)均會導(dǎo)致測量不確定度，數(shù)據(jù)處理中的修約也會導(dǎo)致不確定度。2.測量結(jié)果的不確定度反映了對被測量之值的認識不足，借助于已查明的系統(tǒng)效應(yīng)對觀測結(jié)果進行修正后，所得到的只是被測量的估計值，而修正值的不確定度以及隨機效應(yīng)導(dǎo)致的不確定度依然存在。測量不確定度應(yīng)用批內(nèi)變異【CV(w)】批間變異【CV（b）】偏倚變異【CV(bias)】不確定度【CV(syst)】其他原因的不確定【CV(oth)】

U=（√CV(w)2+CV（b）2+CV(syst)2+CV(oth)2

）×25.校準和校準確認

校準:是檢測和調(diào)整儀器或檢測系統(tǒng)讀數(shù)的過程,以建立檢測分析物的儀器測量和分析物的實際濃度間的關(guān)系.

校準確認:是對已知濃度的材料,和患者標本一樣的方式作檢測,用于確保檢測系統(tǒng)在可報告范圍內(nèi)能準確地檢測患者樣品.--擇自CLIA’88

校準品試劑儀器病人標本檢驗結(jié)果校準按檢測程序檢測具溯源性和可比性

二.校準

1.計量部門進行的校準檢測

強制性執(zhí)行，每年一次；包括比色計、分析天平、酶標儀、PH儀等。

2.廠家提供的校準舉例說明

---SysmaxUF-1000i儀器校準報告SysmaxUF-1000i儀器校準流程進行儀器環(huán)境確認,包含溫度,濕度，接入電壓及試劑的有效性進行測量項目(RBC、WBC、EC、CAST、BACT)本底確認,本底符合儀器要求進行儀器攜帶污染率試驗使用儀器配套校準品(calibrator)進行儀器性能校準,包含儀器總計數(shù),靈敏度,電導(dǎo)率;各項參數(shù)若有偏移則進行調(diào)整使用儀器配套質(zhì)控(UFⅡCONTROL-H,UFⅡCONTROL-L)進行校準后的驗證試驗,符合質(zhì)控要求取新鮮尿液標本進行測量項目的重復(fù)性試驗,各項CV符合儀器要求SysmaxUF-1000i校準內(nèi)容

每年校準2次（工程師負責(zé)校準）。儀器的校準條件：排除各種原因后質(zhì)控未能通過，主要部件更換后或儀器遠距離搬動，或嚴重故障須重新校準。校準驗證：校準后即做質(zhì)控，結(jié)果符合質(zhì)控范圍，校準后及時做精密度測試和線性測試。精密度：取兩個不同值標本，每份連續(xù)測11次結(jié)果，去除第一次結(jié)果進行統(tǒng)計。要求符合精密度標準。線性：分別取富含白細胞和紅細胞的尿液,高、中、低值三份用改良牛鮑氏計數(shù)池計數(shù)20次取均值作為理論值。各稀釋尿樣（鞘液稀釋）用UF-1000i各計數(shù)20次，取均值做回歸分析。結(jié)果判斷：b要在1.00±0.1。校準結(jié)果1.測試條件實驗室環(huán)境環(huán)境溫度濕度電源

25℃41%220VAC

試劑序號試劑名稱代號試劑批號失效期1UFⅡSEATHUTSA80062009/06/112UFⅡSEARCH（SED）USSA80022009/03/273UFⅡSEARCH（BAC）USBA80022009-030264UFⅡPACK（SED）UPSA80022009/04/025UFⅡPACK（BAC）UPBA80022009/04/02校準結(jié)果

試驗材料校準物:UFⅡCONTROL-LLOTNO:YA8007EXP.DATE:2009-01-08參數(shù)RBCWBCECCASTBACTConductivity單位（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）Ms/cm測試值38.940.99.95.21161.68.5靶值40.839.79.35.65198.08.5范圍20.419.95.64.5259.41.7結(jié)論合格合格合格合格合格合格校準結(jié)果2.空白

參數(shù)RBCWBCECCASTBACT單位（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）B010.00.00.00.000.0判定標準≤1110.21結(jié)論合格合格合格合格合格參數(shù)SEDTotalCountBACTotalCount單位countcountB011334判定標準≤3003000結(jié)論合格合格校準結(jié)果

3.重復(fù)性（變異系數(shù)

CV）試驗材料新鮮尿標本

參數(shù)RBCWBCECCASTBACT單位（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）1199.8817.485.121.82706.2……..…….………..……..10190.6802.281.122.79722.4MEAN197.52813.7078.5922.576712.10SD5.19812.0774.0951.53211.911CV2.63%1.48%5.21%6.79%1.67%判定標準CV≤10.0%10.0%30.0%40.0%10.0%結(jié)論合格合格合格合格合格校準結(jié)果4.攜帶污染

試驗方案說明取高濃度尿液樣本（RBC>5000count/Ul,BACT>10000count/uL）.混合均勻后連續(xù)測定三次，測定值分別為H1、H2、H3；再取低濃度尿液樣本，連續(xù)測定3次，測定值分別為L1、L2、L3。按公式計算攜帶污染率。攜帶污染率

=（L1－L3）×100%

（H3－L3）

試驗日期

試驗材料新鮮尿標本

參數(shù)RBCBACT

單位（/uL）（/uL）

H15,405.510,298.9

H25,418.214,763.6

H35,437.313,236.2

L13.336.6

L21.938.5

L31.532.5

攜帶污染率0.03%0.03%

要求≤0.1%0.05%

結(jié)論合格合格

校準結(jié)果

5.校準校準物檢測結(jié)果及計算校準系數(shù)參數(shù)SEDParticleBACParticleConductivity單位（/uL）（/uL）Ms/cm定值817.5817.536.21811.0823.636.72827.9817.836.23821.4801.636.24827.6833.637.25824.4801.537.56806.0804.436.9MEAN(均值)819.72813.7536.78SD9.14313.3610.527CV1.12%1.64%1.43%偏差（%）

（均值-定值）100/定值0.27%0.46%1.61%偏差要求≤5.00%5.00%3.00%結(jié)論(是否需要校準)不需校準不需校準不需校準校準系數(shù)（定值/均值）99.73%100.46%

儀器原有校準系數(shù)94.692Y=0.0212X-41.4242新的校準系數(shù)

校準結(jié)果6.校準儀器的靈敏度參數(shù)試驗方案說明做校準時靈敏度參數(shù)應(yīng)該符合校正表中的要求試驗材料校準物:UFⅡCALIBRATORLOTNO:A8007EXP.DATE:2008-11-08參數(shù)S-FSCS-FSCWS-FLHS-FLLS-SSCB-FSCB-FLH單位chchchchchchch測試值108.4025.7017.2130.820.890.4144.7低限107.9025.1016.3123.120.389.5111.0高限114.5026.7020.2166.524.895.0150.2結(jié)論合格合格合格合格合格合格合格校準結(jié)果7.儀器校正后的驗證

參數(shù)RBCWBCECCASTBACTConductivity單位（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）（/uL）Ms/cm測試值197.6819.373.821.10754.835.9靶值200.1824.781.619.46821.336.5范圍40.0164.940.89.73205.33.7結(jié)論合格合格合格合格合格合格2.自建檢測系統(tǒng)校準（1）校準前準備選擇性能良好的試劑盒實驗室挑選適合自己儀器的產(chǎn)品實驗室應(yīng)建立完整和詳細的操作規(guī)程確定實驗室溯源性的目標實驗室校準的目標向較為可靠檢測系統(tǒng)靠攏以患者的新鮮標本為實驗對象以方法學(xué)比較為驗證手段實現(xiàn)自建檢測系統(tǒng)溯源性的步驟（2）確定自建系統(tǒng)為實驗室實現(xiàn)溯源性的目標對儀器進行一次完整的保養(yǎng)，確認儀器處于良好狀態(tài)。確保用于儀器上的水質(zhì)優(yōu)良。所有實驗過程都必須有分析過程的質(zhì)量控制。使用自選試劑盒，在儀器上進行精密度實驗。一般的檢驗項目以CLIA’88允許誤差的1/4為指標(不能超出根據(jù)生物學(xué)變異確定的不精密度要求)。如果為新選擇的試劑盒，進行批內(nèi)和天間的兩個精密度實驗。對自選試劑盒和儀器組合的可報告范圍的評估。進行初步的方法學(xué)比較；相關(guān)系數(shù)超過0.975，說明兩方法間的系統(tǒng)誤差可以用得到的直線回歸式進行分析。在為自建檢測系統(tǒng)確定校準關(guān)系時，希望方法學(xué)比較的截距要小，若方法學(xué)比較結(jié)果不僅截距小、斜率極其接近1，這意味著實驗室自建檢測系統(tǒng)對標本的檢測結(jié)果，和溯源目標檢測系統(tǒng)對標本的檢測結(jié)果非常接近。以患者標本為臨時校準品，對自建系統(tǒng)的校準，在以上實驗的基礎(chǔ)上，已經(jīng)證明。自建系統(tǒng)的精密度，可報告范圍符合要求，方法學(xué)比較結(jié)果實現(xiàn)自建檢測系統(tǒng)溯源性的步驟尋求穩(wěn)定校準品是保持使用自建檢測系統(tǒng)對患者標本檢測結(jié)果可以溯源至目標檢測系統(tǒng)關(guān)鍵。購買一批質(zhì)量好、知名度高的公司凍干控制品，最好能考慮使用1~2年的量。購買的控制品，不采用原公司的定值。按照使用要求，復(fù)溶控制品。將控制品當作一個樣品。在經(jīng)血清校準后的自建系統(tǒng)上進行多次檢測(至少3次以上)，取均值。在保持原自建檢測系統(tǒng)上的儀器、試劑盒和操作程序不變的情況下，以該控制品的檢測均值為“校準值”；然后,再對一批患者血清(內(nèi)含分析物量分布于整個可報告的范圍)進行經(jīng)血清校準后的自建系統(tǒng)和可溯源系統(tǒng)方法學(xué)比較實驗。若能保持所有標本結(jié)果差異在CLIA’88允許誤差的1/4內(nèi)，說明“自建校準品”對“自建檢測系統(tǒng)校準成功。自此，實驗室建立了自己的完整檢測系統(tǒng)。三.比對

【目的】：

在目標檢測系統(tǒng)上定值后校準自建檢測系統(tǒng)，經(jīng)校準驗證和方法比對，實現(xiàn)自建檢測系統(tǒng)與目標系統(tǒng)檢測結(jié)果的可比性。1.比對程序1.根據(jù)各檢測系統(tǒng)的情況，確定性能良好的，有溯源性的檢測系統(tǒng)為目標檢測系統(tǒng)。2.實驗前對儀器進行常規(guī)維護與保養(yǎng)，各實驗室按常規(guī)方法進行校準和質(zhì)控。3.標本的收集、處理：⑴要求使用當天的標本。每份應(yīng)有足夠的量，不夠時可以將含量相近的兩份標本混合，不能多于二份。⑵盡可能使50%的實驗標本分析物的含量在參考區(qū)間外、可報告范圍內(nèi)，各個標本分析物含量越寬越好。⑶不要使用對任何一方法有干擾的標本。4.測定：⑴

由專人至少收集20份標本進行一致性的比較。⑵每份標本進行雙份檢測，在1天或3~5天完成檢測，開始檢測時間應(yīng)相近，且都應(yīng)在2小時內(nèi)檢測完畢。⑶標本按1、2、3、4、5、6順序排列先測一遍，然后將順序倒過來做第二次檢測得出數(shù)據(jù)。⑷定期實施比對（每季度一次），及時解決比對中出現(xiàn)的問題，并保留記錄。比對分析的數(shù)據(jù)處理1.數(shù)據(jù)收集與處理。2.不采用已明確有人為誤差的結(jié)果。3.按EP9-A文件進行方法間離群值檢查。將每一個標本兩方法的前后2個測定值一一對應(yīng)，求出對應(yīng)值之間的差值和所有差值的平均值，以差值的平均值的4倍為判斷限，兩方法間標本的成