楊樹桑黃多糖提取工藝與測(cè)定

摘要通過(guò)比較微波提取、超聲提取、加熱回流提取，70℃水浴浸提4種方式對(duì)桑黃子實(shí)體中多糖工藝的提取，參考多糖含量以及遵循科學(xué)環(huán)保的原則選定最佳提取方法，以響應(yīng)面法優(yōu)化多糖提取工藝。比較苯酚-硫酸法與蒽酮-硫酸法測(cè)定多糖含量。結(jié)果表明，超聲提取法可用于楊樹桑黃的多糖提取，響應(yīng)面法優(yōu)化的最佳提取條件為：超聲時(shí)間25min、液料比400:1（mL/g）、超聲功率60kHz；蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法均可用于楊樹桑黃中多糖含量的測(cè)定?；凇岸嗵恰睖y(cè)定以及實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性，證明苯酚-硫酸法更適合測(cè)定楊樹桑黃中多糖的含量，該結(jié)果可為其建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)做以參考。引言楊樹桑黃（Sanghuangporusvaninii(Ljub.)L.W.Zhou&Y.C.Dai）因其子實(shí)體生長(zhǎng)在楊樹上而得名，是傳統(tǒng)菌物藥“桑黃””基源物種之一?！吧｜S”始載于秦漢時(shí)期的《神農(nóng)本草經(jīng)》，在歷代的本草著作中被廣泛記載和描述，具有活血、止血、化飲、止瀉之功效。東亞地區(qū)的日本和韓國(guó)也將桑黃作為一種傳統(tǒng)草藥，并將楊樹桑黃作為“桑黃”來(lái)應(yīng)用，市場(chǎng)認(rèn)可度較高?，F(xiàn)代研究表明，桑黃多糖具有良好的抗腫瘤、抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等藥理活性作用。桑黃中含有的多糖成分具有良好的抗腫瘤作用，是評(píng)價(jià)不同來(lái)源桑黃質(zhì)量的重要指標(biāo)。目前，桑黃暫無(wú)國(guó)家級(jí)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，在已頒布并實(shí)施的省級(jí)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，均將桑黃多糖含量列為重要質(zhì)控指標(biāo)。然而，不同省份桑黃標(biāo)準(zhǔn)中采用的提取工藝和測(cè)定方法卻不相同，桑黃多糖的提取方法主要有溶劑浸提法、超聲提取法、微波提取法、低溫低壓提取法、增壓提取法等。其中，溶劑浸提法效率不高；低溫低壓提取法和增壓提取法常受限于實(shí)驗(yàn)條件限制，多糖產(chǎn)量不高且在市場(chǎng)質(zhì)量控制中并不普及；響應(yīng)面法響優(yōu)化桑黃規(guī)?；斯ぴ耘鄺l件的研究已有報(bào)道，尚未有關(guān)于響應(yīng)面法優(yōu)化楊樹桑黃提取工藝的研究?；谝陨锨闆r，選擇桑黃多糖為指標(biāo)，進(jìn)行提取工藝及分析方法的比較，以優(yōu)化出科學(xué)的桑黃多糖測(cè)定方法顯得更為重要。本文參考中國(guó)藥典（2015年版）一部中常見提取方法[17]以及安徽、陜西、甘肅桑黃地方標(biāo)準(zhǔn)，考察了微波提取、超聲提取、加熱回流提取和水浴浸提工藝對(duì)楊樹桑黃多糖進(jìn)行提取，采用響應(yīng)面法優(yōu)化楊樹桑黃子實(shí)體中多糖提取工藝。在此基礎(chǔ)上，比較了蒽酮－硫酸法與苯酚－硫酸法用于楊樹桑黃多糖測(cè)定的科學(xué)性，以期更加高效、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)桑黃質(zhì)量，為其質(zhì)量控制與合理開發(fā)提供參考。

正文部分1

實(shí)驗(yàn)部分1.1

主要儀器與試劑通過(guò)蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸法對(duì)多糖進(jìn)行測(cè)定，分別參考省級(jí)桑黃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法，并進(jìn)行方法學(xué)考察試驗(yàn)。按照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0832第二法，測(cè)定樣品水分。UVProbe2.70軟件以濃度為橫坐標(biāo)、吸光值為縱坐標(biāo)繪制對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線，多糖含量計(jì)算水分計(jì)算參照《中國(guó)藥典》方法。

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結(jié)果與討論比較微波提取、超聲提取、加熱回流、70

℃水浴浸提工藝對(duì)桑黃多糖含量的測(cè)定結(jié)結(jié)果，如表1所示。以各因素水平為橫坐標(biāo)、多糖含量為縱坐標(biāo)，結(jié)果見圖1。表2為確定的超聲工藝3個(gè)因素、3個(gè)水平值，運(yùn)用Desgin-Expert軟件，以桑黃多糖含量為響應(yīng)值，Box-Behnken的組合設(shè)計(jì)3因素3水平共17個(gè)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表3。圖2～4為多糖提取工藝中各因素間的等高線圖與3D圖譜，較好地反映了因素間的交互作用。2.2.3

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)優(yōu)化后桑黃多糖超聲提取工藝為：超聲時(shí)間27.06min、液料比408.46:1（mL/g）、超聲頻率55.08kHz，此條件下提取桑黃多糖含量的預(yù)測(cè)值為3.04%。2.3.1

吸收波長(zhǎng)比較采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法對(duì)葡萄糖對(duì)照品和桑黃多糖樣品進(jìn)行測(cè)定，掃描其在400～900nm區(qū)域的最大吸收波長(zhǎng)，吸光度變化如圖4所示。2.3.2

穩(wěn)定性結(jié)果比較分別采用苯酚-硫酸和蒽酮-硫酸法對(duì)楊樹桑黃多糖溶液12h內(nèi)穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果見圖5。2.3.3

重復(fù)性結(jié)果比較分別采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法對(duì)6份楊樹桑黃多糖樣品溶液進(jìn)行吸光度測(cè)定，結(jié)果見表6。2.3.4

準(zhǔn)確性結(jié)果比較如表7所示，參考中國(guó)藥典2015版要求，兩種方法測(cè)定的回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在1.5%之內(nèi)，回收率為95%～102%。3

結(jié)論結(jié)論本文可用于桑黃企業(yè)生產(chǎn)、省級(jí)檢驗(yàn)以及質(zhì)控等方面。超聲提取可用于楊樹桑黃的多糖提取，多糖提取效率和得率均高于加熱回流提取和70

℃水