有機(jī)磷農(nóng)藥中毒患者體內(nèi)有機(jī)磷檢測(cè)研究進(jìn)展

摘要有機(jī)磷農(nóng)藥是全球最廣泛使用的農(nóng)藥之一，每年因有機(jī)磷中毒的患者達(dá)數(shù)十萬。然而，中毒患者體液基質(zhì)復(fù)雜且有機(jī)磷農(nóng)藥含量低，因此選取合適的前處理方法與現(xiàn)代分析儀器聯(lián)用對(duì)有機(jī)磷中毒患者體內(nèi)藥物濃度進(jìn)行檢測(cè)，一直是臨床診療中亟需解決的關(guān)鍵問題。綜述了臨床診療中常見有機(jī)磷農(nóng)藥的分類、危害，以及國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的中毒患者體液中有機(jī)磷農(nóng)藥的前處理和檢測(cè)方法，同時(shí)對(duì)有機(jī)磷樣品前處理以及檢測(cè)方法分別進(jìn)行了優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比，以期為臨床中毒患者快速確定血藥濃度的方法改進(jìn)提供思路。引言有機(jī)磷農(nóng)藥是指含磷元素的有機(jī)酯類化合物農(nóng)藥（結(jié)構(gòu)通式見下圖），被廣泛用于農(nóng)業(yè)、家庭寄生和結(jié)構(gòu)性害蟲的防治，具有成本低、藥效高、選擇性好、半衰期短等優(yōu)點(diǎn)。有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)構(gòu)通式中R1和R2通常是甲基和乙基，磷氧雙鍵被磷硫雙鍵取代后毒性降低，X基團(tuán)中磷氧單鍵毒性高于磷碳單鍵。由于其存在蓄積性、持久性等缺點(diǎn)，由此產(chǎn)生的環(huán)境污染、食品污染等問題日益凸顯，特別是隨著有機(jī)磷在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的規(guī)模化使用，使用不當(dāng)或人為蓄意攝入等引起的有機(jī)磷農(nóng)藥中毒事件時(shí)有發(fā)生。

正文部分1

臨床診療中常見有機(jī)磷農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物有機(jī)磷農(nóng)藥根據(jù)分子結(jié)構(gòu)可以分為磷酸脂類、硫代磷酸酯類、磷酰胺類、焦磷酸脂類和膦酸酯類。而在臨床診療中，依據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥的LD50（口服半數(shù)致死量），將其分為劇毒類、高毒類、中毒類和低毒類。2

臨床有機(jī)磷中毒檢測(cè)方法盡管有機(jī)磷農(nóng)藥中毒患者血液與尿液中有機(jī)磷含量較低，但隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，文獻(xiàn)報(bào)道的有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)方法日益多樣化，根據(jù)原理不同大致可以分為分光光度法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法、離子色譜法和生物傳感器法等。2.1

分光光度法分光光度法是利用物質(zhì)的化學(xué)活性使某些試劑顯色或褪色，根據(jù)吸光度與濃度的線性關(guān)系測(cè)定其含量。2.2

薄層色譜法薄層色譜法（TLC）是將適宜的固定相均勻涂于玻璃板、塑料或鋁基片上，根據(jù)比移值（Rf值）與適宜的對(duì)照物按同法所得色譜圖的Rf值的對(duì)比關(guān)系來測(cè)定含量。2.3

離子色譜法離子色譜法（IC）是利用離子交換原理連續(xù)對(duì)共存的多種陰離子或陽離子進(jìn)行分離、定性和定量的方法，目前已由最初單一無機(jī)陰離子分析發(fā)展到多種無機(jī)離子及有機(jī)陰陽離子同時(shí)分析。2.4

氣相色譜法氣相色譜法（GC）是根據(jù)物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相（氣體）中的分配系數(shù)差異而進(jìn)行分離的檢測(cè)方法，由于有機(jī)磷農(nóng)藥沸點(diǎn)一般在200℃左右，故多采用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)。采用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)器一般使用氮磷檢測(cè)器（NPD）、質(zhì)譜（MS）、火焰光度檢測(cè)器（FPD）等。近年來文獻(xiàn)報(bào)道中毒人體體液中有機(jī)磷的氣相色譜檢測(cè)法如表3所示。2.5

高效液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）的原理和氣相色譜相似，區(qū)別在于以液體為流動(dòng)相對(duì)樣品進(jìn)行分離檢測(cè)，適用于檢測(cè)熱穩(wěn)定性差或不易汽化的有機(jī)磷農(nóng)藥。利用HPLC來檢測(cè)樣品時(shí)檢測(cè)器一般采用紫外吸收（UV）、質(zhì)譜（MS）、熒光等。液相色譜法具有分離效果好、快速靈敏的優(yōu)點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)室多采用MS檢測(cè)器。但是由于成本和技術(shù)限制，無法大面積推廣。而相對(duì)來說便宜的UV檢測(cè)器，要求待測(cè)物有發(fā)色團(tuán)，具有很大限制性。2.6

生物傳感器法生物傳感器是由一種生物敏感部件與轉(zhuǎn)換器緊密配合的分析裝置，對(duì)特定化學(xué)物質(zhì)或生物活性物質(zhì)具有選擇性和可逆響應(yīng)，通過測(cè)定物理化學(xué)信號(hào)變化檢測(cè)農(nóng)藥含量。姜海洋等[35]以氮摻雜碳球修飾玻碳電極，采用交聯(lián)法固定氯化乙酰膽堿酯酶，制備AChE/N-Cs/GCE傳感器，對(duì)敵敵畏進(jìn)行檢測(cè)，回收率為89.32%～93.55%。生物傳感器法檢測(cè)時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便、對(duì)檢測(cè)人員要求不高，但是生物傳感器制備價(jià)格昂貴，且受到多種因素影響，重現(xiàn)性差。3

樣品前處理由于尿液和血液中含有多種雜質(zhì)，在使用氣相、液相檢測(cè)時(shí)會(huì)產(chǎn)生多種雜質(zhì)峰，無法直接上樣。而使用光度法和薄層色譜法時(shí)，對(duì)測(cè)定結(jié)果干擾大。同時(shí)人體體液中有機(jī)磷含量較低，在檢測(cè)時(shí)需要通過對(duì)樣品進(jìn)行分離富集后再進(jìn)行檢測(cè)，以此提高樣品檢出限和精準(zhǔn)度。近年來文獻(xiàn)報(bào)道中毒人體體液中有機(jī)磷的前處理方法主要有簡(jiǎn)單前處理、液液萃取、柱固相萃取等。3.1

簡(jiǎn)單前處理簡(jiǎn)單前處理是采用簡(jiǎn)單的方法去除樣品中雜質(zhì)后直接進(jìn)行檢測(cè)，目前常用的有冷凍除脂、有機(jī)溶劑提取等。此方法簡(jiǎn)單快速，但是存在雜質(zhì)處理不完全等缺點(diǎn)。3.2

液液萃取液液萃?。↙iquid-liquidextraction，LIE）是利用待測(cè)組分和雜質(zhì)在兩個(gè)互不相溶的溶劑中的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離純化目的。3.3

固相萃取固相萃?。⊿olidPhaseExtraction，SPE）是利用固體吸附劑將樣品中的目標(biāo)化合物吸附，去除樣品基體和干擾化合物，從而達(dá)到分離富集目標(biāo)化合物的目的。3.4

其他方法以DB-5毛細(xì)管柱為分析柱，采用QuEChERS法將樣品與硫酸鎂、乙二胺-N-丙基硅烷、C18混合渦旋，過膜，對(duì)尿液中19種有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，樣品回收率為91.3%～117.2%，檢測(cè)限為0.005～0.012μg/mL，RSD為2.6%～7.2%。4

結(jié)論與展望結(jié)論與展望隨著有機(jī)磷農(nóng)藥的普遍使用，中毒后的快速判斷和血藥濃度測(cè)定成為了科研工作者的研究方向。