葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物的急毒、遺傳毒性及長(zhǎng)期毒性研究

背景介紹近年來，對(duì)天然活性資源的開發(fā)和利用受到越來越多的關(guān)注，葡萄、菊花和三七在我國(guó)資源豐富。研究發(fā)現(xiàn)，葡萄、菊花和三七的活性提取物具有種類繁多、功效多樣的特點(diǎn)。葡萄籽提取物中含有大量的多酚類、脂質(zhì)和礦物類物質(zhì)，具有抗衰老、抗疲勞、抗糖化、抗腫瘤、抑制動(dòng)脈硬化以及降血壓和降血脂等作用。菊花為菊科植物菊的干燥頭狀花序，其主要活性物質(zhì)包括黃酮、多糖、多酚及揮發(fā)油等，具有抗菌、消炎、清除活性氧自由基、降低血液中膽固醇和脂肪的含量、增強(qiáng)人體免疫力、延緩衰老及改善心肌營(yíng)養(yǎng)等功效。近年來藥理研究發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷不僅能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力、保護(hù)心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)，并且在降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老等方面同樣具有藥理活性。文章亮點(diǎn)1.以葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物為研究對(duì)象，依據(jù)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法（GB15193-2014）進(jìn)行急毒、遺傳毒性以及長(zhǎng)期毒性評(píng)價(jià)，為三者復(fù)配的安全應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)參考。2.經(jīng)過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可知，葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物無可見毒副作用，具有較高的食用安全性。內(nèi)容簡(jiǎn)介1

實(shí)驗(yàn)部分1.1

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)選取健康昆明小鼠20只，體重18~22g，雌雄各半。參考食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.3-2014進(jìn)行急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)。1.2

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)試驗(yàn)參照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.4-2014進(jìn)行細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)。1.3

紅細(xì)胞微核試驗(yàn)試驗(yàn)參照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB15193.5-2014進(jìn)行哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)。1.4

小鼠精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)以及食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.8-2014

進(jìn)行小鼠精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)。1.5

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d喂養(yǎng)試驗(yàn)試驗(yàn)參照趙立蕓等[24]文獻(xiàn)進(jìn)行。2

結(jié)果與討論2.1

小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)采用大劑量（15.0g/kg·BW）的葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物對(duì)小鼠經(jīng)口灌胃，檢測(cè)受試物對(duì)小鼠的急性經(jīng)口毒性。實(shí)驗(yàn)組雌雄對(duì)半，結(jié)果顯示，所有小鼠在試驗(yàn)期間狀態(tài)良好。急性毒性試驗(yàn)前后，葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物對(duì)雌雄兩組小鼠體重及死亡情況的影響列于表1。表1

葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物的小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果2.2

遺傳毒性試驗(yàn)2.2.1

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)對(duì)TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535這5種標(biāo)準(zhǔn)突變菌株進(jìn)行細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，TA97、TA98和TA100可檢測(cè)移碼突變，TA1535和TA102可檢測(cè)堿基對(duì)置換，分別從不同角度判定葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物的致基因突變性。2.2.2

紅細(xì)胞微核試驗(yàn)紅細(xì)胞微核試驗(yàn)可通過檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)殘存染色體或染色單體的細(xì)胞數(shù)量（即嗜多染紅細(xì)胞數(shù)量）來計(jì)算紅細(xì)胞微核率，從而檢測(cè)受試物的遺傳毒性。試驗(yàn)期間，各劑量組和對(duì)照組的小鼠均未觀察到不良反應(yīng)或者死亡現(xiàn)象，試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。表2

葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物對(duì)小鼠紅細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果注2.2.3

小鼠精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)小鼠精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)中，將葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物經(jīng)口連續(xù)灌胃給藥5d，并持續(xù)正常喂養(yǎng)8d后，在小鼠腹腔注射秋水仙素，抑制細(xì)胞內(nèi)微管的形成，從而將細(xì)胞阻斷在分裂中期，觀察并統(tǒng)計(jì)性染色體單價(jià)體、常染色體單價(jià)數(shù)及染色體畸變數(shù)來評(píng)價(jià)葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物對(duì)雄性生殖細(xì)胞的致突變性。2.3

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d喂養(yǎng)試驗(yàn)葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物設(shè)3個(gè)劑量組（4.0、2.0和1.0g/kg·BW）對(duì)雌、雄SD大鼠進(jìn)行28

d喂養(yǎng)試驗(yàn)，以評(píng)估葡萄籽-菊花-三七復(fù)合物的食用安全性。3

結(jié)論本研究葡萄籽提取物采用醇提方式得到，原花青素含量為95%，菊花提取物、三七提取物均采用水提方式得到。將三者