hla基因檢測(cè)修改稿課件

長(zhǎng)沙能潤(rùn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所鄧鵬HLA基因檢測(cè)1.HLA和HLA分型檢測(cè)2.HLA分型方法比較3.強(qiáng)直柱脊椎炎TableofContents1.HLA和HLA分型檢測(cè)2.HLA分型方法比較3.強(qiáng)直柱脊椎炎TableofContents什么是HLAMHC、HLA、亞型、關(guān)聯(lián)什么是HLA分型I型，II型，III型，IV型HLA分型與疾病檢測(cè)骨髓與器官移植，免疫性疾病，代謝性疾病，神經(jīng)內(nèi)科疾病，骨科疾病等根本概念

人類(lèi)白細(xì)胞抗原h(huán)umanleukocyteantigen,HLA

MHCMajorhistocompatibilitycomplex，主要組織相容性復(fù)合體〔包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、SLA、RLA、GpLA、B等〕1940年代，Snell和Gorer小鼠間的腫瘤及皮膚移植試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：決定小鼠間移植排斥與否〔即組織相容性〕的基因位于17號(hào)染色體短臂命名為組織相容性-2〔H-2〕H-2是一個(gè)由許多緊密連鎖的基因位點(diǎn)構(gòu)成的復(fù)雜系統(tǒng)1950年代Dausset經(jīng)產(chǎn)婦血清進(jìn)行個(gè)體之間抗體與白細(xì)胞凝集和細(xì)胞毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)人的MHC，命名為HLA基因位于第6號(hào)染色體短臂

1960年代，Benacerraf不同品系的豚鼠對(duì)一些抗原的免疫應(yīng)答能力比較發(fā)現(xiàn)：控制機(jī)體對(duì)不同抗原的免疫應(yīng)答能力的基因〔Ir基因〕位于MHC基因復(fù)合體內(nèi)。Benacerraf、Dausset和Snell三位科學(xué)家分別從不同角度對(duì)MHC的免疫遺傳學(xué)進(jìn)行的開(kāi)拓性研究，榮膺1980年的諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理獎(jiǎng)。HLA共分為4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，廣泛存在與各種組織細(xì)胞中；II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化T細(xì)胞中；III型分子為補(bǔ)體系統(tǒng)，包括C2和C4位點(diǎn)，存在于血清中；IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴細(xì)胞、某些細(xì)胞毒性T細(xì)胞和白細(xì)胞中。HLA分型

HLA基因系統(tǒng)的多態(tài)性及一些主要基因座位的等位基因數(shù)正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個(gè)，共2320個(gè)等位基因。

圖中所示為常見(jiàn)基因座位的等位基因數(shù)。及一些主要基因座位的等位基因數(shù)正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個(gè)，共2320個(gè)等位基因。

圖中所示為常見(jiàn)基因座位的等位基因數(shù)。HLA分型的根本檢測(cè)方法：細(xì)胞學(xué)方法測(cè)抗原特異性〔型〕血清學(xué)方法測(cè)抗原特異性〔型〕〔微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)〕分子生物學(xué)方法測(cè)等位基因PCR/SSPPCR/LuminexPCR/SBTPCR/二代測(cè)序PCR/流式細(xì)胞儀HLA抗原和等位基因命名:用血清學(xué)及細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)抗原特異性:HLA-B27,HLA-DR4〔血清學(xué)方法〕HLA-DPw2〔細(xì)胞學(xué)方法〕用分子生物學(xué)方法檢測(cè)等位基因：HLA-DRB1*0405

位點(diǎn)名主型等位基因序號(hào)HLA-B*27

07例如HLA-B27HLA-B*2701HLA-B*2702HLA-B*2703HLA-B*2704HLA-B*27051HLA-B*27052HLA-B*2706HLA-B*2707HLA-B*2708HLA-B*2709HLA-B*2710HLA-B*2711...HLA-B*2723LociConsideredtobeMatchedACBDRDQDP4MbpFather’sMother’sHLA:無(wú)血源相關(guān)10/10

同胞兄妹單倍型全相合，半相合父母親半相合

17臍血干細(xì)胞移植外周血干細(xì)胞移植骨髓干細(xì)胞移植

常見(jiàn)HLA與疾病關(guān)聯(lián)疾病HLA抗原相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)—————————————————————————強(qiáng)直性脊椎炎B2789.8Behcet綜合征B5110-15多發(fā)性硬化癥DR24.8乳糜瀉DR310.8Grave’s病DR33.7系統(tǒng)性紅斑狼瘡DR35.8類(lèi)風(fēng)關(guān)DR44.2胰島素依賴(lài)型糖尿病DR3/DR425.0重癥肌無(wú)力DR32.5小結(jié)HLA的三個(gè)特性使其成為熱點(diǎn)：決定組織相容性高度多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)1.HLA和HLA分型檢測(cè)2.HLA分型方法比較3.強(qiáng)直柱脊椎炎TableofContentsHLA基因分型

低分辨:SSPrSSOLuminexbeadforclassI&classII中等分辨HLA分型24Nextgenerationsequencing高分辨高通量HLA分型IlluminaSequencingbySynthesis(SBS)chemistryMiSeqPacificBiosciences-Single-moleculereal-timesequencing27Sequencingbasedtyping(SBT)高等分辨HLA分型Sanger測(cè)序原理Sanger測(cè)序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGA5’3’ACGTACGdNTPddNTP-DyesATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TTGATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGCTGAACACGTACGTSanger測(cè)序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGA5’3’ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGCTGAACHLA分型模板的擴(kuò)增LongPCR(each:HLA-A,-B,-C,-DR,-DQ,DP,MICA)2.Amplicons(PCR:exon+loci)LongPCRtoamplifythetargetgeneAssemblyandAlignmentProblemsinsequenceassemblyAmplicons-HLACoverageHLA-AHLA-BHLA-CHLA-DQB1HLA-DPB1HLA-DQA1HLA-DRB1HLA-DRB3HLA-DRB4HLA-DRB5HLA-DPA14.1kb2.6kb4.2kb10.3kb9.7kb7.3kb7.1kb4.1kb1.HLA和HLA分型檢測(cè)2.HLA分型方法比較3.強(qiáng)直柱脊椎炎TableofContentsAS的病因基因有關(guān)：HLA-B27的轉(zhuǎn)基因大鼠成功地培育出強(qiáng)直性脊柱炎的動(dòng)物模型。目前已發(fā)現(xiàn)包括B27在內(nèi)的3種基因與此病相關(guān)；并且有明顯家族發(fā)病傾向。免疫有關(guān)：MHC，T-Cells感染有關(guān)：相關(guān)學(xué)說(shuō)認(rèn)為，來(lái)自尿道、前列腺、精囊的抗原經(jīng)Batson循環(huán)到達(dá)骶髂關(guān)節(jié)、脊柱和眼睛等部位而發(fā)生相關(guān)病變，解釋了男性好發(fā)的原因。AS的經(jīng)典檢查體征：骶髂關(guān)節(jié)炎檢查：“4〞字試驗(yàn)、骶髂關(guān)節(jié)壓迫試驗(yàn)、髂棘推壓試驗(yàn)、骨盆擠壓試驗(yàn)附著點(diǎn)炎檢查：坐骨結(jié)節(jié)、肋軟骨、肋胸關(guān)節(jié)、恥骨聯(lián)合等壓痛脊柱和胸廓檢查：Schober試驗(yàn)、指地距、枕墻距、胸廓活動(dòng)度等骶髂關(guān)節(jié)

AS的經(jīng)典檢查B27測(cè)序的AS檢查HLA-B27陰性的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27陰性AS患者的HLA-B27陽(yáng)性率達(dá)90-95%我國(guó)漢族人群HLA-B27陽(yáng)性率2-7%（3千萬(wàn)-1億），AS患病率為0.3%（＞4百萬(wàn)），大部分HLA-B27陽(yáng)性者并不發(fā)生AS。HLA-B27與AS強(qiáng)直性脊柱炎類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎地區(qū)分布種族差異大世界性性別分布男＞女女＞男年齡20-3030-50家族史明顯不明顯類(lèi)風(fēng)濕因子（－）（

）HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標(biāo)志。連鎖不平衡學(xué)說(shuō)分子模擬學(xué)說(shuō)關(guān)節(jié)源性肽假說(shuō)其他：

T細(xì)胞受體庫(kù)假說(shuō)

超抗原假說(shuō)

B27