DB54T-青稞中恩鐮孢毒素檢測技術規(guī)范

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"標準文件_一級條標題,2,標準文件_附錄一級條標題,2,"1范圍 12規(guī)范性引用文件 13方法提要 14試劑和材料 15儀器和設備 26試樣制備與保存 27測定步驟 28回收率和精密度 3附錄A（資料性）標準品基本信息 5附錄B（資料性）參考質(zhì)譜條件 6附錄C（資料性）標準物質(zhì)多反應監(jiān)測色譜圖 7前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標準化技術委員會提出并歸口。本文件起草單位：本文件主要起草人：青稞中恩鐮孢毒素檢測技術規(guī)范范圍本文件規(guī)定了青稞中恩鐮孢毒素殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測方法的方法提要、試劑和材料、儀器和設備、試樣制備與保存、測定步驟、回收率和精密度。本文件適用于青稞中恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1殘留量的測定和確證。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法方法提要試樣中的恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1通過乙腈-水-甲酸提取，經(jīng)QuEChERS提取包凈化后，采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測，外標法定量。試劑和材料所有試劑除特殊注明外，均為分析純，水應符合GB/T6682規(guī)定的一級水要求。乙腈、甲酸、甲醇：色譜純乙腈-水-甲酸溶液：量取19.9mL水和0.1mL甲酸（5.2），加入80mL乙腈，混合均勻。甲酸-水溶液：量取99.5mL水和0.5mL甲酸（5.2），混合均勻。標準品：恩鐮孢毒素A純度≧98.0%、恩鐮孢毒素A1純度≧98.0%、恩鐮孢毒素B純度≧98.0%；恩鐮孢毒素B1純度≧98.0%)標準品也可使用經(jīng)國家認定的有證標準物質(zhì)。)。標準品信息參見附錄A)標準品也可使用經(jīng)國家認定的有證標準物質(zhì)。標準溶液配置標準儲備溶液：分別稱取一定量的恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1標準品（5.6），用乙腈溶解，配成0.5mg/mL的標準儲備液，于-18℃以下避光保存。標準工作溶液：濃度分別為：恩鐮孢毒素A1.0μg/mL，恩鐮孢毒素A11.0μg/mL，恩鐮孢毒素B1.0μg/mL，恩鐮孢毒素B11.0μg/mL，于-18℃以下避光保存，保存時間不超過6個月?；|(zhì)標準工作溶液：移取不同體積的標準工作溶液，用空白樣品提取液配成不同濃度的基質(zhì)標準工作溶液?，F(xiàn)用現(xiàn)配。QuEChERS提取包：含有無水硫酸鎂4.0g、氯化鈉1.0g、檸檬酸鈉1.0g、檸檬酸二鈉鹽0.5g。儀器和設備液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。電子天平：感量0.1mg和0.01g。粉碎機。渦旋振蕩器。氮吹儀。高速離心機：10000r/min。離心管：5mL和50mL。試樣制備與保存取青稞樣品500g，用粉碎機粉碎并通過2.0mm圓孔篩，混勻，裝入潔凈容器內(nèi)，密閉并標明標記。試樣于4℃以下保存。測定步驟提取與凈化稱取2g試樣（精確至±0.01g）于50mL離心管中，加入20mL乙腈-水-甲酸溶液（5.4），以2500r/min震蕩混勻5min。加入QuEChERS提取包（5.11），以2500r/min震蕩混勻2min，10000r/min離心5min。取2mL上清液于5mL離心管中，于45℃氮吹至干，加入1mL乙腈-水-甲酸溶液（5.5）溶解，過0.22μm微孔濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。測定條件液相色譜條件液相色譜條件如下：a)色譜柱：C18柱，柱長100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑2.6μm，或性能相當者。b)流速：0.4mL/minc)柱溫：40℃d)進樣量：2μLe)流動相：A：甲酸-水（含0.5%甲酸）；流動相B：色譜純甲醇。梯度洗脫條件見表1。梯度洗脫條件時間，min流動相A，%流動相B，%0.070300.0170305.050506.050507.0703010.07030質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：a)離子源：電噴霧離子源；b)掃描方式：正離子掃描；c)檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM）；d)其他參考質(zhì)譜條件參見附錄B。定性測定在相同試驗條件下，試樣溶液中待測物的保留時間與基質(zhì)匹配混合標準系列溶液中對應待測物的保留時間偏差應在±2.5%之內(nèi)，且試樣溶液中待測物的定性例子相對豐度與濃度接近的混合級配匹配標準系列溶液中對應待測物的定性例子的相對豐度相比較，若偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在對應的待測物。定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差單位為百分號相對離子豐度>50>20~50>10~20≦10最大允許偏差±20±25±30±50定量測定根據(jù)樣液中被測化合物含量情況，選定與樣液濃度相近的基質(zhì)標準工作溶液，樣品溶液與基質(zhì)標準工作溶液中恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1的響應值均應在儀器測定的線性范圍內(nèi)，超過線性范圍的稀釋后再進樣。對基質(zhì)標準工作溶液和樣液等體積參差進樣測定，外標法定量。在上述色譜條件和質(zhì)譜條件下，恩鐮孢毒素A、恩鐮孢毒素A1、恩鐮孢毒素B、恩鐮孢毒素B1的參考保留時間及標準品多反應監(jiān)測（MRM）色譜圖參加圖C.1、圖C.2、圖C.3和圖C.4?？瞻自囼灣环Q取試樣外，均按上述測定步驟同時開展。結果計算和表述采用外標法定量，用色譜處理器或按式（1）計算被測物的含量。計算結果應扣除空白值。Xi=Ci×式中：Xi—試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）；ci—從標準工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為微克每升（μg/L）;V—樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）;f—稀釋因子；mi—最終樣液所代表的試樣量，單位為克（g）。試樣中測定的恩鐮孢毒素乘以換算系數(shù)2.5，即得恩鐮孢毒素的含量。以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留3位有效數(shù)字。回收率和精密度回收率樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)見表3。樣品添加濃度及回收率實驗數(shù)據(jù)化合物添加濃度，μg/kg回收率，%恩鐮孢毒素A574.1-82.41078.4-81.25075.3-79.2恩鐮孢毒素A1585.1-90.31080.3-86.95078.6-80.8恩鐮孢毒素B576.1-78.61086.6-91.45087.5-89.3恩鐮孢毒素B1583.3-86.71084.9-92.15082.4-86.4精密度在重復性條件下，獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過這兩個測定值算術平均值的15%。

（資料性）

標準品基本信息標準品基本信息中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質(zhì)量恩鐮孢毒素AEnniatinA2503-13-1C36H63N3O9681.9恩鐮孢毒素A1EnniatinA14530-21-6C35H61N3O9667.8恩鐮孢毒素BEnniatinB917-13-5C33H57N3O9639.8恩鐮孢毒素B1EnniatinB119914-20-6C34H59N3O9653.8

（資料性）

參考質(zhì)譜條件氣簾氣壓力（CUR）：30psi（氮氣）。電噴霧電壓（IS）：5500V。離子源溫度（TEM）：600℃。離子源氣體1（GAS1）：55psi（氮氣）。離子源氣體2（GAS2）：60psi（氮氣）。其他質(zhì)譜參數(shù)：見表B.1。主要參考質(zhì)譜參數(shù)化合物母離子m/z子離子m/z駐留時間minDPCXPCE/eV恩鐮孢毒素A682.60210.3*101001040228.3101001040恩鐮孢毒素A1668.60210.4*10841038228.110841038恩鐮孢毒素B640.60196.1*10901038214.010901038恩鐮孢毒素B1654.50196.1*10881040210.310881040注：表中帶*的離子為定量離子。對于不同的質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。

（資料性）

標準物質(zhì)多反應監(jiān)測色譜圖恩鐮孢毒素A的多反應監(jiān)測（MRM）色譜圖見C.1。恩鐮孢毒素A的多反應監(jiān)測（MRM）色譜圖（5