生物制品宿主DNA去除方案-問題解答

北京義翹神州·在線講座一一《生物制品宿主DNA去除方案》答疑環(huán)節(jié)匯總非常感謝大家對北京義翹神州在線講座的大力支持，本次講座已圓滿結(jié)束，我們對直播過程中答疑環(huán)節(jié)大家的問題以及老師的解答進(jìn)行整理如下。如果有需要補(bǔ)充的，有任何建議或想聽到其他更多相關(guān)主題的講座，歡迎來信和我們交流，我們會根據(jù)您的寶貴意見不斷完善，以后給大家?guī)砀喔实脑诰€講座！問題1：請問最好的加入核酸酶的時間是細(xì)胞裂解前就加入嗎？答：建議將核酸酶加入細(xì)胞裂解液中。問題2：核酸酶帶標(biāo)簽嗎？如何去除核酸酶？答：核酸酶不帶標(biāo)簽。去除核酸酶通?？梢越Y(jié)合產(chǎn)品自身工藝，如離子交換層析、親和層析、超濾等。問題3：超級核酸酶和benzonase本質(zhì)是—樣的嗎？答：超級核酸酶和benzonase本質(zhì)是—樣的。Benzonase是merck的商品名稱。問題4:老師，您好，關(guān)千293細(xì)胞的核酸殘留標(biāo)準(zhǔn)，也跟藥典—樣么？答：293細(xì)胞的核酸酶殘留標(biāo)準(zhǔn)藥典也有明確的指導(dǎo)，其中病毒包裝類產(chǎn)品宿主DNA殘留不得超過lOng/劑量。問題5：核酸酶去除Vero細(xì)胞DNA的效率大概多少？答：核酸酶可以高效水解樣本中的核酸，小片段DNA等核酸酶可以在后期的純化中隨其他雜質(zhì)去除。效率可根據(jù)酶活的定義和樣本中核酸的濃度推算。問題6：貴公司核酸酶制備方法？答：E.coli重組表達(dá)。問題7:培養(yǎng)基原液中直接添加核酸酶，是否需要補(bǔ)加鎂離子？答：如果培養(yǎng)基中沒有Mg離子，需要補(bǔ)加Mg離子的濃度至2mM,如果不清楚培養(yǎng)基中是否含有Mg離子，亦可直接添加Mg離子的濃度至2mM。問題8：核酸酶的應(yīng)用有專利限制嗎？答：無專利限制。問題9:你們的核酸酶宿主蛋白殘留合格嗎？答：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含有宿主蛋白殘留，宿主蛋白殘留合格。問題10：對千不能通過層析來去除的核酸酶殘留的時候，有沒有推薦的去除方法，謝謝答：可以通過超濾的方式去除。問題11：我們做慢病毒，慢病毒里面有很高的RNA,這個要不要關(guān)注？核酸酶去除要改條件么？答：外源性核酸都有安全風(fēng)險(xiǎn)，需要關(guān)注。核酸酶的使用條件需要再摸索，我們也會盡快給出相應(yīng)的使用推薦條件。問題12：使用核酸酶能滿足相關(guān)藥物申報(bào)規(guī)范？有應(yīng)用千臨床的案例嗎？答：使用核酸酶可以滿足藥物申報(bào)的規(guī)范。已有成功案例。問題13:蛋白生產(chǎn)完之后再加入超極核酸酶消化可以嗎？答：通常建議在工藝上游加入核酸酶去除步驟，有兩個方面的考慮：—是核酸酶消化宿主DNA后，下游工藝可以較好的去除小片段核酸，不用額外補(bǔ)充去除步驟；二是核酸酶本身的殘留也有要求，工藝上游加入，可以隨著產(chǎn)品本身的純化工藝而去除。問題14:酶反應(yīng)溫度能在4度下嗎，效果如何？答：可以在4°C下作用，作用時間需要調(diào)整。問題15:料液經(jīng)核酸酶處理后的核酸殘留使用什么方法檢測比較好？答：qPCR方法的靈敏度、重復(fù)性較好，推薦qPCR方法。且qPCR可以定量，可以更清楚的掌握中間樣中核酸殘留水平的變化。問題16:請問細(xì)胞超聲裂解中氯化鈉高鹽濃度怎么處理？答：如果樣品不適于低鹽，可以提高核酸酶的使用濃度。問題17:請問，你們的核酸酶能耐住高鹽環(huán)境，比如1M鹽濃度？答：我們的研究數(shù)據(jù)顯示：0.2MNa鹽條件下，酶活在50％左右。如果樣本耐受低鹽，建議更換至低鹽條件水解核酸。問題18:你們的核酸酶用千終端產(chǎn)品效果怎么樣？答：都可以達(dá)到客戶的使用要求。問題19：對千核酸被酶包裹結(jié)合上，酶還能切到核酸以及去除嗎？答：如果核酸完全包裹在蛋白內(nèi)部，核酸酶很難水解此種核酸。核酸酶在尿素條件下仍有活性，如果樣品允許，可以嘗試低濃度尿素處理。問題20：你們說明書上功能檢測裂解大腸桿菌那塊能詳細(xì)說說嘛？答：說明書比較詳細(xì)，可以加QQ或微信溝通細(xì)節(jié)。問題21：如果殘留核酸超量，超級核酸酶能清除嗎？可以多次酶切嗎？答：可以用核酸酶將宿主核酸水解，核酸的去除效率將大大提高，達(dá)到殘留的標(biāo)準(zhǔn)?？梢远啻蚊盖校扑]在工藝上游—次加入核酸酶充分處理。問題22：按個人過往經(jīng)驗(yàn)，核酸酶對千質(zhì)粒和宿主核酸的酶切去除表現(xiàn)是不—樣的（質(zhì)?？梢酝耆磺谐?lt;lOObp,宿主核酸會有大片段無法被切除），請問老師是否有用宿主核酸作為樣品進(jìn)行酶切效率驗(yàn)證的數(shù)據(jù)和案例呢？答：有案例，核酸酶的試用濃度推薦10-100unit/ml,具體用量需要看具體樣本的情況。問題23:殘留核酸酶如何檢測？答：目前主流方法是ELISA試劑盒為基礎(chǔ)的免疫學(xué)檢測，義翹神州有商品化產(chǎn)品，貨號為KIT-SSNPOl。問題24:酶切后DNA檢測結(jié)果較低，層析后出現(xiàn)DNA增加情況，可能原因？答：是否可能是層析有富集DNA的原因。問題25:這個酶與DNASEI和RNASEI比活高很多倍？答：水解宿主殘留核酸方面，超級核酸酶的效率會高很多。問題26：核酸酶處理后核酸殘留檢測這塊，核酸酶會影響其核酸殘留測定嗎？答：不會影響。問題27:請問如何把核酸與宿主蛋白包裹分開用核酸酶消化呢？答：可以嘗試更改buffer條件：pH、表面活性劑等，或者增加低濃度變性劑。北京義翹神州科技股份有限公司(SinoBiologicalInc.)重點(diǎn)從事重組蛋白、抗體、基因、ELISA試劑盒、培養(yǎng)基等產(chǎn)品，以及重組蛋白、抗體的開發(fā)和生物分析檢測等服務(wù)。同時，義翹神州也致力于提供真正“一站式”技術(shù)服務(wù)推進(jìn)客戶研發(fā)進(jìn)程，如重組蛋白生產(chǎn)及純化服務(wù)、抗體研發(fā)及生產(chǎn)技術(shù)服務(wù)、分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)、免