藥品微生物實驗室管理

關于藥品微生物實驗室管理微生物類別類別細菌真菌霉菌及酵母菌病毒原生動物藻類第2頁,共27頁，星期六，2024年，5月

特點：體積小、結構簡單、分布廣、種類(10~20萬種)、繁殖快、易變異。特點體積小結構簡單分布廣種類多繁殖快易變異△微生物概述第3頁,共27頁，星期六，2024年，5月芽孢：微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)水分PH值溫度空氣碳源氮源微量元素營養(yǎng)物質(zhì)蛋白質(zhì)受熱不易變性

（耐熱）含水量少細菌的休眠體芽孢（孢子）第4頁,共27頁，星期六，2024年，5月△藥品中微生物的主要污染途徑1.水系統(tǒng)（飲用水、純化水、注射用水、純蒸汽）：過濾凈化后檢測微生物、細菌內(nèi)毒素。2.原輔料：植物性、動物性（風險最大）；2020版藥典中藥飲片增加耐熱菌、沙門菌。3.包裝材料：安瓿、PVC、PTP、塑料瓶。檢測微生物4.第5頁,共27頁，星期六，2024年，5月△藥品中微生物的主要污染途徑4.生產(chǎn)人員（最不可控因素）：咳嗽、噴嚏、動作幅度大、皮膚掉屑；測手指、潔凈服。5.氣體：壓縮空氣、惰性氣體；控制微生物或無菌。6.生產(chǎn)環(huán)境：潔凈區(qū)密封、空氣過濾、定期消毒；測沉降菌、浮游菌、懸浮粒子（A、B、C、D級）。驗證和日常監(jiān)測7.設備及配件：清潔、消毒、滅菌；清潔驗證第6頁,共27頁，星期六，2024年，5月△影響藥品微生物檢驗結果的因素1.樣品中的微生物可能分布不均勻。2.微生物檢驗方法誤差大。3.檢驗方法未經(jīng)過驗證。4.

實驗室因素：人員、培養(yǎng)基、試劑、菌種、環(huán)境、設備、樣品。第7頁,共27頁，星期六，2024年，5月△人員要求1.操作人員具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景。2.培訓：職責培訓、崗位操作規(guī)程的培訓、設備操作培訓、檢驗技術的培訓（包括無菌操作、培養(yǎng)基制備、消毒、滅菌、注平板、菌落計數(shù)、菌種傳代、菌種保藏、微生物檢查方法、微生物鑒定基本技術）。3.實驗室安全方面的培訓（保證自身安全、防止實驗室被污染）。4.對微生物管理人員的培訓：實驗室安全、實驗室結果的評估、數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查。第8頁,共27頁，星期六，2024年，5月△培養(yǎng)基管理※培養(yǎng)基影響微生物試驗結果的因素1.供應商：穩(wěn)定、資質(zhì)合格、業(yè)內(nèi)口碑好、供貨能力強。2.培養(yǎng)基的接收2.1查看培養(yǎng)基名稱、批號、廠家、生產(chǎn)日期、有效期、執(zhí)行標準是否符合要求。2.2在每瓶培養(yǎng)基瓶上貼標簽、編號（唯一的標識）、批號、接收日期、接收人、開瓶日期、開瓶后的有效期。2.3培養(yǎng)基接收記錄。3.培養(yǎng)基的儲存

按照供應商提供的方法保存，多數(shù)是避光，個別廠家要求陰涼干燥（低于20℃）。第9頁,共27頁，星期六，2024年，5月△培養(yǎng)基管理4.培養(yǎng)基的適用性檢查（藥典要求）4.1如果培養(yǎng)基的配制和滅菌程序經(jīng)過驗證，那么同一批脫水培養(yǎng)基適用性檢查可只做1次。4.2如果培養(yǎng)基的配制和滅菌程序未經(jīng)過驗證，那么每一批滅菌培養(yǎng)基均要進行適用性檢查。

※培養(yǎng)基的配制和滅菌方法的驗證（存儲期）包括：滅菌前后PH值、外觀性狀；滅菌后的無菌性檢查、靈敏度檢查；保存幾周后的無菌、靈敏度檢查。

第10頁,共27頁，星期六，2024年，5月△培養(yǎng)基管理4.3適用性檢查※購買對照培養(yǎng)基※購買菌種枯草、白念、黑曲霉接種于計數(shù)用培養(yǎng)基金葡、銅綠、枯草、生孢、白念、黑曲霉接種于無菌檢查用培養(yǎng)基※依據(jù)藥典附錄1105試驗操作后判斷是否合格。以下是三種培養(yǎng)基適用性檢查要求（計數(shù)用培養(yǎng)基、無菌檢查用培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基）第11頁,共27頁，星期六，2024年，5月計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查要求計數(shù)用培養(yǎng)基非選擇性固體培養(yǎng)基非選擇性液體培養(yǎng)基a被檢培養(yǎng)基菌落數(shù)，對照培養(yǎng)基菌落數(shù)，在0.5~2之間b菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致c倒5塊平板，培養(yǎng)溫度與實際操作一致培養(yǎng)最長時間應無菌生長a被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較試驗菌應生長良好b取最小包裝的2瓶放在實際運用中的溫度培養(yǎng)最長時間第12頁,共27頁，星期六，2024年，5月無菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查要求無菌檢查用培養(yǎng)基無菌性檢查靈敏度檢查每批取不少于5瓶培養(yǎng)，應無菌生長空白對照管無菌生長加菌的培養(yǎng)基管生長良好第13頁,共27頁，星期六，2024年，5月選擇性培養(yǎng)基適用性檢查要求選擇性培養(yǎng)基（控制菌檢查用）促生長能力測試抑制生長能力測試指示特性固體：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)一致接種的試驗菌不得生長被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應與對照培養(yǎng)基一致液體：規(guī)定的溫度、最短的培養(yǎng)時間、與對照培養(yǎng)基管比較、被檢管試驗菌生長良好第14頁,共27頁，星期六，2024年，5月用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基管理①市售：雙層包裝和終端滅菌②如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，在使用前進行100﹪的預培養(yǎng)，防止出現(xiàn)假陽性。

沉降菌碟暴露時間的驗證

△選擇在換氣次數(shù)大的需要監(jiān)控的操作間，培養(yǎng)基加菌暴露若干小時,培養(yǎng)后計算菌的回收率大于70﹪。

△暴露多長時間不干裂、促生長能力良好）。①包裝形式：試管、三角瓶（密封）②貯存房間的條件③取樣計劃：取樣時間點、測試項目（PH值、無菌、適用性）※加菌液0.1ml，不能加1ml。第15頁,共27頁，星期六，2024年，5月△菌種的管理

菌種的來源CMCC中國復活標準貯備菌株（0代）解凍轉種工作菌株

（低溫冷凍干燥）（不得重新冷凍）TACC美國1代：是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)?！ぷ骶瓴豢商娲鷺藴示甑?6頁,共27頁，星期六，2024年，5月△菌種的管理涉及菌種管理的記錄標準菌種的申購記錄。從標準菌株到工作菌株的操作SOP及記錄。菌種的傳代記錄。菌種的檢查記錄（確認記錄）。菌種的滅活、銷毀記錄。第17頁,共27頁，星期六，2024年，5月△菌種的管理菌種的接收1.檢查外觀是否完好。2.核對菌種名稱、編號。3.核對接收時是否在合適的環(huán)境中。4.核對菌種是否在有效期范圍內(nèi)。5.給每株菌一個獨立的編號，不能重復。第18頁,共27頁，星期六，2024年，5月△菌種的管理菌種的保存1.標準菌株：超低溫冷凍（低于-30℃）有效期一年；（-70℃以下冷凍保藏）有效期三年。2.斜面菌種：2~8℃冷藏，有效期3~6個月。3.菌液：室溫下，2小時內(nèi)使用。2~8℃，24小時內(nèi)使用（黑曲霉孢子懸液2~8℃，貯存期要驗證）第19頁,共27頁，星期六，2024年，5月△菌種的管理菌種的使用------斜面菌種只允許一次使用菌種的傳代1.將微生物轉接到新的培養(yǎng)基，進行培養(yǎng)獲得新鮮菌種的過程。2.購買的標準菌株必須經(jīng)過傳代后使用（在5代以內(nèi)）。第20頁,共27頁，星期六，2024年，5月環(huán)境的管理硬件：陽性菌實驗室、培養(yǎng)室、貯藏室（區(qū)）、試驗結果觀察區(qū)、培養(yǎng)基及實驗用具準備區(qū)、滅菌區(qū)、樣品接收區(qū)、標準菌株貯藏室（區(qū)）、污染物處理區(qū)?！陨蠀^(qū)域要有標識（降低交叉污染）?！?/p>

無菌檢查：B級背景下的A級單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)。

※

微生物限度檢查：不低于D級背景下的B級單向流空氣區(qū)域。第21頁,共27頁，星期六，2024年，5月△環(huán)境監(jiān)測1.空調(diào)驗證：高效過濾器完整性、氣流組織、空氣流速（平均風速）、換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對濕度（測試應在模擬正常檢測條件下進行）

※

依據(jù)藥典附錄9205藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導原則2.日常監(jiān)測：※異常情況要進行分析，不僅僅是數(shù)數(shù)而已。區(qū)域周期粒子沉降菌浮游菌表面微生物（含手套）無菌隔離系統(tǒng)每次實驗三月每次三月每次A級每次實驗三月每次每月每次（潔凈服）B級每周一次半年每周三月每周（潔凈服）C級每季一次半年三月半年三月D級每半年一次半年半年半年半年監(jiān)測項目第22頁,共27頁，星期六，2024年，5月△潔凈區(qū)滅菌和消毒※A/B級潔凈區(qū)使用無菌的或經(jīng)無菌處理的消毒劑或清潔劑?！瘜W消毒劑應驗證消毒效果（不止一種）?！鍧崉?、消毒劑在規(guī)定的效期內(nèi)使用?！Ｓ脺缇ǜ蔁釡缇ǎ夯鹧娣ǎň凭珶簦⒑嫦?50℃1h。

濕熱滅菌法：121℃30min。第23頁,共27頁，星期六，2024年，5月△設備設施管理1.設備的確認、檢定（校準）每年一次，注意連續(xù)性。2.設備使用日志（使用即填）3.設備定期清潔和消毒（水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱、生物安全柜）。4.無菌器具要有明確的標識（已滅菌、未滅菌）。5.溫度計的校準。（注意量程、精度）6.天平、標準砝碼的校準；移液管的校準。7.懸浮粒子計數(shù)器、浮游菌采集器的校準。8.紫外燈消毒效果的定期檢測。第24頁,共27頁，星期六，2024年，5月△操作方法注意1.操作SOP中明確的檢驗方法要經(jīng)過方法學驗證，而且和驗證方案報告、省藥檢所的方法學復核意見中的描述一致2.操作方法應避免損傷供試品中污染的微生物。3.對抑菌性較強的供試品，盡可能選用薄膜過濾法。第