2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

復(fù)習(xí)回顧練習(xí)．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是（

）A．大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)表現(xiàn)為單層貼壁生長B．進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或封閉的培養(yǎng)瓶放置在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)C．培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞時(shí)，為防止接觸抑制現(xiàn)象，需進(jìn)行分瓶培養(yǎng)過程D．傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞都需要用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，再用離心法收集后分瓶培養(yǎng)松蓋一種癌細(xì)胞懸浮生長類不用練習(xí)：如圖為iPS細(xì)胞的獲得及用其培育不同種細(xì)胞的示意圖（c-Myc、Klf4、Sox2和Oct3/4等基因與細(xì)胞的脫分化有關(guān)）?；卮鹣铝袉栴}：(2)在培養(yǎng)iPS細(xì)胞的過程中，需要為培養(yǎng)細(xì)胞提供無菌、無毒的環(huán)境，為達(dá)到此目的對培養(yǎng)液采取的具體操作有

（答兩點(diǎn)）。②類似于植物組織培養(yǎng)中的

過程。(3)過程③④為iPS細(xì)胞提供的條件不同，分化得到的細(xì)胞不同，本質(zhì)上是

的結(jié)果。(4)iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景優(yōu)于胚胎干細(xì)胞的原因

。（1）對成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，常用胰蛋白酶處理使之分散成單個(gè)細(xì)胞，這說明細(xì)胞間的物質(zhì)為

，

（填“能”或“不能”）用胃蛋白酶處理成纖維細(xì)胞，原因是

。脫分化pH為7.2~7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中變性失活

滅菌、無菌操作、定期更換培養(yǎng)液和加一定量的抗生素多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜基因選擇性表達(dá)無須破壞胚胎，避免免疫排斥反應(yīng)

新冠疫情迅速擴(kuò)張初期，利用康復(fù)者恢復(fù)期血漿治療重癥和危重癥患者是一個(gè)非常有效的一個(gè)重要手段，但這種療法難以大規(guī)模應(yīng)用。不同漿細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞）血清抗體：產(chǎn)量低、純度低，特異性差p49篩選單個(gè)漿細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞）只產(chǎn)生一種特異性抗體細(xì)胞群大量增殖量產(chǎn)哪種細(xì)胞是可以無限增殖？癌細(xì)胞有什么方法能使細(xì)胞同時(shí)具備：產(chǎn)生抗體+無限增殖能力？動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體1.概念：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，就是使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的雜交細(xì)胞具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。2.原理：細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)成功標(biāo)志？細(xì)胞核的融合3.誘導(dǎo)方法：物理法：化學(xué)法：生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法電融合法PEG融合法與植物原生質(zhì)體融合的方法相同——?jiǎng)游锛?xì)胞融合特有

P49旁欄：19世紀(jì)30年代，科學(xué)家曾在患肺結(jié)核、天花和麻疹等疾病的病人病理組織中觀察到多核細(xì)胞。如何解釋這一現(xiàn)象？

病人體內(nèi)的病毒等誘導(dǎo)多個(gè)體細(xì)胞融合形成了多核細(xì)胞。原理?病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚→細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布→細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活：用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)課本p51一、1植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合成功的標(biāo)志主要用途意義細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性用果膠酶和纖維素酶去除細(xì)胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞電融合法、離心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法再生出細(xì)胞壁細(xì)胞核的融合獲得完整的雜種植株主要用于制造單克隆抗體打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較二、單克隆抗體米爾斯坦和柯勒發(fā)明，并獲得了諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。一個(gè)B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞單一的使細(xì)胞同時(shí)具備：產(chǎn)生抗體+無限增殖能力。復(fù)制閱讀課本P49-50，了解單克隆抗體的制備過程1.如何獲得能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞？2.細(xì)胞之間一定會(huì)發(fā)生融合嗎？如果發(fā)生融合（僅考慮2個(gè)細(xì)胞之間），有多少種情況？

得到的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生特定抗體嗎？3.整個(gè)過程至少進(jìn)行幾次篩選？篩選的目的分別是什么？能想到篩選的思路嗎？4.如何獲得單克隆抗體？二、單克隆抗體注射特定的抗原

B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合動(dòng)物細(xì)胞融合一段時(shí)間后從脾中提取多種小鼠曾接受多種抗原刺激1.未融合的親本細(xì)胞2.融合的細(xì)胞①雜交瘤細(xì)胞②B-B細(xì)胞③瘤-瘤細(xì)胞多種（一）單克隆抗體的制備過程篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞具有同種核的細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的能產(chǎn)生所需抗體的特定雜交瘤細(xì)胞

第一輪篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基第二輪篩選：克隆化培養(yǎng)、抗體檢測①注射到小鼠腹腔內(nèi)②體外培養(yǎng)獲取單克隆抗體從小鼠腹水中從細(xì)胞培養(yǎng)液中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（一）單克隆抗體的制備過程1.未融合的親本細(xì)胞2.融合的細(xì)胞①特定的雜交瘤細(xì)胞②B-B細(xì)胞③瘤-瘤細(xì)胞能準(zhǔn)確識別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合；可以大量制備。p50背第二課時(shí)完成p51一、11.下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述，錯(cuò)誤的是（

）

A.它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動(dòng)性

B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)融合

C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細(xì)胞

D.前者主要為了獲得細(xì)胞產(chǎn)品，后者主要為了獲得雜種植株C（1）第一次篩選的目的__________________________（2）如何篩選____________________________（3）篩選原理____________________________________________________________________________________篩選獲得雜交瘤細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選在選擇培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長復(fù)習(xí)：單克隆抗體的制備過程立即提取B細(xì)胞？特點(diǎn)？（5）第二次篩選的目的________________________________________________________（6）如何篩選____________________________________________________________________________________（7）選擇抗體檢測呈___性的雜交瘤細(xì)胞（8）抗體檢測原理__________________________________獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞用96孔板培養(yǎng)，在每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測（進(jìn)行多次篩選）陽抗原和抗體能特異性結(jié)合(分子水平的鑒定）（9）如何獲取大量所需雜交瘤細(xì)胞________________________________________________________（10）如何獲取單克隆抗體①體外培養(yǎng)____________________________②小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)____________________________（11）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)______________________________________________________________在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)（接種于培養(yǎng)液中）或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲取從小鼠腹水中獲取能準(zhǔn)確地識別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備（背）【拓展】第一代鼠源抗體（利用小鼠雜交瘤細(xì)胞生成的抗體）能夠被人體免疫系統(tǒng)識別，引起人抗鼠抗體反應(yīng)，使得單抗藥物療效減弱，并且引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)，因此第一代單抗藥物的臨床應(yīng)用受到極大的限制。（二）單克隆抗體的應(yīng)用（二）單克隆抗體的應(yīng)用1、診斷試劑2、運(yùn)載藥物1、用作診斷試劑原理：抗原與抗體能特異性結(jié)合優(yōu)勢：特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備（標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)）新冠病毒抗原檢測試劑盒（二）單克隆抗體的應(yīng)用診斷疾病、鑒別病原體女性懷孕后會(huì)分泌一種糖蛋白,-人絨毛膜促性腺激素(HCG)，尿液中會(huì)檢出HCG的存在。用抗HCG單克隆抗體制備的試紙可以測試女性是否懷孕。(抗原-抗體雜交法)腫瘤、心血管畸形的定位診斷同位素標(biāo)記的單克隆抗體熒光標(biāo)記的單克隆抗體成像在特定組織2、用于運(yùn)載藥物（二）單克隆抗體的應(yīng)用抗體：靶向運(yùn)輸作用藥物：殺傷靶細(xì)胞（治療效應(yīng)）討論1抗體和藥物各具有什么作用？單克隆抗體+藥物=“生物導(dǎo)彈”討論3：ADC在臨床上有哪些優(yōu)勢？協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識別的作用+細(xì)胞毒素的殺傷作用→靶點(diǎn)清楚、毒副作用小主要用于癌癥治療討論2除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可作為ADC偶聯(lián)的藥物？①用放射性同位素標(biāo)記的單克隆抗體進(jìn)行靶向放療②用作用于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物，阻斷腫瘤細(xì)胞的信號通路來抑制其生長。結(jié)合同位素的單抗利用單抗將放射性核素導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞,對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行特異性的殺滅作用,同時(shí)最大限度地降低放射性核素對機(jī)體的損傷作用,從而大大增強(qiáng)了殺傷腫瘤細(xì)胞的效率3、用于治療疾病（二）單克隆抗體的應(yīng)用課后習(xí)題2.科學(xué)家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養(yǎng)單個(gè)B淋巴細(xì)胞可以獲得針對SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合,經(jīng)誘導(dǎo)后融合的細(xì)胞即為雜交瘤細(xì)胞D.將純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，從小鼠血清中分離出的抗體為單克隆抗體A補(bǔ)充練習(xí)：新冠病毒可以采用試紙進(jìn)行抗原檢測。抗原檢測一般采用雙抗體夾心法，其原理如圖所示。結(jié)合墊處含有足量的、可移動(dòng)的、與膠體金（顯紅色）結(jié)合的抗體1（能識別待測抗原某一部位），T處固定有抗體2（能識別待測抗原另一部位），C處固定有抗體3（抗-抗體1），能與抗體1結(jié)合。當(dāng)抗體2或抗體3與對應(yīng)的物質(zhì)結(jié)合后，能將其截留。若待測樣本中含新冠病毒，則顯色結(jié)果為T線和C線處均顯紅色，判斷為陽性。思考：顯色結(jié)果為

，判斷為陰性？只有C線處顯紅色評小本P171D、P194C晚練6A、8、9B、10（3）、11（3）補(bǔ)充：根據(jù)資料設(shè)計(jì)一種實(shí)驗(yàn)方案，篩選雜交瘤細(xì)胞資料：①體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞在增殖過程中需進(jìn)行DNA的復(fù)制。B淋巴細(xì)胞的DNA合成有兩條途徑：D途徑和S途徑，其中D途徑可被氨基喋呤（A）阻斷。D途徑可以在普通培養(yǎng)液中進(jìn)行。S途徑需在普通培養(yǎng)液中加入次黃嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）兩種成分才能進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)所用的骨髓瘤細(xì)胞缺少S途徑所需的酶，只能通過D途徑合成DNA②無增殖能力的細(xì)胞在培養(yǎng)液中僅存活5-7天B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞DNADNADNAD途徑、S途徑D途徑D途徑、S途徑無增殖能力無限增殖無限增殖補(bǔ)充：根據(jù)資料設(shè)計(jì)一種實(shí)驗(yàn)方案，篩選出雜交瘤細(xì)胞BBB瘤瘤瘤雜交瘤細(xì)胞如何在含有多種細(xì)胞的培養(yǎng)液中篩選出雜交瘤細(xì)胞？B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞DNADNADNAD途徑、S途徑D途徑D途徑、S途徑無增殖能力無限增殖無限增殖在培養(yǎng)液中加入氨基喋呤（A）、次黃嘌呤（H）、胸腺嘧啶核苷（T）培養(yǎng)基（HAT）選擇132資料5：將雜交瘤細(xì)胞懸液稀釋后滴入多孔板