艾滋病實驗室檢測技術及職業(yè)暴露

關于艾滋病實驗室檢測技術及職業(yè)暴露2我省艾滋病檢測實驗室建設情況

目前我省艾滋病檢測實驗室已達630個

1個艾滋病確證中心實驗室（省疾控中心）

6個艾滋病確證實驗室（濟南、青島、淄博、煙臺、臨沂疾控中心、山東出入境檢驗檢疫局國際旅行衛(wèi)生保健中心）

18個艾滋病篩查中心實驗室（含5個艾滋病確證實驗室）

610個艾滋病篩查實驗室。

目前已驗收16個待驗收艾滋病篩查實驗室2個、確證實驗室1個第2頁,共87頁，星期六，2024年，5月3我省艾滋病確證實驗室建設情況1995年2月6日，山東省衛(wèi)生防疫站艾滋病確證實驗室通過衛(wèi)生部驗收。2005年2月18日，青島市疾控中心艾滋病確證實驗室通過驗收。2009年4月8日濟南、淄博、煙臺市疾控中心艾滋病確證實驗室通過驗收。2013年4月1日臨沂疾控中心艾滋病確證實驗室通過驗收。第3頁,共87頁，星期六，2024年，5月4我省艾滋病檢測實驗室

檢測能力省疾控中心：艾滋病抗體的篩查、確證；CD4淋巴細胞；病毒載量；耐藥；新發(fā)感染；嬰幼兒早期診斷、HBV、HCV、TP?？贵w確證：濟南、青島、淄博、煙臺、臨沂市CDC（待建濰坊市CDC）。CD4淋巴細胞：濟南、青島、煙臺、菏澤、泰安、濟寧、臨沂、濰坊市CDC艾滋病抗體篩查：610個實驗室。第4頁,共87頁，星期六，2024年，5月5省CDC實驗室檢測能力2013年8月2～3日順利通過資質認定、食品檢驗機構資質認定、實驗室認可“三合一”現(xiàn)場評審.實驗室認可項目：27類1313項實驗室資質認定（計量認證）項目：22類740項食品檢驗機構資質認定項目：5類573項艾防所通過項目：艾滋病抗體篩查、確證

CD4T淋巴細胞檢測病毒載量乙肝、丙肝確證第5頁,共87頁，星期六，2024年，5月6歷年篩查實驗室考核情況第6頁,共87頁，星期六，2024年，5月7目標1：確證實驗室目前全部建在疾控系統(tǒng)目標：2015年底，17市疾控全部建立，鼓勵醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)建立艾滋病確證實驗室。《山東省衛(wèi)生廳關于進一步加強全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）第7頁,共87頁，星期六，2024年，5月8目標2：艾滋病篩查實驗室目標：2013年底，皮膚病性病防治機構、婦幼保健機構、采供血機構（單采漿站）及各類二級以上（含二級）醫(yī)療機構要建立艾滋病篩查實驗室。《山東省衛(wèi)生廳關于進一步加強全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）第8頁,共87頁，星期六，2024年，5月9目標3：艾滋病檢測點1、目前全省尚未建立2、目標：2015年底，所有的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務中心和一級醫(yī)療機構都建立艾滋病檢測點，鼓勵具備條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務中心和一級醫(yī)療機構建立艾滋病篩查實驗室。《山東省衛(wèi)生廳關于進一步加強全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）第9頁,共87頁，星期六，2024年，5月10目標4：擴大檢測1、腎透析人群2、醫(yī)院侵入性診療人群3、計劃生育門診就診人群4、單位體檢人群5、無償獻血人群

——五類人群全部進行丙肝檢測《山東省衛(wèi)生廳關于印發(fā)山東省艾滋病擴大檢測工作活動方案的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]29號（2013年5月9日下發(fā)）第10頁,共87頁，星期六，2024年，5月11二、艾滋病實驗室檢測技術（一）HIV(ELISA、金標、PA、化學發(fā)光、WB)（二）TP(ELISA、TPPA、TRUST)（三）HCV(ELISA、RIBA)（四）BED（ELISA、親和力)第11頁,共87頁，星期六，2024年，5月12

2009

2006艾滋病檢測工作有關的技術規(guī)范和指南20062008201120112008

2004第12頁,共87頁，星期六，2024年，5月13ELISA

第13頁,共87頁，星期六，2024年，5月14OD值S/CO值雙波長的優(yōu)點CUTOFF值OD是opticaldensity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度。S/CO=OD/CUTOFF使用雙波長的優(yōu)點可以消除反應板條上的劃痕手印的干擾。仔細閱讀和理解說明書,嚴格按照說明書要求操作第14頁,共87頁，星期六，2024年，5月15常見問題原因分析及解決辦法(1)試劑1.觀察外包裝，內主份有無漏液，注意效期等。2.仔細閱讀說明書，嚴格按照試劑說明書進行操作。3.操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘，保證酶等液體的初始反應溫度及活性劑的溶解。第15頁,共87頁，星期六，2024年，5月16(2)加樣過程應注意的問題1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣。

2.漏加樣品或加樣量不足的

3.加液器的校正

4.加樣時間過長

5.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長

6.洗板機不足，不能及時洗板第16頁,共87頁，星期六，2024年，5月17(3)孵育過程中出現(xiàn)的問題1.溫箱孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；2.孵育時間人為延長，導致非特異性結合，難以清洗徹底。3.孵育時溫度不符合說明書的規(guī)定范圍。1.按規(guī)定加蓋封板膜。2.按說明步驟嚴格控制孵育時間。3.嚴格控制溫育儀器（水箱、溫箱、全自動酶免）的溫度，建議在儀器內放置測量工具（全自動酶免除外）。（解決辦法）第17頁,共87頁，星期六，2024年，5月18(4)洗板過程中易出現(xiàn)的問題1.采用手工洗板,孔與孔之間液體容易交叉，切不可隨意洗板。2.采用洗板機洗板時，洗液注入孔中量不足，導致洗板不徹底，造成本底高。3.由于血液中纖維原蛋白，造成洗板針堵塞，抽吸不完全，造成洗板不暢，導致洗板效果差，直接影響本底。4.反應板過多，不能保證及時洗板，造成洗板等待時間過長，影響結果。5.洗板前先將孔內液體甩出包被板。解決辦法1.禁止手工洗板。2.保證洗液注滿各孔。3.洗板時注意觀察是否有堵孔現(xiàn)象，保持洗板針暢通。4.合理安排操作（洗板）時間。5.洗板前不要先將孔內液體甩出包被板，以免酶液沾于孔邊緣。第18頁,共87頁，星期六，2024年，5月19(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題1.顯色劑配制后放置時間過長或使用已經(jīng)變色失效的顯色劑2.用排槍加A、B混合液時，加樣槽不夠干凈，造成花板3.不同廠家試劑的顯色液混用第19頁,共87頁，星期六，2024年，5月20(6)終止和讀數(shù)時的注意事項1．加完終止后30分鐘內讀取數(shù)據(jù)。2．讀板時板底如果不清潔，就會導致所讀的數(shù)據(jù)不準確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標板的底部是清潔的。第20頁,共87頁，星期六，2024年，5月21酶聯(lián)免疫吸附試驗優(yōu)缺點優(yōu)點1、價格低2、一般實驗室均可操作3、不需特殊儀器設備4、適用于大面積查體缺點1、易出假陽性2、不適用于單個樣本測定第21頁,共87頁，星期六，2024年，5月22快速檢測法優(yōu)先使用項目包括: VCT、母嬰傳播、臨床評估、農村血檢、術前檢測、緊急事件等。技術角度的考慮包括:

需要快速得到結果、免去試劑和樣本的冷鏈運輸環(huán)節(jié)、小空間實驗室的成本效益、檢測的簡單性等。第22頁,共87頁，星期六，2024年，5月23快速檢測反應模式免疫層析實驗滲濾實驗（間接法/雙抗原夾心法）第23頁,共87頁，星期六，2024年，5月24免疫層析實驗樣本：血漿/血清/全血（唾液）不同部位固定不同抗原可區(qū)分HIV-1/HIV-2,質控線：抗人IgG一般需時15-30min弱陽性結果較難判斷+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體金標HIV抗原顯色第24頁,共87頁，星期六，2024年，5月25

HIV?使用試驗步驟將檢測條的外包裝撕去

血清和EDTA抗凝血漿

EDTA抗凝全血 加入50uL樣品

加入50uL樣品

過15分鐘讀結果

加1滴示蹤緩沖液

最多60分鐘(HIV)

過15分鐘讀結果最多60分鐘(HIV)

第25頁,共87頁，星期六，2024年，5月26結果解釋

陽性陰性

無效無效15分鐘后讀結果，對結果的解釋不要超過1小時。第26頁,共87頁，星期六，2024年，5月27檢測要注意問題DetermineHIV-1/2試驗只能使用人類血清、血漿和全血，對其他標本結果可能不準確。反應線的強度不一定與標本中的抗體滴度相關。含EDTA以外抗凝劑的全血或血漿標本給出的結果可能不正確。陰性結果應當與臨床癥狀和風險因子一起考慮。陽性結果應當用第二種方法證實。結合臨床證據(jù)對結果做過評價后才能作出診斷。第27頁,共87頁，星期六，2024年，5月28第28頁,共87頁，星期六，2024年，5月29滲濾實驗原理：雙抗原夾心法樣本:血漿/血清（若有過濾裝置，則可測全血）可將抗原固定于不同位置，區(qū)分HIV-1和HIV-2實驗需幾步：加樣本，加洗液，加信號試劑。一般在5-15min完成弱陽性結果較難判斷+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體金標HIV抗原顯色第29頁,共87頁，星期六，2024年，5月30免疫滲濾原理的產品構造示意圖第30頁,共87頁，星期六，2024年，5月31結果第31頁,共87頁，星期六，2024年，5月32優(yōu)點：快速、簡便、易操作

可檢測100份以內小批量樣品需要很少的設備和試劑檢測地點可擴展到實驗室以外只需對技術人員做適當培訓大部分為一步法在短時間(30分鐘)內出結果結果易目測判讀可在室溫下保存第32頁,共87頁，星期六，2024年，5月33缺點不宜一次檢測100份以上的大批量樣品比ELISA法價格略高。結果判讀不客觀，易受主觀因素影響第33頁,共87頁，星期六，2024年，5月34快速檢測試劑選擇1.必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準的快速試劑；2.試劑必須在有效期內使用；3.根據(jù)檢測目的，選擇試劑初篩選擇敏感性高的試劑，復檢選擇特異性高的試劑；4.推薦使用臨床評估質量好并且近幾年連續(xù)考評結果穩(wěn)定的試劑。

第34頁,共87頁，星期六，2024年，5月35第35頁,共87頁，星期六，2024年，5月36三代與四代比較（快速試劑）四代試劑不僅可以檢測出血清/血漿/全血樣本中的HIV-1和HIV-2抗體，還可以檢測出p24抗原。p24抗原是感染HIV病毒后產生的一種蛋白質，比HIV抗體出現(xiàn)的要早，在艾滋病感染初期、窗口期內可以通過檢測p24抗原來判斷是否感染HIV。四代試劑比三代試劑平均提前5天可以檢測出HIV感染者。靈敏度為92.31%，特異性為99.66%。目前國內尚未上市第36頁,共87頁，星期六，2024年，5月37復核試驗方法選擇替代組合WB檢測結果陽性一致率（%）＋－±EIA1+RT1＋35100100EIA1+RT2＋34900100RT1+EIA1＋35100100RT1+EIA2＋33800100RT1+RT2＋3575098.5EIA1+EIA2＋3341099.7第37頁,共87頁，星期六，2024年，5月38免疫層析結果判讀記錄儀第38頁,共87頁，星期六，2024年，5月39第39頁,共87頁，星期六，2024年，5月40自動生成報告第40頁,共87頁，星期六，2024年，5月41結果導出Excel第41頁,共87頁，星期六，2024年，5月42第42頁,共87頁，星期六，2024年，5月43免疫層析結果判讀記錄儀優(yōu)點：

1.檢測結果的保存

2.自動生成報告

3.結果可導出缺點：

1.不適合批量操作第43頁,共87頁，星期六，2024年，5月44快速檢測，是艾滋病實驗室多了一種檢測方法?？焖贆z測，是為了更多、更快的的發(fā)現(xiàn)感染者?？焖贆z測，不是為了取代實驗室，但不能因為有了實驗室而放棄使用快速檢測。第44頁,共87頁，星期六，2024年，5月45明膠顆粒凝集試驗（PA）將提純后的HIV抗原連接到有色明膠顆粒上，制成致敏顆粒。當加入的檢測標本中有HIV抗體存在時，即可使致敏顆粒凝集，出現(xiàn)肉眼可見的淺色凝集環(huán)（斑）；而若標本中無HIV抗體，致敏顆粒即在重力作用下沉人U型板底，形成一個深色紅點。第45頁,共87頁，星期六，2024年，5月461、加入樣品稀釋液孔號75μl25μl25μl13212、加入測試樣品25μl孔號1321棄去3、樣品倍比稀釋孔號1321最終稀釋倍數(shù)1：1625μl25μl25μl1：8第46頁,共87頁，星期六，2024年，5月475、混勻，加蓋，室溫2個小時6、結果判讀致敏顆粒4、加入明膠顆粒最終稀釋倍數(shù)孔號13211：32未致敏顆粒25μl25μl1：16第47頁,共87頁，星期六，2024年，5月48第48頁,共87頁，星期六，2024年，5月49優(yōu)點：凝集試驗具有操作簡便，經(jīng)一步即可迅速得出結果，不需任何儀器等優(yōu)點該方法的敏感性及特異性與EL1SA方法相近不需特殊儀器該方法的敏感性及特異性與EL1SA方法相近溶血標本不影響結果缺點與不足：判定結果用肉眼觀察，無法保存。為了保存試驗結果，需配備數(shù)碼相機。應選用高質量的U型板第49頁,共87頁，星期六，2024年，5月50唾液檢測試劑Oralquick第50頁,共87頁，星期六，2024年，5月51用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周

將樣本轉入小瓶中攪動唾液檢測試劑Oralquick第51頁,共87頁，星期六，2024年，5月52插入檢測設備

20分鐘后讀取結果

無效陰性陽性第52頁,共87頁，星期六，2024年，5月53優(yōu)點:簡單、易操作、反應時間短適用于吸毒人群缺點：價格高影響因素多（口腔雜質、反應溫度等）第53頁,共87頁，星期六，2024年，5月544.化學發(fā)光免疫分析技術

（Chemiluminescenceimmunoassay）化學發(fā)光免疫分析技術是將化學發(fā)光體系與免疫反應相結合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術。其特點在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。第54頁,共87頁，星期六，2024年，5月55化學發(fā)光檢測使窗口期由43.6天縮短為38.3天，雖然只縮短了12.2%，但卻將殘余風險降低了46.4%。數(shù)據(jù)來源:Residualriskoftransfusion-transmittedviralinfectionsinShenzhen,China,2001through2004方法學窗口期（天）殘余風險ELISA43.61/17501CLIA38.31/32637可以降低殘余風險第55頁,共87頁，星期六，2024年，5月56評估本次評估使用隨機抽樣方式抽取已知血清標本

1556份，其中陽性標本

501份，陰性標本為

1055份?？泼罇|雅：靈敏度100%；特異度99.43%；準確度99.61%。阿克蘇：靈敏度100%；特異度99.15%；準確度99.42%結論：科美東雅CLIA試劑HIV抗體初篩結果與生物梅里埃（Ag+Ab）ELISA試劑比較有較高的靈敏度、特異性。統(tǒng)計分析表明：二者準確度顯著性檢驗無差異(u=0.7765，u＜1.96，P＞0.05)。將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標本（科美東雅6份，生物梅里埃9份），分別進行重復檢測，結果均陰性。二次結果匯總統(tǒng)計：兩種試劑檢測結果一致，符合率為100%。第56頁,共87頁，星期六，2024年，5月57HIV-1新發(fā)感染血清學方法檢測美國已將用BED方法監(jiān)測新發(fā)感染率納入了國家艾滋病常規(guī)監(jiān)測體系，全美所有需要進行新發(fā)感染檢測的樣品均寄至紐約州公共衛(wèi)生實驗室，統(tǒng)一檢測，統(tǒng)一質控，統(tǒng)一數(shù)據(jù)處理。2006年6月美國CDC發(fā)布了“資源有限國家BED檢測/監(jiān)測HIV-1新發(fā)感染指南”性病艾滋病預防控制中心于2004年將該方法引進國內。建立了適合于我國的BED方法的窗口期（168天）和4個關鍵校正系數(shù)（α=0.8098，β=0.7571，γ=0.9315，ε=0.0685）第57頁,共87頁，星期六，2024年，5月58原理其原理是根據(jù)HIV特異性IgG占總IgG抗體的比例隨著感染時間的延長而逐漸增高。應用BED-CEIA進行新近感染檢測只適用于HIV陽性樣品。由于個體間抗體生成的變異性，對個體而言，BED結果的預測值偏低，而且在個體水平上，BED檢測可能產生一定的假陽性和假陰性，但在人群水平上，假陽性的數(shù)目與假陰性的數(shù)目相近，因此可以相互抵消彼此的作用。美國FDA將BED-CEIA歸為“只應用于監(jiān)測目的，不能用于個體診斷和臨床”的實驗方法。第58頁,共87頁，星期六，2024年，5月59第59頁,共87頁，星期六，2024年，5月60建議：各實驗室盡量多參加實驗室能力驗證（PT）工作！

國家級PT艾滋病抗體篩查和確證3次/年梅毒抗體3次/年乙肝表面抗原3次/年HCV抗體檢測3次/年WB條帶判讀3次/年BED2次/年CD4檢測2次/年耐藥檢測2次/年基因序列判讀1次/年濾紙片干血斑HIV-DNA1次/年省級PT篩查實驗室1次/年篩查中心實驗室2次/年第60頁,共87頁，星期六，2024年，5月61三、職業(yè)暴露第61頁,共87頁，星期六，2024年，5月62第62頁,共87頁，星期六，2024年，5月63第63頁,共87頁，星期六，2024年，5月64第64頁,共87頁，星期六，2024年，5月65第65頁,共87頁，星期六，2024年，5月66第66頁,共87頁，星期六，2024年，5月67第67頁,共87頁，星期六，2024年，5月68第68頁,共87頁，星期六，2024年，5月69第69頁,共87頁，星期六，2024年，5月70第70頁,共87頁，星期六，2024年，5月71第71頁,共87頁，星期六，2024年，5月72第72頁,共87頁，星期六，2024年，5月73第73頁,共87頁，星期六，2024年，5月74第74頁,共87頁，星期六，2024年，5月75機構分布2011年，26個省份（系統(tǒng)）報告有艾滋病防治工作人員發(fā)生職業(yè)暴露，總例數(shù)為1043（比2010年增加15.4%）765例暴露者及時服用了抗病毒藥物，并接受了咨詢與隨訪檢測，到目前為止未發(fā)現(xiàn)職業(yè)暴露后感染HIV的案例。第