植物生理學(xué)-9實(shí)驗(yàn)九-植物組織逆境傷害程度的測定

植物組織逆境傷害程度的測定

——電導(dǎo)法主講：董新純

副教授實(shí)驗(yàn)原理植物細(xì)胞膜對維持細(xì)胞的微環(huán)境和正常的代謝起著重要的作用。在正常情況下，細(xì)胞膜對物質(zhì)具有選擇透性能力。當(dāng)植物受到逆境脅迫時(shí)，細(xì)胞膜遭到破壞，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，以致植物組織浸入無離子水中，水的電導(dǎo)將因電解質(zhì)的外滲而加大。膜透性增大的程度與逆境脅迫強(qiáng)度有關(guān)，也與植物抗逆性的強(qiáng)弱有關(guān)。電導(dǎo)儀測定外液的電導(dǎo)度增加值，求得傷害程度。實(shí)驗(yàn)材料：大葉黃楊葉片方法步驟：1.材料處理：對照：常溫低溫：－20℃冷凍20～30min注：洗刷試管，去離子水中含有吐溫202.取材正常、凍害各取6個(gè)葉片，洗凈各打取葉圓片36個(gè)以上，放到小燒杯中用去離子水沖洗；每支試管12個(gè)葉圓片；加入15ml蒸餾水；放入塑料沙網(wǎng)（距液面1-2cm），用去離子水漂洗放置到塑料燒杯中（不蓋塞子），統(tǒng)一抽氣10～15min。（設(shè)置空白1只試管）3.抽氣后取出紗網(wǎng)，室溫?fù)u動(dòng)20min

（時(shí)間可以更長）4.電導(dǎo)儀測定初電導(dǎo)值S15.沸水浴10min（殺死植物組織），自來水冷卻，用力搖1-2min后即可測定終電導(dǎo)S2方法步驟：取材各取6個(gè)葉片，洗凈打葉圓片分裝在3支試管中，各加12片、蒸餾水15mL抽氣15min平衡20min測量初電導(dǎo)S1煮沸15min冷卻、平衡10min測量終電導(dǎo)S2結(jié)果計(jì)算:相對電導(dǎo)度（L）=(S1-空白）/(S2-空白）

凍害的傷害度（％）=Lt－凍害處理的相對電導(dǎo)度Lck－室溫對照的相對電導(dǎo)度實(shí)驗(yàn)材料空白電導(dǎo)值處理初電導(dǎo)值(μS)終電導(dǎo)值(μS)相對電導(dǎo)度(L)傷害度(%)重復(fù)平均重復(fù)平均室溫－-20℃植物組織逆境傷害程度的測定記載表問題與注意事項(xiàng)：1.蒸餾水中加吐溫，洗儀器時(shí)出現(xiàn)泡沫。

吐溫作用：陰離子表面活性劑，促進(jìn)水分與葉片表面接觸。吐溫20－聚氧乙烯（20）山梨醇酐單月桂酸酯

2.抽氣作用？3.紗網(wǎng)作用?4.溫度對電導(dǎo)度的影響較大，S1、S2須在相同的溫度下測定。5.防止高CO2氣源和口中呼出的CO2進(jìn)入試管

抽出細(xì)胞間隙的氣體，使水分更容易、更充分地滲入到細(xì)胞間隙中去。防止抽氣時(shí)葉圓片被抽出。DDS-307型電導(dǎo)率儀操作規(guī)程1、打開電源開關(guān)，預(yù)熱30分鐘。2、儀器校準(zhǔn)：將“選擇”旋鈕指向“檢查”檔，調(diào)節(jié)常數(shù)補(bǔ)償旋鈕到“1”刻度線，調(diào)節(jié)溫度補(bǔ)償旋鈕到“25”刻度線，然后調(diào)節(jié)“校準(zhǔn)”旋鈕，使儀器顯示100.0μS/cm，校正完畢。按照電極上標(biāo)明的電極常數(shù)，調(diào)節(jié)常數(shù)補(bǔ)償旋鈕，使儀器顯示值與電極所標(biāo)常數(shù)一致。DDS-307型電導(dǎo)率儀操作規(guī)程3、樣品測定：將“選擇”旋鈕置于適合的量程位置。當(dāng)測定過程中顯示值熄滅時(shí)，說明測量值超出量程范圍，此時(shí)應(yīng)將選擇旋鈕置于高一擋量程。

測定時(shí)電極完全浸沒到溶液中。（如果試