DB37T 4724-2024 驢駒大腸桿菌病防治技術(shù)規(guī)程

37CodeofpracticeforthepreventionandtreatmentofcolibacillosisindonkeyfoalsI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1驢駒大腸桿菌病防治技術(shù)規(guī)程GB39707醫(yī)療廢物處理處置污染控制NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范NY/T5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則3.2驢駒大腸桿菌病donkeyfoalscolibaci784.1病原特點(diǎn)病原為腸桿菌科大腸埃希氏菌屬中O78、O101、O8等主要血清型的致病性大腸桿菌。病原菌為革蘭氏4.2傳染源4.3傳播途徑該病通過消化道傳播，糞-口傳播是主要途徑。病原菌污染糞便、圈舍、飼料、水槽及飲水等均可24.5發(fā)病特點(diǎn)無法站立。發(fā)病末期，食欲廢絕，腹瀉和便秘交包膜下有出血點(diǎn)。心內(nèi)膜和外膜也有出血點(diǎn)，腸系膜淋巴結(jié)腫大、按NY/T541的規(guī)定執(zhí)行，主要采集肛拭子、腹瀉將純化后的細(xì)菌接種于葡萄糖、甘露醇、乳糖、麥芽糖、吲哚試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、枸櫞3濃稠懸液，經(jīng)121℃高壓2h，制備O抗原。取潔凈玻片，吸提取分離菌基因組DNA為模板擴(kuò)增16SrDNA序列。引物序列按照附錄A。PCR反應(yīng)體系為模板（基因定。片段大小約為1500bp?；厥詹⒓兓疨CR產(chǎn)物，按照雙脫氧鏈終止法測序。按NY/T388和NY5027的規(guī)定執(zhí)行。夏季食槽和水槽根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，發(fā)病率高驢場，在分娩前3d～5d給予母驢微生態(tài)制劑或中獸藥。49.1.2抗菌藥物的使用應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室病死驢及病害驢的處理見《病死及病害動(dòng)物無害化處理技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2017]25號(hào)）的規(guī)5A.1.1麥康凱選擇培養(yǎng)基：大腸桿菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，PH值降低，麥康凱平板中的顯色劑（中性紅）顯A.1.2革蘭氏染色：G+菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高，乙醇將脂溶解，縫隙原與抗體結(jié)合時(shí)，它們之間的親和力會(huì)導(dǎo)致免疫復(fù)合物的形成，從而引A.1.4PCR反應(yīng)：聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是80年代中期發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù)。其基本原理是用兩A.1.5瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)：凝膠電泳的原理是基于DNA分子的電荷和大小差異。DNA分子是帶有負(fù)電荷的，因此可以在電場中移動(dòng)。凝膠是一種具有微孔結(jié)構(gòu)的材料，可以限制DNA分子的運(yùn)動(dòng)，使其只能A.2試劑或材料A.2.4無菌培養(yǎng)皿。A.2.6載玻片。A.2.8營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基。A.2.11瓊脂糖。A.2.12TAE緩沖液。A.2.13DNA純化試劑盒。6A.2.18PCR反應(yīng)管。A.3儀器設(shè)備A.3.1高速冷凍離心機(jī)：最大速度：14800轉(zhuǎn)每分，最大RCF：21100xg，溫度范圍：-9℃~+40℃。A.3.2細(xì)菌培養(yǎng)箱：溫度范圍+28℃~+70℃。A.3.3醫(yī)用冰箱：冷藏室溫度范圍：2℃~8℃,冷凍室溫度范圍：-20℃~-40℃。A.3.4超低溫冰箱：溫度范圍-40℃~-86℃。A.3.6核酸電泳儀。A.3.8正置顯微鏡。A.4試驗(yàn)步驟將純化后的細(xì)菌接種于葡萄糖、甘露醇、乳糖、麥芽糖、吲哚試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、枸櫞濃稠懸液，經(jīng)121℃高壓2h，制備O抗原。取潔凈玻片，吸血清，一滴加入等量生理鹽水。輕輕晃動(dòng)玻片，傾斜玻片30°于1min內(nèi)觀察試驗(yàn)現(xiàn)象，根據(jù)試驗(yàn)現(xiàn)象將純化的大腸桿菌接種于LB液體培養(yǎng)基中，置37℃恒時(shí)保存。通過1%