體外診斷試劑-C反應蛋白(CRP)測定試劑盒(膠乳增強免疫比濁法)臨床評價報告-血清

第⑵與已上市產品進行比較研究：通過選擇目前臨床普遍認為質量較好的產品作為比對試劑對********生物科技有限公司生產的C反應蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）進行評價，以判斷其診斷檢測能力與已上市的檢測試劑盒無差異。1.4.2試驗設計及試驗方法選擇樣本量及樣本量確定的依據免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求可選擇總樣本量不少于100例并分別采用待評價試劑和對比試劑/參考方法進行單次測定的方式。本臨床研究為方法學比對設計，采用相關系數檢驗(連續(xù)變量)計算樣本量，根據美國國家臨床實驗室標準化委員會制定的CLSIEP9-A2標準，考核試劑與參比試劑的檢測結果的相關系數不得低于0.975，預計本試驗的相關系數在0.985以上，故設定參數：α=0.05，s=1(單側)，β=0.2，ρ0=0.975，ρ1=0.985，根據相關系數檢驗(連續(xù)變量)樣本量估算公式[3],計算樣本量，具體如下：根據以上公式計算得出樣本量為96例，結合法規(guī)要求及統計學要求，考慮5%的脫落剔除率，本次臨床試驗最終樣本量確定為不小于105例，若試驗過程中有脫落樣本或所測量數據不滿足分析要求，則需補充樣本量，直到滿足統計學或法規(guī)要求。樣本選擇依據本次臨床試驗旨在考查C反應蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）檢測性能，評價差異。內。應選擇需要評估C反應蛋白濃度疾病患者和正常健康人群的樣本。另外，在臨床試驗中選擇部分含干擾物質的樣本進行對比研究，臨床角度驗證試劑的特異性。入選標準需滿足以下所有條件方可入選：選取臨床上符合上述特征的病例作為入選樣本，性別、年齡不限。排除標準樣本符合以下任意一條，則不能入選：⑴ 樣本收集時間或病例信息不明確；⑵ 試驗操作中因失誤導致樣本量不足檢測者；⑶ 研究者認為該樣本不滿足檢測要求。剔除標準⑴ 測定試驗過程的樣本；⑵ 被測物質濃度超過試劑的線性檢測范圍；⑶ 雙管平行測定結果只有考核試劑（或參比試劑）的檢測數據。樣本要求空腹不溶血血清或血漿，血漿可用EDTA、肝素、檸檬酸鈉抗凝。脂血樣本、含類風濕因子和人抗鼠IgG抗體的樣本可使結果假性升高。樣本在2～8℃可穩(wěn)定7天，時間過長須置-20℃保存。考核試劑說明產品名稱：C反應蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）包裝規(guī)格：R1：2×60ml，R2：2×15ml。批號：180160有效期：2019-01-29生產商：********生物科技有限公司生產地址：********生產許可證號：********檢測報告編號：保存條件及有效期：未開封試劑于2～8℃避光貯存可穩(wěn)定12個月，開瓶后2～8℃避光貯存可穩(wěn)定30天。校準品未開瓶在2～8℃無腐蝕性氣體中避光儲存，若無污染，可穩(wěn)定12個月，校準品復溶后在2～8℃條件下可穩(wěn)定14天。適用儀器：奧林巴斯、貝克曼、日立、東芝、朕江全自動生化分析儀。參比試劑說明產品名稱：C反應蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）包裝規(guī)格：試劑：150mL（R1：2×60mL+R2：2×15mL）批號：20171009有效期：2018-10-08生產商：*****生物技術有限公司地址：*****產品注冊證號：*****保存條件及有效期：未開封試劑于2~8℃避光貯存可穩(wěn)定12個月，開瓶后2~8℃避光貯存可穩(wěn)定30天。

適用儀器：適用于奧林帕斯、貝克曼、日立、東芝、朕江生化分析儀。

對比試劑確立依據：********生物技術有限公司生產的C反應蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）與考核試劑方法學、檢測物質、臨床預期用途、主要性能指標、推薦的陽性判斷值或參考區(qū)間等方面基本一致，且參比試劑的臨床應用廣泛，產品質量好。因此，選擇該公司生產的試劑作為參比試劑。質量控制方法果復核質控要求，判定本次試驗有效。0數據統計分析⑴離群點檢查表1方法間離群點檢查樣表1X1Y1D1D1'2X2Y2D2D2'3X3Y3D3D3'4X4Y4D4D4'……………平均值//EE'Di=|Yi-Xi|………...………….(1)Di'=|Yi-Xi|/Xi……………...……….………...(2)…………….…………………..…(3)…………….…………………..…(4)檢測界限為4E與4E'，把每一個Di和Di'分別與4E和4E'比較，標記超出4E和4E'的點。任何一點（Xi,Yi）如同時未通過上述兩種檢測方法，則判斷為離群點。如果出現一個以上的離群點，但它們并未超出醫(yī)學上有臨床意義的界限，則可保留并使用這些數據。如果離群點超出醫(yī)學上有臨床意義的界限，應刪除該點，但每組數據中被刪除的離群值不能超過2.5%。如果超過2.5%，則應調查是否存在干擾、人為錯誤或儀器故障。如果有幾個分析物同時在同一儀器設備上評價，檢查出現明顯偏差的樣本的其它分析物的結果，同時也應檢查同一分析批的質量控制結果。⑵考核試劑與參比試劑定量結果評價1)回歸分析以考核試劑檢測結果為Y軸，參比試劑檢測結果為X軸作散點圖。采用最Y=a+bX。Y=a+bX…………(5)…………(6)…………………(7)N為樣本數量，i為樣本編號，其中：……………….……...…(8)………….………..…(9)2) 相關分析計算Pearson相關系數：………………..……..…(10)N為樣本數量，i為樣本編號，與同公式（8）、（9）。3) Bland-Altman圖以同一樣本考核試劑與參比試劑檢測濃度的均值為Y1.5臨床試驗結果及分析1.5.1入選與剔除********醫(yī)院共檢測124例受試者樣本，按方案剔除標準共剔除樣本30例為線性范圍外標本，3例為離群值，剔除率為2.42%，最終納入分析121例。詳情見表2、表3。表2入選與剔除概況入選樣本（例）剔除樣本（例）剔除率符合樣本（例）12432.42%121表3剔除樣本詳情樣本編號性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）剔除原因1803050441男20健康查體0.340.46離群值1803050062男44健康查體1.872.37離群值1803191036男80肺部感染16.7014.32離群值1.5.2基線情況********醫(yī)院最終納入分析121例，其中男性59例，女性62例，平均年齡34.69±21.31，包括9例新生兒受試者。詳情見表4。表4基線概況（性別、年齡、臨床診斷）指標********醫(yī)院性別（例）年齡（歲）1.5.3離群值根據離群值檢查方法，對********醫(yī)院納入的124例受試者樣本（不包括0例線性范圍外樣本）檢測濃度進行方法間離群值檢查，共3例（編號1803050441,1803050062，1803191036）被判定為離群值，詳見表5。剔除此例離群值后再進行離群值檢查，未發(fā)現離群值。表5離群值詳情樣本編號性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）是否剔除1803050441男20健康查體0.340.46剔除1803050062男44健康查體1.872.37剔除1803191036男80肺部感染16.7014.32剔除注：4E=2.2020，4E’=0.2497。1.5.4線性回歸與相關根據回歸分析和相關分析計算公式，計算********醫(yī)院數據Pearson相關系數r=0.9996，如圖1。進行回歸分析，計算得截距（a）：0.0082（-0.1708,0.1872），斜率（b）：1.0025（0.9972,1.0079），回歸方程為：Y=0.0082+1.0025X，決定系數r2=0.9991。Pearson相關系數接近1，說明兩種試劑的相關關系密切?；貧w方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）95%CI包括1，說明兩種試劑的一致性比較好。圖1考核試劑與參比試劑回歸圖1.5.5Bland-Altman圖以考核試劑與參比試劑檢測濃度的差值為Y軸，均值為X軸繪制Bland-Altman散點圖，兩種試劑檢測濃度差值為-0.0534±0.8428mg/L（均值±標準2所示。兩種試劑檢測濃度差值的均值±1.96SD范圍在-1.7390mg/L到1.6322mg/L之間，超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。兩種試劑檢測濃度差值的變化呈檢測濃度均值越大差值越大的趨勢。圖2考核試劑與參比試劑差值的Bland-Altman圖以考核試劑與參比試劑檢測濃度的差值百分比為Y軸，均值為X軸繪制Bland-Altman散點圖，兩種試劑檢測濃度差值百分比為-0.2060±7.5190%（均值±3所示。從圖中可看出，兩種試劑檢測濃度差值百分比的均值±1.96SD范圍在-15.2441%到14.8321%之間，超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。兩種試劑檢測濃度差值百分比基本在±SD之間均勻分布。圖3考核試劑與參比試劑差值百分比的Bland-Altman圖1.5.6符合率及一致性分析符合率分析********醫(yī)院共納入血清樣本121例，考核試劑與參比試劑均檢測均在參考范圍外的標本44例，均在參考范圍內的標本76例，參比試劑檢測在參考范圍外且考核試劑在參考范圍內的標本0例，參比試劑檢測在參考范圍內且考核試劑在參考范圍外的標本1例，詳見表6。表6定性檢測結果配對四格表考核試劑參比試劑合計參考范圍外參考范圍內參考范圍外44（a）1（b）45參考范圍內0(c）76（d）76合計4477121參考范圍外標本符合率按公式a/(a+c)×100%計算；參考范圍內標本符合率按公式d/(b+d)×100%計算；總符合率按公式(a+d)/(a+b+c+d)×100%計算；符合率置信區(qū)間的計算公式為：p±1.96[p(1-p)/n]1/2(其中p符合率，n為樣本量，若p＞0.9，則采用校正的Wilsonscore方法。對考核試劑和參比試劑的檢測結果進行Kappa值檢驗，當k＞0.8時，考核試劑與檢測試劑的檢測結果高度一致。經計算，考核試劑定性檢測結果參考范圍外標本符合率為100.00%（96.34%,100.00%），參考范圍內標本符合率為98.70%（94.11%,99.72%），總符合率為99.17%（94.87%,99.97%）。進行Kappa一致性分析，Kappa值k=0.9822。表7考核試劑檢測符合率及95%置信區(qū)間100.0%（96.3%,100.0%）98.70%（94.11%,99.72%）99.17%（94.87%,99.97%）注：符合率均超過90%，置信區(qū)間采用校正的Wilsonscore方法不一致樣本分析********醫(yī)院共1例樣本考核試劑與參比試劑檢測結果不一致，本次試驗，不一致樣本比例很低，詳見表8，且在臨界值附近，誤差在產品技術要求規(guī)定的范圍內，可以判定為試驗允許誤差范圍內的結果不一致，不再用第三方試劑復核。表定性檢測結果不一致樣本詳情樣本編號性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）考核試劑定性結果參比試劑（mg/L）參比試劑定性結果1803210843女87肺部感染8.26參考區(qū)間外7.88參考區(qū)間內1.5.7含干擾物質樣本檢測為綜合、全面的評價考核試劑的檢測性能，樣本中應包括一定數量的含干擾物質的樣本。檢測結果如表9所示。試驗結果說明，考核試劑和參比試劑檢測結果無差異。表明考核試劑和參比試劑的抗干擾性能有較好的一致性。表9含干擾物質樣本詳情樣本編號性別年齡臨床診斷干擾物考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）1803200260女0新生兒黃疸膽紅素1.021.081803140593女0新生兒黃疸膽紅素0.780.791803170017男0新生兒黃疸膽紅素1.161.231803060582男0新生兒黃疸膽紅素0.210.201803040126男0新生兒黃疸膽紅素0.760.851.6討論和結論討論：********醫(yī)院共檢測124例受試者樣本，按方案剔除標準共剔除樣本3例，其中0例為線性范圍外標本，3例為離群值標本，剔除率為2.42%，最終納入分析121例，其中男性59例，女性62例，平均年齡34.69±21.31歲（包括9本次臨床試驗結果的Pearson相關系數接近1，說明兩種試劑的相關關系越密切?；貧w方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）接近1，說明兩種試劑均在允許偏差范圍內?？己嗽噭┡c參比試劑檢測濃度的差值Bland-Altman散點圖顯示：兩種試劑-0.0534±0.8428mg/L值±1.96SD范圍在-1.7390mg/L到1.6322mg/L超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。差值百分比Bland-Altman散點圖顯示：兩種試劑檢測濃度差值百分比為-0.2060±7.5190%（均值±標準差），兩種試劑檢測濃度差值百分比的均值±1.96SD范圍在-15.2441%到14.8321%之間。超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。經計算，考核試劑定性檢測結果參考范圍外標本符合率為100.00%（96.34%,100.00%），參考范圍內標本符合率為98.70%（94.