醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中凝集反應(yīng)的原理

凝集反應(yīng)的原理及臨床應(yīng)用凝集反應(yīng)(agglutination)：是指細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原或表面包被抗原的顆粒性載體與相應(yīng)抗體結(jié)合后，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。

抗原抗體反應(yīng)：

是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。

抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段：第一階段：特異性結(jié)合階段，數(shù)秒至數(shù)分鐘，不出現(xiàn)可見的反應(yīng)。第二階段：可見反應(yīng)階段，抗原抗體復(fù)合物在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)、PH、溫度和補(bǔ)體等的影響下，進(jìn)一步交聯(lián)聚集，出現(xiàn)凝集、沉淀、溶解和補(bǔ)體結(jié)合介導(dǎo)的生物現(xiàn)象等肉眼可見的反應(yīng)。此階段慢，數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)?？乖贵w反應(yīng)的特點(diǎn)：1、特異性抗原、抗體特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）與抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。2、可逆性抗原與抗體的結(jié)合是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合，故形成的復(fù)合物不穩(wěn)定，在一定的條件下可以解離為游離抗原與抗體。3、比例性比例性：是指抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比

關(guān)系。鉤狀效應(yīng)：指由于抗原、抗體比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象。等價(jià)帶：抗原抗體比例合適，結(jié)合充分，沉淀物形成快

而多。前帶：抗體過剩時(shí)稱為前帶。后帶：抗原過剩時(shí)稱為后帶。

4、階段性影響抗原抗體反應(yīng)的因素：1、抗原抗體反應(yīng)物的自身因素：性質(zhì)、活性及濃度等直接影響結(jié)合反應(yīng)2、環(huán)境因素：

①電解質(zhì)：eg：0.85%NaCl②酸堿度：PH6~8③溫度：常用溫度37℃和室溫（18~25℃）

④振蕩、攪拌：加強(qiáng)抗原抗體分子結(jié)合，加速反應(yīng)凝集反應(yīng)的特點(diǎn)：1、靈敏度高、方法簡(jiǎn)便。2、定性：根據(jù)凝集現(xiàn)象出現(xiàn)與否判斷結(jié)果陰性或陽(yáng)性。3、半定量：將標(biāo)本作一系列倍比稀釋后進(jìn)行反應(yīng)，以出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋度作為滴度。凝集反應(yīng)兩個(gè)階段：1、特異性結(jié)合階段2、出現(xiàn)可見凝集反應(yīng)階段凝集反應(yīng)的分類一、直接凝集反應(yīng)：

細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆?？乖谶m當(dāng)電解質(zhì)參與下直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為直接凝集反應(yīng)。二、間接凝集反應(yīng)：

將可溶性抗原（或抗體）預(yù)先吸附或偶聯(lián)于與免疫無(wú)關(guān)、大小適當(dāng)?shù)念w粒性載體表面，使之成為抗原（或抗體）致敏顆粒，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼可見的特異性凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應(yīng)或被動(dòng)免疫凝集反應(yīng)。間接凝集試驗(yàn)的類型：（一）正向間接凝集反應(yīng)用已知抗原致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗體。（二）反向間接凝集反應(yīng)用已知特異性抗體致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原。（三）間接免疫凝集抑制反應(yīng)以已知抗原致敏的顆粒載體及相應(yīng)的抗體為診斷試劑，檢測(cè)標(biāo)本中是否存在和致敏抗原相同的抗原。間接凝集反應(yīng)常用的載體的顆粒：動(dòng)物或人紅細(xì)胞、細(xì)菌多種惰性顆粒如：聚苯乙烯膠乳、皂土、明膠顆粒、活性炭、火棉膠等。梅毒螺旋體抗體檢測(cè)（TPPA）：明膠顆粒不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（Trust）：甲苯胺紅顆粒血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）：活性炭顆粒結(jié)果判定：

定性發(fā)生肉眼可見的凝集現(xiàn)象半定量

影響因素及注意事項(xiàng)：致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前30分鐘于室溫（15~30℃）下進(jìn)行調(diào)制，且均應(yīng)混合均勻后再使用。微量反應(yīng)板中的內(nèi)容物充分混合后再靜置（30秒）。反應(yīng)靜置過程中，一定要對(duì)微量反應(yīng)板加蓋并禁止振搖至少靜置2小時(shí)以上。不加熱血清反應(yīng)素實(shí)驗(yàn)（Trust）

梅毒簡(jiǎn)介

梅毒（syphilis）是一種由蒼白密螺旋體感染導(dǎo)致的慢性、系統(tǒng)性疾病。分為后天獲得性梅毒和先天性梅毒。獲得性梅毒（多通過性接觸傳染）按感染時(shí)間分為早期梅毒（感染時(shí)間≤1年）和晚期梅毒（感染時(shí)間>1年）。

1.傳染源梅毒是人類獨(dú)有的疾病，顯性和隱性梅毒患者是傳染源，感染梅毒的人的皮損及其分泌物、血液中含有梅毒螺旋體。感染后的頭2年最具傳染性，而在4年后性傳播的傳染性大為下降。梅毒螺旋體可通過胎盤傳給胎兒，早期梅毒的孕婦傳染給胎兒的危險(xiǎn)性很大。2.傳播途徑性接觸是梅毒的主要傳播途徑，占95%以上。感染梅毒的早期傳染性最強(qiáng)。隨著病期的延長(zhǎng)傳染性越來(lái)越小，一般認(rèn)為感染后4年以上性接觸的傳染性十分微弱?；加忻范镜脑袐D可通過胎盤傳染給胎兒，引起胎兒宮內(nèi)感染，可導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或分娩胎傳梅毒兒。一般認(rèn)為孕婦梅毒病期越早，對(duì)胎兒感染的機(jī)會(huì)越大。孕婦即使患有無(wú)癥狀的隱性梅毒還具有傳染性。

早期梅毒分為一期、二期、早期潛伏梅毒；晚期梅毒分為：三期（梅毒樹膠樣腫、心血管梅毒、神經(jīng)梅毒）、晚期潛伏梅毒。先天性梅毒也按時(shí)間分為早期梅毒（出生后兩年內(nèi)）和晚期梅毒。梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷（Laboratory）

梅毒螺旋體實(shí)驗(yàn)（TreponemalTests，TT），TT大多采用重組抗原檢測(cè)血清中存在的螺旋體特異性抗體（IgG和IgM混合抗體）。梅毒螺旋體感染（主要是性接觸感染）后至硬下疳出現(xiàn)之間的時(shí)間為梅毒潛伏期，約10-90天。梅毒感染者硬下疳出現(xiàn)后7-14天TT可呈陽(yáng)性。

TT滴度對(duì)現(xiàn)癥梅毒的診斷和治療沒有意義，也不能用于梅毒活動(dòng)度的檢測(cè)和療效評(píng)價(jià)。大多數(shù)梅毒感染者，TT呈終身陽(yáng)性。

非梅毒螺旋體實(shí)驗(yàn)（Non-treponemalTests，NTT）一期梅毒出現(xiàn)硬下疳后10-15天NTT可呈陽(yáng)性（感染后約6周左右），未經(jīng)治療的梅毒患者，NTT滴度在感染后1-2年達(dá)到高峰，之后降低，直至晚期梅毒呈低水平陽(yáng)性。

NTT滴度總體上與疾病活動(dòng)度有關(guān)，因此在NTT應(yīng)定量報(bào)告。

RPR或者TRUST既可用于評(píng)價(jià)梅毒活動(dòng)度也可用于監(jiān)測(cè)療效。在治療起始應(yīng)以NTT定量結(jié)果作為之后衡量療效的基礎(chǔ)值，治療之后第1、3、6個(gè)月定期復(fù)檢，之后每6個(gè)月復(fù)檢一次直至NTT轉(zhuǎn)陰（或呈低水平陽(yáng)性，NTT1:1-1:4）持續(xù)1年。NTT高滴度患者應(yīng)保持隨訪觀察。

梅毒初篩的實(shí)驗(yàn)方案

（1）ATT。其優(yōu)點(diǎn)是：可自動(dòng)化、高通量，適用于無(wú)癥狀人群的篩查、獻(xiàn)血者（包括血制品）和器官捐獻(xiàn)者。缺點(diǎn)是：在梅毒低流行地區(qū)陽(yáng)性預(yù)測(cè)值低、存在大量假陽(yáng)性。（2）ANTT。其優(yōu)點(diǎn)是可以定量，從滴度可檢測(cè)活動(dòng)度。缺點(diǎn)是只能檢出活動(dòng)性梅毒，且在早期梅毒的檢出率不及TT法。（3）ATT和ANTT并列聯(lián)合檢測(cè)。即每一位待檢者同步檢測(cè)TT和NTT。這一方案要求NTT必須定量檢測(cè)，適宜于極早期梅毒可疑病例的篩查。

梅毒血清學(xué)檢測(cè)假陰性已治愈的梅毒患者一定是TT陽(yáng)性/NTT陰性。NTT陰性仍然是目前評(píng)價(jià)梅毒治愈的最好指標(biāo)。但是晚期梅毒患者經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化治療后仍可能呈NTT陽(yáng)性。梅毒患者出現(xiàn)TT假陰性極其罕見，如果出現(xiàn)，應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)操作出現(xiàn)問題。在極早期梅毒也可見由于前帶現(xiàn)象造成的NTT假陰性。因此在初篩實(shí)驗(yàn)中NTT檢測(cè)應(yīng)同步進(jìn)行原倍血清和稀釋血清的檢測(cè)以防止前帶現(xiàn)象。梅毒血清學(xué)檢測(cè)假陽(yáng)性假陽(yáng)性TT偶爾見于自身免疫疾病、孕婦。假陽(yáng)性NTT的發(fā)生率約0.2-0.8%（也有研究顯示更高），分為急性BFP-NTT（持續(xù)時(shí)間6個(gè)月）。急性BFP-NTT可見于新近免疫接種后，新近發(fā)生心肌梗塞，瘧疾、肝炎、水痘、麻疹等發(fā)熱性感染疾病以及孕婦。慢性BFP-NTT可見于注射型吸毒，自身免疫疾病、HIV感染、麻風(fēng)病、惡性腫瘤、慢性肝病、以及老年人群。絕大部分BFP-NTT的滴度都小于≤1:4。

梅毒治療強(qiáng)調(diào)早診斷，早治療，療程規(guī)則，劑量足夠。療后定期進(jìn)行臨床和實(shí)驗(yàn)室隨訪。性伙伴要同查同治。早期梅毒經(jīng)徹底治療可臨床痊愈，消除