生物技術(shù)實(shí)踐-2024年高考生物一輪復(fù)習(xí)教材知識(shí)挖空練檢測(cè)版

選修1生物技術(shù)實(shí)踐

專(zhuān)題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用

課題1果酒和果醋和制作

一、果酒制作

1.酵母菌是微生物。

酵母菌進(jìn)行有氧呼吸的反應(yīng)式如下：;

酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸的反應(yīng)式如下：O

2.（左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在℃。

二、果醋制作

1.醋酸菌是一種細(xì)菌。醋酸生成反應(yīng)式是o

2.醋酸菌的最適生長(zhǎng)溫度為℃。

3.默寫(xiě)：制作果酒和果醋實(shí)驗(yàn)流程示意圖

4.為防止發(fā)酵液被污染，發(fā)酵瓶要清洗干凈，用體積分?jǐn)?shù)為的酒精消毒。

5.果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用來(lái)檢驗(yàn)。

在條件下，與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)。

課題2腐乳的制作

1.多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如等，其中起主要作用的是。

2.毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶可以將豆腐中的分解成小分子的和；脂

肪酶可以將水解成和=

3.將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，將籠屜中的溫度控制在C?

4.現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴(yán)格的條件下，將優(yōu)良菌種直接接種在豆腐匕這樣可以

避免的污染，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。

5.默寫(xiě)腐乳制作的實(shí)驗(yàn)流程示意圖

6.鹵湯中的酒可以選用料酒、黃酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在左右。

課題3制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量

1.泡菜的制作離不開(kāi)o乳酸菌是細(xì)菌。常見(jiàn)的乳酸菌有

和o常用于生產(chǎn)酸奶。

2.測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理：在酸化的條件下，亞硝酸鹽與發(fā)生重氮化反應(yīng)后，

與結(jié)合形成色染料。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行目測(cè)比較，可

以大致估算出亞硝酸鹽的含量。

專(zhuān)題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

課題背景

防止入侵，獲得的培養(yǎng)物，是研究和應(yīng)用微生物的前提。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生

物，一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的條件，另一方面需要確保無(wú)處不在的其他微生物無(wú)

法混入。

基礎(chǔ)知識(shí)

（一）培養(yǎng)基

1.人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)一一培養(yǎng)基。其中，配制成的.

的基質(zhì)稱(chēng)為液體培養(yǎng)基，配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)稱(chēng)為O在液體培養(yǎng)基中加人凝固劑

后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基，它是實(shí)驗(yàn)室中最常用的培養(yǎng)基之一。微生物在培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，可

以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。（瓊脂是一種從紅藻中提取的o瓊脂在98℃以上熔化，在44℃以下

凝固，在常規(guī)培養(yǎng)條件下呈現(xiàn)固態(tài)。）

2.雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有、（提供碳元素的物質(zhì)）、

（提供氮元素的物質(zhì)）和。

3.在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以

及的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加,培養(yǎng)時(shí)

需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)時(shí)需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)時(shí)則需要提

供無(wú)氧的條件。

（二）無(wú)菌技術(shù)

獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是

。無(wú)菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開(kāi)，主要包括以下幾個(gè)方面。

1.對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行o

2.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行o

3.為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在附近進(jìn)行。

4.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|。是指使用較為溫和的物理

或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽抱和抱子）。則是指使用強(qiáng)烈的理化因

素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括0

5.實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法

1）消毒方法：日常生活中經(jīng)常用到0在100℃煮沸5-6min可以殺死微生物細(xì)胞和一部分芽

抱。對(duì)于一些不耐高溫的液體，如牛奶，則使用,在70?75℃煮30min或在80℃煮15min,可

以殺死牛奶中的微生物，并且使牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。止匕外，人們也常使用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用一

擦拭雙手、用消毒水源等。

2）滅菌方法：是將微生物的接種工具，如、或其他金屬用具，直接

在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇?。止匕外，在接種過(guò)程中，試管口或瓶口等容易被污

染的部位，也可以通過(guò)火焰灼燒來(lái)滅菌。

是將滅菌物品放入干熱滅菌箱內(nèi)，在℃加熱1?2h可達(dá)到滅菌的目的。能耐高溫

的、需要保持干燥的物品，如（吸管、培養(yǎng)皿）和等，可以采用這種方法滅菌。

—是將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽鍋內(nèi)。把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣

徹底排除后，將鍋密閉，繼續(xù)加熱使鍋內(nèi)的氣壓逐步上升，溫度也隨之升到100℃以上。為達(dá)到良好的滅菌

效果，一般在壓力為,溫度為℃的條件下，維持15?30min。

3）除了以上方法外，實(shí)驗(yàn)室里還用或進(jìn)行消毒。例如，接種室、接種箱或超凈工

作臺(tái)在使用前，可以用紫外線照射30min,以殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射前，適量噴灑

或溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果。

實(shí)驗(yàn)操作

本實(shí)驗(yàn)用牛肉膏蛋白膝固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分成和兩個(gè)階段

進(jìn)行。

（一）制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基

1.根據(jù)牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基配方的比例，計(jì)算配制100mL的培養(yǎng)基時(shí)，各種成分的用量。

2.準(zhǔn)確地稱(chēng)取各種成分。牛肉膏比較黏稠，可以用玻棒挑取，放在稱(chēng)量紙上稱(chēng)量。牛肉膏和

蛋白陳都容易吸潮，稱(chēng)取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱(chēng)后要及時(shí)蓋上瓶蓋。

3.將稱(chēng)好的牛肉膏連同稱(chēng)量紙一同放人燒杯，加入少量的水，加熱。當(dāng)牛肉膏溶化并與稱(chēng)量

紙分離后，用玻棒取出稱(chēng)量紙。往燒杯中加人稱(chēng)量好的蛋白豚和氯化鈉，用玻棒攪拌，使其溶解。加人瓊

脂，加熱使其熔化。在此過(guò)程中，不斷用玻棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。當(dāng)瓊脂完全熔化后，

補(bǔ)加蒸儲(chǔ)水至100mLo

4.將配制好的轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高

壓滅菌鍋，在壓力為lOOkPa、溫度為121℃條件下，滅菌mine將用幾層舊報(bào)紙包

緊，5?8套培養(yǎng)皿作一包，包好后放人于熱滅菌箱內(nèi)，在160?170℃下滅菌2h。

5.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。

倒平板的具體操作正確順序是：（用下圖字母表示）。

討論：平板冷凝后，為什么要將平板倒置?

（二）純化大腸桿菌

微生物的方法很多，最常用的是和o

平板劃線法是通過(guò)在培養(yǎng)基表面的操作，將的菌種_

分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的,

這就是□

稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到

培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成

，從而能在培養(yǎng)基表面形成O

討論：在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？

___________課題延伸

為了保持菌種的純凈，需要進(jìn)行菌種的保藏。對(duì)于頻繁使用的菌種，我們可以采用的方法。

首先，將菌種接種到試管的培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入—

中保藏。以后每3?6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。但是，這種方法保存

的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易或產(chǎn)生o

對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用的方法，在3mL的甘油瓶中，裝入后一

滅菌。將1mL培養(yǎng)的轉(zhuǎn)移至甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在中保存。

課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

（一）篩選菌株

在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)

做O

（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目

在課題1中，我們學(xué)習(xí)了稀釋涂布平板法。這一方法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中的數(shù)目。當(dāng)樣品的

稀釋度足夠高時(shí)，O

通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落

數(shù)在的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

值得注意的是，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目o這是因?yàn)閛因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)

果一般用而不是用活菌數(shù)來(lái)表示。除了上述的活菌計(jì)數(shù)法外，也是測(cè)定微生物數(shù)

量的常用方法。

課題延伸

本課題對(duì)能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行了初步的篩選。但是，這只是分離純化菌種的第一步。對(duì)分離的菌種作進(jìn)

一步的鑒定，還需要借助生物化學(xué)的方法。在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的將尿素

分解成了o氨會(huì)使培養(yǎng)基的,pHo因此，我們可以通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)基

來(lái)判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入,培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH

升高，指示劑將變。

課題3分解纖維素的微生物的分離

基礎(chǔ)知識(shí)

（一）纖維素與纖維素酶

棉花是自然界中纖維素含量的天然產(chǎn)物，止匕外，木材、作物秸稈等也富含纖維素。許多商

品纖維素都是由天然纖維素制得的，如水溶性的竣甲基纖維素鈉（CMC-Na）、不溶于水的微晶纖維素等。

纖維素酶是一種,一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即、和

，前兩種酶使纖維素分解成,第三種酶將纖維二糖分解成0正是在這

三種酶的協(xié)同作用下，纖維素最終被成葡萄糖，為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，同樣，也可以為人

類(lèi)所利用。

（二）纖維素分解菌的篩選

在篩選纖維素分解菌的過(guò)程中，人們發(fā)明了,這種方法能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)

行篩選。剛果紅（CongoRed,簡(jiǎn)稱(chēng)）是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形

成，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅

一纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的。這樣，我們就可以

通過(guò)是否產(chǎn)生來(lái)篩選纖維素分解菌。

［資料二］選擇培養(yǎng)

在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培基之前，可以通過(guò)選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌的,

以確保能夠o

［資料三］剛果紅染色法

常用的剛果紅染色法有兩種，一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板

時(shí)就加入剛果紅。

方法一在長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基上，覆蓋質(zhì)量濃度為Img/mL的CR溶液，10?15min后，倒去CR溶液，力口

入物質(zhì)的量濃度為lmol/L的,15min后倒掉NaCl溶液，此時(shí)，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周?chē)鷮?huì)

出現(xiàn)O

方法二配制質(zhì)量濃度為10mg/mL的CR溶液，后，按照每200mL培養(yǎng)基加入1mL的比例加

入CR溶液，混勻后倒平板。等培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落后，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周?chē)鷮?huì)出現(xiàn)明顯的透明圈。

課題延伸

本課題對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選。但是，這只是分離純化的第一步。為確定得到的是

纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有和發(fā)

酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是采用對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的進(jìn)行―

的測(cè)定。

專(zhuān)題4酶的研究與應(yīng)用

課題1果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用

1.果膠是植物以及的主要組成成分之一，它是由聚合而成的一種高分

子化合物。

2.果膠酶能夠分解,瓦解植物的及,使榨取果汁變得更容易，而果膠

分解成可溶性的，也使得渾濁的果汁變得澄清。果膠酶并不特指某一種酶，而是分解果膠的一

類(lèi)酶的總稱(chēng)，包括、和等。

3.酶的活性是指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶的活性高低可以用在一定條件下，酶所催化的某一化學(xué)反

應(yīng)的來(lái)表示。酶反應(yīng)速度用單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中或來(lái)表示。

4.、和等條件會(huì)影響酶的活性。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：溫度和pH對(duì)酶活性的影響、探究果膠酶的用量注意：探究溫度的影響時(shí)，溫度設(shè)置可以選—

為溫度梯度，設(shè)置：10℃、20℃...........至60℃。也可以選5℃為溫度梯度。在混合果泥與果膠酶前，二者

應(yīng)分別放在不同試管中處理，以保證底物與酶在混合時(shí)溫度是的。此實(shí)驗(yàn)中，溫

度是，保持不變的有：果泥量、酶的濃度和用量、水浴時(shí)間和混合物的pH等所有其他條件不

變。探究pH時(shí)，可將溫度梯度改成梯度，再選定一個(gè)適宜的即可。此實(shí)驗(yàn)中，不

同pH梯度之間就是o可能通過(guò)測(cè)定濾出的來(lái)判斷果膠酶的活性高低。因?yàn)樾》肿?/p>

物質(zhì)可以通過(guò)濾紙，果膠酶活性越大，濾出的果汁的體積就越大。

課題2探討加酶洗衣粉的洗滌效果

1.加酶洗衣粉是指含有的洗衣粉，目前常用的酶制劑有四類(lèi)：、、_

和o其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是和o

2.、和都會(huì)影響酶的活性。為了解決這個(gè)難題，科學(xué)家通過(guò)

生產(chǎn)出了能夠耐酸、耐堿、和較高溫度的酶，并且通過(guò)特殊的化學(xué)物質(zhì)將酶層層包裹，與洗衣

粉的其他成分隔離。

課題3酵母細(xì)胞的固定化

1.固定化酶技術(shù)是指將酶固定在不溶于水的上，使酶既能與接觸，又能與

分離。

2.固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，包

括、和。一般來(lái)說(shuō)，酶更適合采用

和固定化，而細(xì)胞多采用固定化。

3.在缺水狀態(tài)下，微生物處于狀態(tài)。就是讓處于狀態(tài)的微生物重新恢

復(fù)的生活狀態(tài)。

4.注意，加熱時(shí)要用,或者,反復(fù)幾次，直到海藻酸鈉溶化為止。

5.將溶化好的海藻酸鈉溶液至室溫，加入已活化的,進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，使其混合?/p>

勻，再轉(zhuǎn)移到注射器中。

6.以的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的中，觀察液滴在CaCl2溶液

中形成凝膠珠的情形。

7.將固定好的酵母細(xì)胞（凝膠珠）用沖洗2~3次。

專(zhuān)題5DNA還蛋白質(zhì)技術(shù)

課題1DNA粗提取與鑒定

基礎(chǔ)知識(shí)

（一）DNA的溶解性

1.對(duì)于DNA的粗提取而言，就是利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在方面的差異，提取

DNA,去除雜質(zhì)。（人教P54）

2.利用DNA和蛋白質(zhì)等其它成分在中的溶解度不同，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使充

分溶解，而使沉淀，或相反。（人教P54圖5—1）

3.mol/L濃度下，DNA溶解度最大。（人教P54思考題）

4.通過(guò)的方式，來(lái)控制NaCL溶液的濃度

使DNA在鹽溶液中溶解或析出。（人教P54思考題）

5.利用不溶于酒精，但是細(xì)胞中的某些則溶解于酒精，可以使DNA和蛋白質(zhì)進(jìn)

一步分離。（人教P54）

（二）DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性

大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60—80℃的高溫，而DNA在℃以上才會(huì)變性。洗滌劑能夠瓦解或

破壞,食鹽能細(xì)胞膜。（人教P55圖5—2和右側(cè)旁攔思考）

（三）DNA的鑒定

在條件下，DNA與反應(yīng)呈現(xiàn),因此可以作為鑒定

DNA的試劑。（人教P55）

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

（-）原則上的實(shí)驗(yàn)材料都可以適合提取DNA,但是，選用DNA含量的生物組

織。（人教人5）

（-）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液

如果實(shí)驗(yàn)材料是非哺乳動(dòng)物如雞血細(xì)胞，需要在雞血細(xì)胞中加入一定量的,如果實(shí)驗(yàn)材

料是植物細(xì)胞，需要先使用溶解細(xì)胞膜。（人教P55）

（三）去除濾液中的雜質(zhì)

1.純化DNA,去除雜質(zhì)有個(gè)方案。

2.方案一：在濾液中加入2mol/L濃度的NaCL溶液，目的是過(guò)濾去除；再調(diào)節(jié)NaCL溶液濃

度為0.14mol/L,目的是,去除；最后用濃度為2mol/L的NaCL溶液

重新溶解（人教P55）

3.方案二：直接在DNA粗提取液中加入,反應(yīng)10—15分鐘，嫩肉粉中的能夠分

解o（人教P56）

4.方案三：將DNA粗提取液在℃的恒溫水浴箱中保溫10—15分鐘。（人教P56）

（四）DNA的析出和鑒定

95%的可以使DNA析出，用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起的絲狀物的顏色是0

獲取的絲狀物后加入到質(zhì)量濃度為mol/L濃度的NaCL溶液的試管中，使絲狀物重新溶解。

（人教P56）

操作提示

1.以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100mL血液需要加入3g,目的是0

2.二苯胺要-（人教P56）

3.加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免加劇,導(dǎo)致DNA分子不能形成。

（人教P56）

課題2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段

（簡(jiǎn)稱(chēng)PCR）是一種迅速的技術(shù)，它能以極少數(shù)的DNA為模板,

在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的DNA拷貝。

PCR原理

1.PCR技術(shù)的DNA體外復(fù)制環(huán)境有DNA解旋酶、耐熱DNA聚合酶、DNA母鏈、4種脫氧核甘酸

和,它能使DNA聚合酶能夠從引物的支端開(kāi)始連接脫氧核甘酸。（人教P58列表），而引物是

一段片段，用于PCR的引物長(zhǎng)度通常為個(gè)核甘酸。（人教左下角旁

攔i）

2.通常將DNAD的羥基（一OH）成為端，而磷酸基團(tuán)的末端成為端。由

于,因此DNA需要引物，因此DNA的合成方向總是從延伸。（人教P58—59）

3.在的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)解體，雙鏈分開(kāi)，這過(guò)程成為0（人教P59）.

PCR的反應(yīng)過(guò)程

1.PCR一般需要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可以分為三步。變性時(shí)，需要將溫度上升

到。。以上時(shí)，雙鏈DNA解旋為單鏈。復(fù)性時(shí)，溫度要下降到℃左右，延伸時(shí)，溫

度再上升到℃左右。（人教P60）

操作提示

為了避免外源DNA等因素污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸儲(chǔ)水等在使用前

必須進(jìn)行o而使用的緩沖液并在。。存儲(chǔ)。（人教P60）

練習(xí)

假設(shè)PCR反應(yīng)中，只有一個(gè)DNA片段作為模板，請(qǐng)計(jì)算在30次循環(huán)后，反應(yīng)物中大約有個(gè)這樣的

個(gè)DNA片段，一共需要加入個(gè)引物。

課題3血紅蛋白的提取和分離

基礎(chǔ)知識(shí)

（-）凝膠色譜法

1.凝膠色譜法的原理o所用的凝膠實(shí)際上就是些微小的（人教P64,也是P70

課后作業(yè)第1題）

2.當(dāng)通過(guò)凝膠時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路

程,移動(dòng)速度;而相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，

只能在凝膠外部移動(dòng)，路程，移動(dòng)速度。

（二）緩沖液

凝膠色譜法實(shí)驗(yàn)使用的緩沖液一般是緩沖液。（P65,也是人教P70作業(yè)第2題）

（三）電泳

1.電泳的原理是利用____________樣品中各種分子,使帶電分子產(chǎn)生不同

的,從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。（人教P66,也是P70課后作業(yè)第3題）

2.在測(cè)定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量時(shí)，通常使用電泳。（人教P66）

3.蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它和等因素。（人教P66）

4.SDS能消除凈電荷對(duì)遷移率的影響,并且能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全oSDS能與各種蛋白質(zhì)形

成,由于SDS所帶的大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因此掩蓋了不同蛋白

質(zhì)分子之間的,是電泳遷移率完全取決于o（人教P66）

實(shí)驗(yàn)操作

（一）樣品處理及粗分離（粗分離步驟）

1.血紅蛋白一共由條肽鏈組成，包括兩條和o其中每條肽鏈環(huán)繞

成一個(gè),此基團(tuán)可攜帶一分子的或一分子o血紅蛋白因含有血紅素而

呈。（人教P67及右上角圖5—17）

2.樣品的處理和粗分離的四個(gè)步驟分別是紅細(xì)胞的洗滌、o

可以除去樣品中分質(zhì)量較小的雜質(zhì)。（人教P67,右下角i和P70練習(xí)第4題）

3.該實(shí)驗(yàn)分離血紅蛋白溶液時(shí)，從上往下數(shù)，第層血紅蛋白水溶液。

（二）凝膠色譜操作（純化步驟）

看人教P69圖5—21和圖5—22

（三）SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳（純度鑒定步驟）

判斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)標(biāo)，需要進(jìn)行的鑒定，使用最多的是

操作提示

1.洗滌次數(shù)過(guò)少，無(wú)法除去；離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使等一同沉淀，達(dá)不

到分離效果。（人教P70）

2.為了加速膨脹，可以將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，這樣做的目的是（人教P70）

3.在裝填凝膠柱時(shí)，不得有氣泡存在，因?yàn)?降低分離效果。（人教P70）

4.哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞區(qū)別與其他真核細(xì)胞的特點(diǎn)是有。

專(zhuān)題6植物有效成分的提取

課題1植物芳香油的提前

基礎(chǔ)知識(shí)

（一）植物芳香油的來(lái)源

1.天然香料的主要來(lái)源是動(dòng)物和植物，微生物中的也可以產(chǎn)生芳香化合物。

2.提取出的植物芳香油具有很強(qiáng)的，其組成也比較復(fù)雜，主要包括化合物及

其衍生物。

（-）植物芳香油的提取方法

1.植物芳香油的提取方法有蒸儲(chǔ)、和等。

2.水蒸氣蒸儲(chǔ)法的原理是利用將揮發(fā)性較強(qiáng)的植物芳香油攜帶出來(lái)，形成

混合物，冷卻后，混合物又會(huì)重新分出油層和水層。

3.根據(jù)蒸儲(chǔ)過(guò)程中原料放置的位置，可以將水蒸氣蒸儲(chǔ)法劃分為水中蒸儲(chǔ)、水上蒸儲(chǔ)和

蒸儲(chǔ)。其中，水中蒸館的方法對(duì)于有些原料不適用，如柑橘和o這是因?yàn)樗姓魞?chǔ)會(huì)

導(dǎo)致原料和有效成分等問(wèn)題。因此，柑橘、檸檬芳香油的制備通常

使用。

4.植物芳香油不僅揮發(fā)性強(qiáng)，而且易溶,如石油酸、酒精、乙醛和戊烷等。不適于用

水蒸氣蒸儲(chǔ)的原料，可以考慮使用法。

5.萃取法是將粉碎、的植物原料用有機(jī)溶劑浸泡，使芳香油在有機(jī)溶劑中

的方法。芳香油溶解于有機(jī)溶劑后，只需蒸發(fā)出有機(jī)溶劑，就可以獲得純凈的植物芳香油了。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

（一）玫瑰精油的提取

1.玫瑰精油是制作高級(jí)香水的主要成分，能使人產(chǎn)生愉悅感。實(shí)驗(yàn)室玫瑰精油的粗提取，將玫瑰花

瓣與清水的質(zhì)量按用法進(jìn)行提取。玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，

溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，能隨水蒸氣一同蒸鐳。

2.水蒸氣蒸儲(chǔ)后，錐形瓶中將收集到乳白色的乳濁液，這是玫瑰精油與的混合物。這

時(shí)只需要向乳化液中加入，增加鹽的濃度，就會(huì)出現(xiàn)明顯的分層。然后用

將這兩層分開(kāi)。分離的油層還會(huì)含有一定的水分，一般加入一些吸水，放置過(guò)夜，再一

除去固體硫酸鈉就要可以得到玫瑰油了。

（二）橘皮精油的提取

1.從橘皮中提取的橘皮油，無(wú)色透明，具有誘人的橘香味，主要成分是o橘皮精油主

要貯藏在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸儲(chǔ)時(shí)會(huì)發(fā)生部，使用

蒸儲(chǔ)法又會(huì)發(fā)生原料的問(wèn)題，所以一般采用法。

2.新鮮的柑橘皮中含有大量的果蠟、果膠和水分，如果直接壓榨，出油率較低。為了提高出油率，

需要將柑橘皮去水，并用浸泡。為了使橘皮油易于與水分離，還要分別

加入相當(dāng)于橘皮質(zhì)量0.25%的和5%的,并調(diào)節(jié)pH至o

3.橘皮壓榨液中含有橘皮精油和大量水分，還有一些糊狀殘?jiān)入s質(zhì)?？梢韵扔闷胀ㄟ^(guò)

濾除去固體物和殘?jiān)?，然后進(jìn)一步除去質(zhì)量較小的殘留固體物，再用分液漏斗或吸管

將的橘皮油分離出來(lái)。此時(shí)的橘皮油還含有少量的水和果蠟，需在℃下

靜止5~7d,使雜質(zhì)沉淀，用吸管吸出上層澄清橘皮油，其余部分通過(guò)濾紙過(guò)濾，與吸

出的上層橘油合并，成為最終的橘皮精油。

操作提示

1.蒸儲(chǔ)時(shí)許多因素都會(huì)影響產(chǎn)品的品質(zhì)。例如，蒸儲(chǔ)溫度太高、時(shí)間太短，產(chǎn)品品質(zhì)就比較差。如

果要提高品質(zhì)，就需要蒸儲(chǔ)時(shí)間。

2.橘皮在石灰水的浸泡時(shí)間為以上，橘皮