TZNZ 235-2023 水產養(yǎng)殖環(huán)境中地西泮殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質譜法

CCSB50T/ZNZchromatography-tandemmassspectrometri浙江省農產品質量安全學會發(fā)布IT/ZNZ235—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由浙江省農產品質量安全學會提出并歸口。本文件起草單位：浙江省水產技術推廣總站（浙江省漁業(yè)檢驗檢測與疫病防控中心）。本文件主要起草人：王鼎南、周欽、王揚、李詩言、柯慶青、周凡、吳洪喜、吳平谷。1T/ZNZ235—2023水產養(yǎng)殖環(huán)境中地西泮殘留量的測定液相色譜串聯(lián)質譜法本文件規(guī)定了水產養(yǎng)殖環(huán)境中地西泮殘留量的液相色譜串聯(lián)質譜法測定方法。本文件適用于水體和底泥等水產養(yǎng)殖環(huán)境中地西泮殘留量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法SC/T9102.1漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第1部分：總則SC/T9102.2漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第2部分：海洋SC/T9102.3漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第3部分：淡水3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理在弱堿性環(huán)境下，將水體樣品或底泥樣品中的地西泮用乙酸乙酯萃取，經(jīng)濃縮和PSA凈化材料凈化后，用液相色譜-串聯(lián)質譜儀檢測和確證，內標法定量。5試劑和材料5.1試劑5.1.1乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。5.1.2乙腈（C2H3N）：色譜純。5.1.3甲醇（CH4O）：色譜純。5.1.4甲酸（CH2O2）：色譜純。5.1.5無水硫酸鈉（Na2SO4）：使用前需550℃高溫灼燒4h。5.1.6無水磷酸氫二鉀（K2HPO4）。5.2溶液配制5.2.180%乙腈水溶液：準確量取800mL乙腈（5.1.2），用水定容至1L，混合均勻后備用。2T/ZNZ235—20235.2.20.1%甲酸水溶液：準確量取1mL甲酸（5.1.4），用水定容至1L，混合均勻后備用。5.2.31mol/L磷酸氫二鉀溶液：準確稱取174g磷酸氫二鉀（5.1.6），用適量水溶解后，定容至1L容量瓶中，混合均勻后備用。5.3標準品5.3.1地西泮標準物質：CAS號：439-14-5，純度≥95%。5.3.2地西泮-D5內標物：CAS號：65854-76-4，純度≥95%。5.4標準溶液配制5.4.1地西泮標準儲備液（100μg/mL）：準確稱取10mg（精確至0.1mg）地西泮標準物質，用乙腈（5.1.2）溶解并定容至100mL，-20℃避光保存，有效期6個月。5.4.2地西泮標準中間液（10.0μg/mL）：準確移取1mL地西泮標準儲備液（5.4.1）于10mL容量瓶中，用乙腈（5.1.2）稀釋定容，配制成濃度為10.0μg/mL的標準中間液，-20℃避光保存，有效期6個5.4.3地西泮標準工作液（100ng/mL）：準確移取1mL地西泮標準中間液（5.4.2）于100mL容量瓶中，用乙腈（5.1.2）稀釋定容，配制成濃度為100ng/mL的標準工作液，-20℃避光保存，有效期6個5.4.4地西泮-D5內標工作液（500ng/mL）：將地西泮-D5內標物（5.3.2）用乙腈（5.1.2）逐級稀釋至500ng/mL，-20℃避光保存，有效期6個月。5.5材料5.5.1凈化材料：N-丙基乙二胺固相吸附劑（PSA）。5.5.2微孔濾膜：0.2μm，有機型或親水親脂兩用型。5.5.3載氣：氮氣純度≥99.99%。6儀器和設備6.1液相色譜串聯(lián)四極桿質譜儀：配電噴霧離子源。6.2分析天平：感量0.01g和0.1mg。6.3渦旋振蕩儀。6.4離心機：轉速不低于4500r/min。6.5旋轉蒸發(fā)儀。6.6氮吹濃縮儀。6.7機械真空泵。6.8微量移液器。6.9冷凍干燥機：冷凍溫度≤-50℃,真空度＜20Pa。6.10采泥器。6.11篩網(wǎng)：100目。7樣品采集、制備及保存按照SC/T9102.1、SC/T9102.2和SC/T9102.3規(guī)定的方法采集樣品。3T/ZNZ235—2023a）水體樣品：500mL棕色玻璃瓶采集，采樣時注滿容器，避光室溫保存，7d內完成萃取。b）底泥樣品：剔除石塊和植物體后用冷凍干燥機冷凍干燥，用研缽研磨后過100目篩網(wǎng)，-20℃以下冷凍保存，1個月內完成分析。8試驗步驟8.1樣品萃取及凈化8.1.1水體樣品取100mL水體樣品于250mL分液漏斗中，加入內標100μL（5.4.4），再加入10mL磷酸氫二鉀溶液（5.2.3），50mL乙酸乙酯（5.1.1），經(jīng)過振蕩提取后，棄去大部分的下層水相，將上層乙酸乙酯和少量水體樣品轉移至50mL離心管中，3000r/min離心5min，移取上層清液于150mL雞心瓶中，38℃下旋轉蒸發(fā)至近干，在雞心瓶加入80%乙腈水溶液（5.2.1）1mL和PSA（5.5.1）100mg，旋渦1min，過0.2μm濾膜（5.5.2）供測定。8.1.2底泥樣品取試樣，常溫自然解凍后，稱取2g（準確至0.01g）底泥樣品于50mL離心管中，加入內標100μL（5.4.4）靜置30min，再加入10mL磷酸氫二鉀溶液（5.2.3）和10mL乙酸乙酯（5.1.1），適當渦旋后加入5g無水硫酸鈉（5.1.5），充分振蕩后4500r/min離心5min，移取上層清液至10mL玻璃離心管中，氮吹吹干后，加入80%乙腈水溶液（5.2.1）1mL和PSA（5.5.1）100mg，旋渦1min，過0.2μm濾膜（5.5.2）供測定。8.2儀器參考條件8.2.1液相色譜參考條件液相色譜參數(shù)參考條件：a)色譜柱：C18柱，1.8μm，3.0mm×100mm，或性能相當者；b)流動相：甲醇（5.1.3），0.1%甲酸水溶液（5.2.2），梯度洗脫條件見表1；c)流速：300μL/min；d)柱溫：40°C；e)進樣量：5μL。表1液相色譜的梯度洗脫條件8.2.2質譜參考條件4T/ZNZ235—2023質譜參靠條件：a）離子源：電噴霧離子源；b）掃描模式：正離子掃描（ESI+）；c）監(jiān)測方式：多重反應監(jiān)測（MRM）；d）電噴霧電壓（IS）：5500V；e）離子源溫度（TEM）：550℃;f）氣簾氣壓力（CUR）：35psi；g）霧化氣壓力（GS1）：55psi；h）輔助氣壓力（GS2）：60psi；i）碰撞氣流速（CAD）：Medium。j）質譜參數(shù)見表2。表2地西泮及地西泮-D5的定性離子、定量離子、去簇電壓及碰撞能量8.3標準曲線的制備精密量取標準工作液（5.4.3）和內標工作液（5.4.4）適量，經(jīng)氮氣吹干后，用80%乙腈水溶液配制成地西泮濃度分別為0.1ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL系列標準工作液（地西泮-D5內標濃度為50ng/mL）。分別以地西泮濃度為橫坐標（x），地西泮的峰面積和內標地西泮-D5峰面積比值為縱坐標（y）繪制標準曲線，求回歸方程和相關系數(shù)。8.4測定8.4.1定性測定在相同實驗條件下，樣品中待測物質的保留時間與基質標準溶液的保留時間的偏差在±2.5%之內，且樣品中各組分定性離子的相對豐度與濃度接近的基質混合標準工作溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較，偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的待測物。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差>50±20±25±308.4.2定量測定5T/ZNZ235—2023取試樣溶液和標準工作液，作多點校準，地西泮以地西泮-D5為內標，以色譜峰峰面積定量，內標 法計算。標準溶液及試樣溶液中目標藥物的特征離子質量色譜峰峰面積均應在儀器檢測的線性范圍之內。標準溶液特征離子質量色譜圖見附錄A。8.5空白實驗除不加試樣外，按8.1~8.4的規(guī)定執(zhí)行試劑空白結果。9結果計算和表述9.1水體樣品結果計算按式（1）計算水體樣品中地西泮殘留量。1=（1）式中：X1—水體樣品中地西泮殘留量，單位為納克每升（ng/Lc0—試劑空白結果，單位為納克每毫升（ng/mL）；c1—從標準曲線上得到的樣液中地西泮的含量，單位為納克每毫升（ng/mL）；V1—樣品的最終定容體積，單位為毫升（mLV2—水體樣品的取樣體積，單位為毫升（mL）。9.2底泥樣品結果計算按式（2）計算底泥樣品中地西泮殘留量。2=（2）式中：X2—底泥樣品中地西泮殘留量，單位為微克每千克(μg/kgc0—試劑空白結果，單位為納克每毫升（ng/mL）；c2—從標準曲線上得到的樣液中地西泮的含量，單位為納克每毫升（ng/mL）；V3—樣品的最終定容體積，單位為毫升（mLm—底泥樣品取樣質量，單位為克（g）。9.3結果表述測定結果保留小數(shù)點后一位。10檢測方法靈敏度、精密度、準確度10.1檢出限和定量限本方法水體樣品中地西泮的檢出限為0.3ng/L，定量限為1.0ng/L；底泥樣品中地西泮的檢出限為0.3μg/kg，定量限為1.0μg/kg