馬鈴薯莖尖脫毒新技術(shù)（病毒鈍化）操作規(guī)程

1馬鈴薯莖尖脫毒新技術(shù)（病毒鈍化）規(guī)程本文件規(guī)定了馬鈴薯莖尖脫毒技術(shù)的術(shù)語(yǔ)與定義、材料選擇、催芽處理、材料消毒、資源材料保存、病毒鈍化的技術(shù)和方法。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T29375-2012馬鈴薯脫毒試管苗繁育技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)與定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1莖尖脫毒shoottipdetoxification根據(jù)病毒在植株體內(nèi)分布不均勻性及越靠近新生組織部位（如莖尖和根尖頂端生長(zhǎng)點(diǎn)、新生芽的生長(zhǎng)錐等處）病毒含量越少的原理，通過(guò)剝?nèi)∏o尖分生組織進(jìn)行培養(yǎng)獲得脫毒植株。3.2病毒鈍化virusinactivation病毒在一定條件下（高溫、抗病毒藥劑）出現(xiàn)不侵染植株或已侵染植株緩慢。4材料選擇選擇具有品種典型特性、生長(zhǎng)健壯，無(wú)明顯病癥的單株作為脫毒基礎(chǔ)材料。5催芽處理將入選材料打破休眠，通過(guò)自然發(fā)芽，散光晾曬，待頂芽生長(zhǎng)至2～3cm時(shí)待用。6材料消毒2取1cm頂芽放入器皿中，自來(lái)水沖洗30min后用75%酒精浸泡10s，無(wú)菌水沖洗3次，再用5%次氯酸鈉溶液浸泡15min，無(wú)菌水沖洗3次，放在已滅菌的培養(yǎng)皿中待用。7資源材料保存在超凈工作臺(tái)上，將消毒處理過(guò)的材料接入MS培養(yǎng)基中，25℃條件下，光照/黑暗交替12h、3000LX下培養(yǎng)、保存。8病毒鈍化8.1培養(yǎng)基配制選擇合適的培養(yǎng)基是莖尖培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵，參照GB/T29375-2012馬鈴薯脫毒試管苗繁育技術(shù)規(guī)程，配制MS+6-BA0.2ppm+NAA0.05ppm+病毒唑注射液40mg/kg，pH5.8的鈍化培養(yǎng)基組合。8.2接種將保存苗的頂端部分1cm組織接入鈍化培養(yǎng)基中培養(yǎng)。8.3高溫鈍化將鈍化培養(yǎng)基中的薯苗正常培養(yǎng)7d后，放入37℃條件下，弱光1500LX條件下培養(yǎng)，誘導(dǎo)內(nèi)源生長(zhǎng)素產(chǎn)生，使苗徒長(zhǎng)，鈍化病毒，增大無(wú)毒區(qū)間。8.4脫毒經(jīng)高溫處理15d后的材料，取其頂芽1mm接入普通MS培養(yǎng)基中，25℃條件下，光照12h，3000