TCAICC 02-2023 生乳中百菌清的快速檢測(cè) 膠體金免疫層析法

全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)發(fā)布Z備案號(hào)：送審稿2023-12-31發(fā)布I 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4原理 5試劑與材料 6儀器與設(shè)備 7分析步驟 8結(jié)果判定 9結(jié)果確認(rèn) 10性能指標(biāo) 附錄A（規(guī)范性）快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)提出。本文件起草單位：全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)、西北農(nóng)林科技大學(xué)、北京勤邦科技股份有限公司、內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司、西北大學(xué)、北大荒研究院（北京）有限公司本文件主要起草人：呂欣，郭樹，趙三軍、萬(wàn)宇平、牛晨、張瑜、王丹、劉佳文、王欣、劉強(qiáng)輝、王曉敏、高永亮、劉國(guó)強(qiáng)、李佳穎本文件為首次發(fā)布。1生乳中百菌清的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了生乳中百菌清的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。本文件適用于生乳中百菌清的快速定性測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法國(guó)市監(jiān)食檢規(guī)〔2023〕1號(hào)市場(chǎng)監(jiān)管總局關(guān)于規(guī)范食品快速檢測(cè)使用的意見3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中的百菌清經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和試紙條中檢測(cè)線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過(guò)檢測(cè)線與質(zhì)控線（C線）顏色深淺比較，對(duì)樣品中百菌清進(jìn)行定性判定。5試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）。5.1.2參考物質(zhì)：百菌清參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見表1，純度≥98%。表1百菌清參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量C8N2Cl45.2溶液配制25.2.1百菌清標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱取百菌清參考物質(zhì)（5.1.2）10mg（精確至0.01mg），置于小燒杯中，用甲醇（5.1.1）溶解，定量轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，再用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為1.0mg/mL的百菌清標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-20℃避光保存，有效期6個(gè)月。5.2.2百菌清標(biāo)準(zhǔn)中間液（10μg/mL精密移取百菌清標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0mg/mL5.2.1）0.1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為10μg/mL的百菌清標(biāo)準(zhǔn)中間液。-20℃避光保存，有效期1個(gè)月。5.2.3百菌清標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.1μg/mL精密移取百菌清標(biāo)準(zhǔn)中間液（10μg/mL5.2.2）0.1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為0.1μg/mL的百菌清標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用新配。5.3材料百菌清膠體金免疫層析試紙條，適用基質(zhì)為生乳。需在陰涼、干燥、避光條件下保存。5.3.1金標(biāo)微孔（含膠體金標(biāo)記的特異性抗體）。5.3.2試紙條。6儀器與設(shè)備6.1電子天平：感量為0.01mg。6.2移液器：10μL～200μL、100μL～1000μL。6.3迷你金屬浴。6.4膠體金讀數(shù)儀（可選）。7分析步驟7.1試樣制備取適量有代表性樣品充分混勻。7.2試樣提取以生乳為基質(zhì)的樣品可直接上樣檢測(cè)或根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書稀釋后檢測(cè)。7.3測(cè)定步驟將檢測(cè)試紙條（5.3.2）樣品端垂直向下插入金標(biāo)微孔中，35℃溫育5min，取出試紙條，對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。7.4質(zhì)控試驗(yàn)每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。38結(jié)果判定通過(guò)對(duì)比質(zhì)控線(C線)和檢測(cè)線(T線)的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視判定示意圖質(zhì)控線(C線)顯色，檢測(cè)線(T線)顏色深于質(zhì)控線(C線)或與質(zhì)控線(C線)顏色質(zhì)控線(C線)顯色，檢測(cè)線(T線)顏色淺于質(zhì)控線(C線)或不顯色，表明樣品中百質(zhì)控線(C線)不顯色，無(wú)論檢測(cè)線(T線)是否顯色，表明操作不正確或試紙條已失4當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，采用參比方法進(jìn)行確證。10性能指標(biāo)10.1檢出限：3μg/L。10.2靈敏度：≥95%。10.3特異性：≥90%。10.4假陰性率：≤5%。10.5假陽(yáng)性率：≤10%。10.6交叉反應(yīng)率：滴滴涕、三氯殺螨砜、氯丹<1%。本方法所述試劑、試紙條信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者應(yīng)使用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)的試劑、試紙條。本方法參比方法為SN/T2320-2009《進(jìn)出口食品中百菌清、苯氟磺胺、甲抑菌靈、克菌靈、滅菌丹、敵菌丹和四溴菊酯殘留量檢測(cè)方法氣相色譜-質(zhì)譜法》（包括所有的修改單）。5（規(guī)范性）快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算快速檢測(cè)方法各個(gè)性能指標(biāo)計(jì)算方法見表A.1。表A.1快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算方法N11N12N1.＝N11＋N12N21N22N2.＝N21＋N22N.1＝N11＋N21N.2＝N12＋N22N＝N1.＋N2.或N.1＋N.2＋＝pfN12/N1.×100＝100－靈敏度pf