TCAICC 03-2023 生乳中多菌靈的快速檢測 膠體金免疫層析法

全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會發(fā)布Z備案號：送審稿2023-12-31發(fā)布I 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5試劑與材料 6儀器與設(shè)備 7分析步驟 8結(jié)果判定 9結(jié)果確認(rèn) 10性能指標(biāo) 附錄A（規(guī)范性）快速檢測方法性能指標(biāo)計算 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會提出。本文件起草單位：全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會、內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司、北京勤邦科技股份有限公司、北大荒研究院（北京）有限公司、西北大學(xué)本文件主要起草人：郭樹，王兆芹、崔廷婷、李慧、張瑜、牛晨、劉興海、任希杰、王丹慧、惠光朋、田桂艷、張坤、李靜本文件為首次發(fā)布。1生乳中多菌靈的快速檢測膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了生乳中多菌靈的膠體金免疫層析快速檢測方法。本文件適用于生乳中多菌靈的快速定性測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法國市監(jiān)食檢規(guī)〔2023〕1號市場監(jiān)管總局關(guān)于規(guī)范食品快速檢測使用的意見3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的多菌靈經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和試紙條中檢測線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與質(zhì)控線（C線）顏色深淺比較，對樣品中多菌靈進行定性判定。5試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）。5.1.2參考物質(zhì)：多菌靈參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥98%。表1多菌靈參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量C9H9N3O25.2溶液配制25.2.1多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100μg/mL）：準(zhǔn)確稱取多菌靈參考物質(zhì)（5.1.2）1mg（精確至0.01mg），置于小燒杯中，用甲醇（5.1.1）溶解，定量轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，再用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為100μg/mL的多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲備液。-20℃避光保存，有效期6個月。5.2.2多菌靈標(biāo)準(zhǔn)工作液（1μg/mL精密移取多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100μg/mL5.2.1）0.1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為1μg/mL的多菌靈標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用新配。5.3材料多菌靈膠體金免疫層析試紙條，適用基質(zhì)為生乳。需在陰涼、干燥、避光條件下保存。5.3.1金標(biāo)微孔（含膠體金標(biāo)記的特異性抗體）。5.3.2試紙條。6儀器與設(shè)備6.1電子天平：感量為0.01mg。6.2移液器：10μL～200μL、100μL～1000μL。6.3迷你金屬浴。6.4膠體金讀數(shù)儀（可選）。7分析步驟7.1試樣制備取適量有代表性樣品充分混勻。7.2試樣提取以生乳為基質(zhì)的樣品可直接上樣檢測或根據(jù)產(chǎn)品說明書稀釋后檢測。7.3測定步驟將檢測試紙條（5.3.2）樣品端垂直向下插入金標(biāo)微孔中，35℃溫育5min，取出試紙條，對結(jié)果進行判定。7.4質(zhì)控試驗每批樣品應(yīng)同時進行空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗。7.4.1空白試驗稱取空白試樣，按照7.2和7.3步驟與樣品同法操作。38結(jié)果判定通過對比質(zhì)控線(C線)和檢測線(T線)的顏色深淺進行結(jié)果判定。目視判定示意圖質(zhì)控線(C線)顯色，檢測線(T線)顏色深于質(zhì)控線(C線)或與質(zhì)控線(C線)顏色質(zhì)控線(C線)顯色，檢測線(T線)顏色淺于質(zhì)控線(C線)或不顯色，表明樣品中多質(zhì)控線(C線)不顯色，無論檢測線(T線)是否顯色，表明操作不正確或試紙條已失8.2讀數(shù)儀測定9結(jié)果確認(rèn)410性能指標(biāo)10.1檢出限：20μg/L。10.2靈敏度：≥95%。10.3特異性：≥90%。10.4假陰性率：≤5%。10.5假陽性率：≤10%。10.6交叉反應(yīng)率：苯菌靈≤80%，阿苯達唑≤15%。本方法所述試劑、試紙條信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不做限定。方法使用者應(yīng)使用經(jīng)過驗證的滿足本方法規(guī)定的各項性能指標(biāo)的試劑、試紙條。本方法參比方法為GB/T20772-2008《動物肌肉中461種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（包括所有的修改單）。5（規(guī)范性）快速檢測方法性能指標(biāo)計算快速檢測方法各個性能指標(biāo)計算方法見表A.1。表A.1快速檢測方法性能指標(biāo)計算方法N11N12N1.＝N11＋N12N21N22N2.＝N21＋N22N.1＝N11＋N21N.2＝N12＋N22N＝N1.＋N2.或N.1＋N.2＋＝pfN12/N1.×100＝100－靈敏度pfN21/N2