高中生物：微生物的應(yīng)用(試題部分)

第九單元生物技術(shù)實(shí)踐

專題26微生物的應(yīng)用

探考情悟真題

【考情探究】

5年考情

考點(diǎn)內(nèi)容要求預(yù)測熱度

考題示例素養(yǎng)要素難度

大腸桿菌

實(shí)驗(yàn)與探科學(xué)探究

的培養(yǎng)和2018浙江11月選考,32（一）,7分中★★★★☆

究能力科學(xué)思維

微生物的培養(yǎng)分離

和利用分離以尿

實(shí)驗(yàn)與探科學(xué)探究

素為氮源2016浙江10月選考,32（一）,7分中★★★★☆

究能力科學(xué)思維

的微生物

分析解讀本專題包括了微生物培養(yǎng)和分離的一般方法,選考中往往與生產(chǎn)生活相結(jié)合，側(cè)重于實(shí)際問題

的解決。預(yù)計(jì)今后的考查形式還是以非選擇題為主，可單獨(dú)考查，也可結(jié)合基因工程或食品加工等知識加以

考查。復(fù)習(xí)時(shí)重點(diǎn)掌握微生物培養(yǎng)和分離的相關(guān)操作技術(shù),注意區(qū)分劃線分離法和涂布分離法。

【真題探秘】

[2018浙江11月選考，32（一），7分]回答與微生物培養(yǎng)及應(yīng)用有關(guān)的問題：

（1）對培養(yǎng)基進(jìn)彳『高壓蒸汽灰菌而7頁菌肝荷顏時(shí)開始計(jì)時(shí)。Z（/%/而壓力）下火西/5min

對于不耐熱的液體培養(yǎng)基，一般可將其轉(zhuǎn)入曲麗施褊H幣丁菜百一君南新機(jī)施亞行一+QG6孔徑乘小，體函不能源電

過濾滅菌。

（2）與釀造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加的

過程。靈醴化醋桿菌培養(yǎng)基由蛋白陳、酵母提取物和tr標(biāo)面用就：真幣福窿訪詢前扈”一℃乩0,

_____________o?”一。指淀粉?分為加持

（3）為篩選胞外a-武谿罅豆總瘡菌神「二般雙二一，瓦巢鬲樹下…11.丙西而壬廣商畫

-允許口林微生物生慶，抑

廠周圍.枯樹周圍）獲得土樣，用無菌水稀釋，涂布到含有淀粉的選擇培雜盤隔耒「二

D制其他微生物生仄

段時(shí)間后在培養(yǎng)基表面滴加碘液，可在菌落周圍觀察到透明的水解圈：若要篩選酶活性較高

的菌種.需挑選若干個—比值大的菌落，分別利用液體培養(yǎng)基振菊培養(yǎng)

進(jìn)行擴(kuò)增。然后將培養(yǎng)液離心，取用于檢測酶活性。1

?核心考點(diǎn)3.特定微生物的分離技術(shù)◎試題精析

微生物的培養(yǎng)和利用?命題特點(diǎn)

參考答案及詳解參見P301

?知識儲備1.基礎(chǔ)性：考查微生物培養(yǎng)過程中基本的

操作方法和實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)

I.滅菌方法

2.果醋的制作2.靈活性：注重考查相關(guān)知識的遷移應(yīng)用

破考點(diǎn)練考向

考點(diǎn)微生物的培養(yǎng)和利用

【考點(diǎn)集訓(xùn)】

考向微生物的利用

1.（2019浙江綠色聯(lián)盟聯(lián)考,32）回答下列有關(guān)分離土壤中以尿素為氮源的微生物的實(shí)驗(yàn)：

⑴取1g土樣后用逐步稀釋,得到不同濃度的稀釋液,取樣時(shí)盡量只取。

（2）尿素溶液用（填工具）進(jìn)行滅菌,下列關(guān)于該滅菌操作的敘述錯誤的是。

A.固定化酶的滅菌可使用該法

B.該工具滅菌后需用鹽酸抽濾后直接干燥保存

C.其他培養(yǎng)基成分應(yīng)用高壓蒸汽法滅菌

D.菌液稀釋、接種等均應(yīng)在酒精燈火焰旁操作

（3）在合適的稀釋倍數(shù)下，培養(yǎng)基中的紅色圈直徑大小不一,說明不同菌落的微生物可能是同一種菌的不

同—，這種用于篩選高表達(dá)量微生物的方法稱為。

（4）若在10,濃度下培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)為13,則該1g土樣中含分解尿素微生物的數(shù)量約為個

/mL。

答案（1）無菌水懸液（2）G6玻璃砂漏斗B

（3）菌株單菌落分離（或涂布分離）（4）1.3X107

2.[2019浙江五校聯(lián)考,32（一）]某村莊有一條小溪,近幾年由于上游幾家乳膠廠不斷向其中排放廢水，小溪

變得不再清澈。某同學(xué)想測定該溪水中的細(xì)菌含量情況。回答下列問題：

（1）先根據(jù)所學(xué)知識制備LB培養(yǎng)基。制備該培養(yǎng)基的步驟:計(jì)算一稱量一溶化一滅菌一倒平板,下列關(guān)于制

備LB培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是（）

A.培養(yǎng)基應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌

B.培養(yǎng)基應(yīng)先滅菌再分裝到培養(yǎng)皿

C.融化瓊脂時(shí)不能使培養(yǎng)基溢出或燒焦

D.滅菌時(shí)一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121℃,500g/cnr'壓力下滅菌15分鐘

（2）該同學(xué)利用上述制備的培養(yǎng)基來檢測水樣中的細(xì)菌數(shù)量，他所選擇的分離方法應(yīng)是;該同學(xué)

在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是。接種

在超凈工作臺上進(jìn)行，工作臺上實(shí)驗(yàn)前一段時(shí)間需打開,實(shí)驗(yàn)中需關(guān)閉的是（A.酒精燈B.照明燈

C.紫外線D.過濾風(fēng)）。

（3）值得注意的是，他所選擇的這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際細(xì)菌的數(shù)目要低,這是因?yàn)?/p>

①:②

（不考慮實(shí)驗(yàn)操作原因引起的細(xì)菌數(shù)目的變化）。

(4)該同學(xué)欲將所分離出的某種細(xì)菌臨時(shí)保藏,應(yīng)接種到試管的培養(yǎng)基上,等菌落長成后,放入冰箱

低溫保臧。

答案(1)0

⑵涂布分離法檢查平板滅菌是否徹底C

(3)①該方法只能統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目,死菌無法統(tǒng)計(jì)

②當(dāng)兩個或多個細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個菌落

⑷斜面

煉技法提能力

方法區(qū)分消毒與滅菌

【方法集訓(xùn)】

1.細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理,這些方法依次用于殺滅哪些部

位的雜菌()

A.接種環(huán)、手、培養(yǎng)基B.高壓鍋、手、接種環(huán)

C.培養(yǎng)基、手、接種環(huán)D.接種環(huán)、手、高壓鍋

答案C

2.(2020屆浙江七彩陽光高三聯(lián)考,7)以下關(guān)于G6玻璃砂漏斗過濾滅菌的敘述,錯誤的是()

A.G6玻璃砂漏斗孔徑小,細(xì)菌不能濾過

B.滅菌前應(yīng)將漏斗用鹽酸浸泡和抽濾去酸

C.過濾時(shí)可采用抽濾方式加快滅菌速率

D.該滅菌方法適用于加熱易分解物質(zhì)的滅菌

答案B

【五年高考】

A組自主命題?浙江卷題組

考點(diǎn)微生物的培養(yǎng)和利用

1.[2018浙江11月選考,32(-),7分]回答與微生物培養(yǎng)及應(yīng)用有關(guān)的問題：

(1)對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí),滅菌時(shí)間應(yīng)從時(shí)開始計(jì)時(shí)。對于不耐熱的液體

培養(yǎng)基，一般可將其轉(zhuǎn)入G6玻璃砂漏斗中,采用方式可較快地進(jìn)行過濾滅菌。

(2)與釀造果醋相比,利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋,需增加的過程。某醋化醋

桿菌培養(yǎng)基由蛋白陳、酵母提取物和甘露醇組成,其中甘露醇的主要作用是。

(3)為篩選胞外a-淀粉酶分泌型菌種,一般從(A.果園樹下B.肉類加工廠周圍C.米酒廠周圍D.

枯樹周圍)獲得土樣,用無菌水稀釋，涂布到含有淀粉的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，一段時(shí)間后在培養(yǎng)基表面滴加碘

液，可在菌落周圍觀察到水解圈。若要篩選酶活性較高的菌種,需挑選若干個比值

大的菌落,分別利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)增。然后將培養(yǎng)液離心,取用于檢測酶活性。

答案(1)達(dá)到設(shè)定的溫度或壓力值抽濾

(2)將淀粉分解為葡萄糖作為碳源

(3)C水解圈直徑與菌落直徑上清液

2.[2016浙江10月選考,32(-),7分]請回答從土壤中分離產(chǎn)眼酶細(xì)菌和眼酶固定化實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問題：

(DLB固體培養(yǎng)基:取適量的蛋白月東、酵母提取液、NaCL加入一定量的蒸儲水溶解,再加,滅菌

備用。

(2)尿素固體培養(yǎng)基:先將適宜濃度的尿素溶液，用滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾,因?yàn)镚6玻璃砂漏

斗,故用于過濾除菌,然后將尿素溶液加到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中,備

用。

(3)取適量含產(chǎn)眠酶細(xì)菌的10,IO,兩種土壤稀釋液,分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上,

培養(yǎng)48h,推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)最少的是(A.KT稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基B.10-6

稀釋液+LB固體培養(yǎng)基C.10,稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基D.10-稀釋液+LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培

養(yǎng)基上產(chǎn)腺酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的眼酶催化尿素分解產(chǎn)生了。

(4)制備固定化臟酶時(shí),用石英砂吸附腑酶,裝柱。再用蒸儲水洗滌固定化酶柱,其作用

是O

答案Q)瓊脂(2)高壓蒸汽孔徑很小,細(xì)菌不能濾過(3)A紅色環(huán)帶氨(或NH)(4)除去游離

的的酶

B組統(tǒng)一命題、省(區(qū)、市)卷題組

考點(diǎn)微生物的培養(yǎng)和利用

1.(2019課標(biāo)全國III,37,15分)回答下列與細(xì)菌培養(yǎng)相關(guān)的問題。

⑴在細(xì)菌培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)基中能同時(shí)提供碳源、氮源的成分是(填“蛋白月東”“葡萄糖”或

“NaNOJ)0通常,制備培養(yǎng)基時(shí)要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,其原因

是。硝化細(xì)菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上(填“能夠”或“不

能“)生長,原因是。

(2)用平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)一般需要將平板(填“倒置”或“正置”兀

(3)單個細(xì)菌在平板上會形成菌落,研究人員通常可根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種

的微生物,原因是?

(4)有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過處理,這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。

答案(1)蛋白陳不同細(xì)菌生長繁殖所需的最適PH不同

能夠硝化細(xì)菌可以利用空氣中的C(M乍為碳源⑵倒置⑶在一定的培養(yǎng)條件下,不同種微生物表現(xiàn)出

各自穩(wěn)定的菌落特征(4)滅菌

2.（2019課標(biāo)全國II,37,15分）物質(zhì)W是一種含氮有機(jī)物,會污染土壤。W在培養(yǎng)基中達(dá)到一定量時(shí)培養(yǎng)基

表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解W的細(xì)菌（目標(biāo)菌）?；卮鹣铝袉栴}。

（1）要從土壤中分離目標(biāo)菌，所用選擇培養(yǎng)基中的氮源應(yīng)該是。

（2）在從土壤中分離目標(biāo)菌的過程中,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上甲、乙兩種細(xì)菌都能生長并形成菌落（如圖所示）。如果

要得到目標(biāo)菌,應(yīng)該選擇菌落進(jìn)一步純化,選擇的依據(jù)

是O

（3）土壤中的某些微生物可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈础Ｈ粢O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定甲、乙菌能否利用空氣

中的氮?dú)庾鳛榈?請簡要寫出實(shí)驗(yàn)思路、預(yù)期結(jié)果和結(jié)論，

即_________________________________________________________________________________________

（4）該小組將人工合成的一段DNA轉(zhuǎn)入大腸桿菌，使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶（酶E）。為了比較酶E與天

然酶降解W能力的差異,該小組擬進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn),請完善相關(guān)內(nèi)容。

①在含有一定濃度W的固體培養(yǎng)基上,A處滴加含有酶E的緩沖液,B處滴加含有相同濃度天然酶的緩沖液,C

處滴加,三處滴加量相同。

②一段時(shí)間后,測量透明圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透明圈,說明;若A、B處形成

的透明圈直徑大小相近，說明。

答案（DW（2）乙乙菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明乙菌能降解W⑶將甲、乙菌分別接種在無氮源培養(yǎng)基

上,若細(xì)菌能生長，則說明該細(xì)菌能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗?）①緩沖液②緩沖液不能降解W酶E

與天然酶降解W的能力相近

3.（2018課標(biāo)全國II,37,15分）在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中,經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。

回答下列問題：

（1）在實(shí)驗(yàn)室中,玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具（填“可以”或“不可以”）放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干

熱滅菌。

（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法,與煮沸消毒法相比,這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)

是O

（3）密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒,其原因是紫外線能°在照射前,適量噴

灑,可強(qiáng)化消毒效果。

⑷水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過（填“氨氣”“乙醇”或“高鎰酸鉀”）消毒的。

（5）某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因

是O

答案Q）可以（2）在達(dá)到消毒目的的同時(shí)，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少（3）破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液（4）氯氣

（5）未將鍋內(nèi)冷空氣排盡

C組教師專用題組

1.(2015浙江自選，17,10分)某工廠為了生產(chǎn)耐高溫植酸酶料添加劑，開展了產(chǎn)該酶菌株

的篩選、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下圖所示：

土樣中的植酸酶

菌種篩選特性分析

(1)土壤懸液首先經(jīng)80℃處理15分鐘，共目的是篩選出①o

(2)在無菌條件下，將經(jīng)過處理的土壤懸液進(jìn)行②,然后涂布于含有植酸鈉的固體培養(yǎng)基上。培

養(yǎng)后觀察到③,其周圍出現(xiàn)透明水解圈，圈的直徑大小與④____強(qiáng)弱有關(guān)。

(3)篩選獲得的菌株經(jīng)鑒定后，將優(yōu)良菌株進(jìn)行液體擴(kuò)大培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)需要振蕩，其主要目的是⑤.

―。液體培養(yǎng)基與固體培養(yǎng)基相比，不含有的成分是⑥。

(4)在合適條件下，將提純的植酸酶與海藻酸鈉混合后，滴加到一定濃度的鈣離子溶液中，使液滴形成

凝膠固體小球。該過程是對酶進(jìn)行⑦。

A.吸附B.包埋C.裝柱D.洗滌

(5)溫度與植酸酶相對于酶活性的關(guān)系如圖所示。下列敘述錯誤的是⑧o

(

東

)

基

里

避

襲

至

溫度(七)

A.測試溫度中，固定化與非固定化植酸酶的最適溫度分別為60°C和45°C

B.測試溫度范圍內(nèi)，固定化植酸酶的相對酶活性波動低于非固定化植酸酶

C.固定化與非固定化植酸酶相比，相對酶活性在80%以上時(shí)的溫度范圍較寬

D.65℃時(shí)固定化與非固定化植酸酶的相對酶活性因蛋白質(zhì)變性而位于最低點(diǎn)

答案(1)①耐高溫菌株

(2)②稀釋③單菌落④植酸酶的活性

(3)⑤供氧⑥瓊脂

(4)⑦B(5)⑧D

2.(2012浙江自選,17,10分)幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)

采集樣本并制成菌液后,進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：

|配制培養(yǎng)滅菌、倒平^一麻一福

請回答：

⑴在配制培養(yǎng)基時(shí),要加入尿素和酚紅指示劑,這是因?yàn)镠p含有①,它能以尿素作為氮源;若有Hp,

則菌落周圍會出現(xiàn)②色環(huán)帶。

(2)下列對尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是③滅菌。

A.高壓蒸汽B.紫外燈照射

C.70%酒精浸泡D.過濾

(3)步驟X表示④。在無菌條件下操作時(shí),先將菌液稀釋,然后將菌液⑤到培養(yǎng)基平面上。

菌液稀釋的目的是為了獲得⑥菌落。

(4)在培養(yǎng)時(shí),需將培養(yǎng)皿倒置并放在⑦中。若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致⑧。

⑸臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測人體是否感染Hp,其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的⑨分解為附和

I4

C02O

答案(1)①眼酶②紅

⑵③D

(3)④接種⑤涂布⑥單

(4)⑦恒溫培養(yǎng)箱⑧無法形成單菌落

⑸⑨尿素

【三年模擬】

時(shí)間：25分鐘分值:45分

一、選擇題(每小題5分共5分)

1.(2020屆浙江嘉興高三9月測試,17)如圖是劃線分離法接種微生物的示意圖,下列敘述錯誤的是()

A.該接種過程一般需灼燒接種環(huán)5次

B.劃線結(jié)束可看到劃線末端出現(xiàn)不連續(xù)單菌落

C.若培養(yǎng)的是尿素分解菌，可加入酚紅指示劑

D.該接種方法不能準(zhǔn)確計(jì)數(shù)培養(yǎng)液中微生物數(shù)量

答案B

二、非選擇題(共40分)

2.（2020屆浙江嘉興高三9月測試,29）（8分）回答與微生物培養(yǎng)、果膠提取及果酒制作有關(guān)的問題。

（1）在豆芽汁中加入一定量蔗糖和瓊脂,用蒸儲水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基。

①M(fèi)培養(yǎng)基如用于培養(yǎng)霉菌,在培養(yǎng)基滅菌_（選填"前”或“后”）要把培養(yǎng)基的pH調(diào)至（選填

“中性偏酸”“中性”或“中性偏堿”）。

②欲從土壤中分離出產(chǎn)淀粉酶的微生物,在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,并加入顯色劑，接種土壤稀釋液并

培養(yǎng)。加入的顯色劑是,在產(chǎn)淀粉酶微生物的菌落周圍會形成O

（2）柚皮富含果膠,將柚皮汁進(jìn)行過濾，加入出現(xiàn)絮狀沉淀,再經(jīng)和脫水得到果膠干制

品。

（3）利用葡萄勻漿釀制葡萄酒的兩個簡易裝置如圖所示.

①與甲裝置相比,乙裝置的優(yōu)點(diǎn)有:避免發(fā)酵瓶中氣壓過高；（寫出一點(diǎn)即

可）。

②某同學(xué)用乙裝置制備果酒,實(shí)驗(yàn)開始后3天內(nèi)都未看到氣泡冒出。欲使發(fā)酵盡快發(fā)生，你的建議

是?

答案（8分，每空1分）

（1）①前中性偏酸②碘一碘化鉀溶液透明圈

⑵無水乙醇過濾

（3）①避免因開蓋放氣導(dǎo)致雜菌污染②加入更多的酵母

3.（2019浙江金麗衢十二校聯(lián)考,32）（7分）某同學(xué)要從土壤中分離出能分解尿素的細(xì)菌,并統(tǒng)計(jì)單位體積土

壤樣液的活菌數(shù)目。按照培養(yǎng)基的配方稱取,并將各種物質(zhì)溶解后，用蒸儲水定容、滅菌,制成固體培養(yǎng)基備

用?；卮饐栴}：

（1）配制該培養(yǎng)基應(yīng)加入的凝固劑和顯色劑分別是,加入培養(yǎng)基的三角瓶需用蓋上后

滅菌。

（2）培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌時(shí),在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。采用的檢測方法

是O

（3）若要統(tǒng)計(jì)土壤樣品中尿素分解菌的數(shù)目,宜采用法接種,根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋

液的體積,統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)目就能大約推測出樣品中的活菌數(shù)。一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為10'的培養(yǎng)基中測

得平板上菌落數(shù)的平均值為24.6,則每升樣品中的活菌數(shù)是。與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比,此計(jì)數(shù)

方法測得的菌體數(shù)較，其原因是一

答案（1）瓊脂糖和酚紅（順序顛倒不得分）封口膜⑵將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜的時(shí)間

（或：37。恒溫箱中培養(yǎng)），觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生（3）涂布2.46X109少由于兩個或多個細(xì)菌

連接在一起,往往統(tǒng)計(jì)的是一個菌落或死菌未計(jì)入,故用此方法測得的細(xì)菌數(shù)偏低（其他合理答案酌情給分）

4.(2020屆浙江名校新高考研究聯(lián)盟一模,29)(10分)乳酸菌指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類革蘭氏陽性

細(xì)菌的總稱，經(jīng)革蘭氏染色后呈紫色。分離乳酸菌常用MRS固體培養(yǎng)基:蛋白臍5g、牛肉膏5g、酵母提取

物2.5g、檸檬酸二錢1g、水500皿、乙酸鈉2.5g、KzHPOJg、MnS04-4H200.12g、瓊脂12.5g、MgSO「7H20

0.29g、CaC035g、葡萄糖10g。請回答：

(l)MRS培養(yǎng)基中瓊脂的作用是。MRS培養(yǎng)基需要用高壓蒸汽滅菌法滅菌,滅菌時(shí)設(shè)置的壓力和時(shí)間

分別為、。滅菌后制作平板用于實(shí)驗(yàn),對平板進(jìn)行無菌檢測的方法

是。使用涂布分離法分離乳酸菌，培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)平板

上形成的單菌落周圍會產(chǎn)生CaCO,溶解圈，溶解圈大小能夠反映。

(2)若用革蘭氏染色法對大腸桿菌進(jìn)行染色，結(jié)果(填“呈紫色”或“不呈紫色”)。

(3)用乳酸菌制作酸乳時(shí)，可對乳酸菌進(jìn)行固定化處理，方法:稱取適量海藻酸鈉配成水溶液,加入乳酸菌并

攪拌均勻,以一定速度滴入CaCL溶液中形成凝膠，使其凝固成珠狀。上述采用的固定方法是,凝珠

撈出后要用無菌水沖洗,目的是洗去。

(4)乳酸菌可用于泡菜的制作,在對泡菜作亞硝酸鹽定量檢測時(shí),若樣液測定時(shí)的比色杯光程小于制作標(biāo)準(zhǔn)

曲線時(shí)的比色杯光程，則測得的樣液中亞硝酸鹽含量(填“偏大”“偏小”或“不影響”)；若泡菜

樣液測得的0D值過大。超出標(biāo)準(zhǔn)曲線,則最適宜的做法是o

答案(1)凝固劑500g/cm230min將空白平板置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，觀察有無雜菌生長乳

酸菌產(chǎn)乳酸的量的大小(答“乳酸菌產(chǎn)乳酸的能力的大小”給分)

⑵不呈紫色

(3)包埋法凝珠表面的CaCb溶液

(4)偏小對樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋

5.[2019浙江七彩陽光聯(lián)考,32(-)](7分)回答下列與分離以尿素為氮源的微生物有關(guān)的問題：

(1)有些細(xì)菌含有,它們可以通過降解尿素作為其生長的氮源。請用化學(xué)反應(yīng)式表示這類細(xì)菌降解

尿素的過程:O

(2)本實(shí)驗(yàn)需通過比較尿素固體培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，了解土壤稀釋液中能以尿素為氮源的

微生物的比例,因此要用(填方法)進(jìn)行接種。配制培養(yǎng)基時(shí)選擇瓊脂糖作為凝固劑的原因

是。尿素溶液的滅菌選擇的方法是。

(3)已知氨與納氏試劑反應(yīng)生成淡紅色絡(luò)合物。為了定量測定所分離的微生物對尿素的降解能力,可選用液

體培養(yǎng)基培養(yǎng),并利用光電比色法測定培養(yǎng)液N出的含量。步驟如下：

第一步，預(yù)實(shí)驗(yàn)。將培養(yǎng)液過濾和脫色處理后，用納氏試劑顯色處理。用光程為1cm的比色杯在570nm處

測定光密度值。若光密度值偏低,應(yīng)選擇(A.增大光程，光波長不變B.增大光程，光波長增加C.

減小光程,光波長不變D.減小光程,光波長增加),再次測定光密度值,直到數(shù)據(jù)適宜為止。

第二步,標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。用蒸儲水配制,與苗三酮試劑反應(yīng)后,用比色計(jì)測

定,并制作以氨濃度與光密度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

第三步,樣品處理。將培養(yǎng)液過濾后,進(jìn)行脫色處理,用納氏試劑顯色處理。

第四步,樣品測定與計(jì)算。

答案（1）版酶（NH“￡=O+Ha-2NH3+C0,（2）涂布分離法瓊脂糖中不含N元素用G6