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DB34DB34/T3284—2018豬丹毒絲菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofErysipelothrixrhusiopathiae2018-12-29發(fā)布2019-01-29實(shí)施安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬丹毒絲菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法的縮略語、試劑和儀器、樣品的采集、運(yùn)輸GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)Ct值：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號量達(dá)到設(shè)定的閾值4.1.275％乙醇:用新開啟的無——上游引物：5′-GTGGCGCATATAATCCCGTA-3′——下游引物：5′-GCAAACGCAATGG4.1.62×TransTaq-TPCRSupe24.2.4冰箱2℃~8℃,-20℃,-80℃)。4.2.7恒溫水浴鍋（室溫至100℃)。4.2.10混勻器5.2.1剪刀、鑷子、注射器、1.5mL5.2.2所有上述采樣工具必須經(jīng)(121士2)℃,15min高壓滅菌并烘干。用無菌注射器直接吸取至無菌Eppendorf管，分離血清。或用加有抗凝劑的注射器直接吸取菌Eppendorf管，充分混合。抗凝劑采用檸檬酸鈉緩沖液，或0.5mol/LEDTA。每6mL血液加1mL5.3.3細(xì)菌培養(yǎng)物直接取液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌液。對于在固體培養(yǎng)基上生長的菌落，用接種棒挑取適量菌樣，放入采集的樣品應(yīng)置于低溫、密封的容器內(nèi)運(yùn)輸。待檢樣品在2℃~8℃條件下保存不應(yīng)超過24h；若3離心10min,棄上清，若紅細(xì)胞裂解不完全，出現(xiàn)紅色沉淀物，則需采用滅菌雙蒸水重復(fù)洗滌；收集45緩沖液的配制A.1.1成分A.1.2制法A.2.1成分A.2.2制法A.3.1成分A.3.2制法6A.4.1成分A.4.2制法稱取380～390g氯化鈉溶于蒸餾A.5.1成分A.5.2制法7B.1.1.2閾值設(shè)定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)，不同儀器可根據(jù)儀B.1.3.2陽性反應(yīng)結(jié)果判定：檢測結(jié)果呈現(xiàn)Ct值≤30并出現(xiàn)特

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