DB3705-T 17-2024 白榆組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

DB3705TechnicalRegulationsforTissueCultureandShootsBreedingofUlmuspumⅠ 1 1 1 2 2 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 6 7 9本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由東營(yíng)市自然資源和規(guī)劃局提出、歸口并組劉全全、陳紀(jì)香、孫兆楠、王銀娟、唐輝、秦麗君、任愛鳳、王健、魏超、燕友福、崔曉東。1白榆組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了白榆（UlmuspumilaL.）組織培養(yǎng)育苗過程中的術(shù)語和定義、實(shí)驗(yàn)器皿及材料的清洗和滅菌、培養(yǎng)基的配制、外植體選擇與處理下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期增殖培養(yǎng)multiplication鍛煉的過程，使其定植后能夠迅速適應(yīng)容器外界的24組培工具及材料的清洗和滅菌4.1實(shí)驗(yàn)器皿、工具的清洗4.1.1浸泡1%～2%的鹽酸溶液中浸泡過夜；用過的培養(yǎng)瓶須先將瓶外字跡擦除干凈再浸泡；污染的培養(yǎng)瓶須先將瓶4.1.2洗刷清洗玻璃器皿及接種工具上的培養(yǎng)基，洗凈后自來水沖洗3遍~5遍，后4.1.3清潔標(biāo)準(zhǔn)4.2消毒滅菌4.2.1操作室、接種室及培養(yǎng)室熏蒸、輻射滅菌 超凈工作臺(tái)接種前用紫外燈照射20min~30min，并用75％酒精噴灑和擦拭臺(tái)面；定期清洗4.2.2器皿、器械、培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)基滅菌器皿、器械、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基及添加劑等滅菌可采用濕熱、干熱、灼5培養(yǎng)基的配制5.1母液配制及貯存5.1.1母液配制5.1.1.1培養(yǎng)基母液配制5.1.1.2植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液配制植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的母液配制方法參照附錄5.1.2母液的保存母液保存參照附錄B相關(guān)內(nèi)容，貼好標(biāo)簽，注明母液的名稱、濃度、溶劑類型、配制日期和配制人等35.2培養(yǎng)基配制及保存5.2.1配制前準(zhǔn)備5.2.2配制定容先將白砂糖充分?jǐn)嚢柰耆芙?，后加入母液不耐高溫滅菌的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑需用過濾滅菌方式加），5.2.4瓊脂溶解瓶口，待內(nèi)壁水汽吹干后再蓋好瓶蓋或捆綁封口膜，對(duì)培養(yǎng)基5.2.6滅菌5.2.7貯存時(shí)間不應(yīng)超過15d。4月至5月份，幼齡單株作為母體，挑選健康幼態(tài)的芽蟲害的當(dāng)年生半木質(zhì)化小枝，將枝條保濕保存水洗凈表面灰塵和菌體，洗凈后，流水沖洗0.54快速將滅菌莖段的兩端分別切掉2mm~3mm，余下的莖段含1個(gè)~2個(gè)側(cè)芽。將基中，每瓶培養(yǎng)基均勻放置5個(gè)外植體，芽端在上，蓋緊瓶蓋或捆綁封口膜，標(biāo)明編號(hào)，進(jìn)行無菌苗的培置于溫度25℃±2℃,光照強(qiáng)度2000lx~3000lx，相對(duì)濕度75%~85%，光照時(shí)間14h的環(huán)境下培養(yǎng)。d時(shí)，莖段上芽萌動(dòng)，莖尖伸長(zhǎng)，基部產(chǎn)生少量愈傷組織。當(dāng)腋增殖培養(yǎng)使用MS改良培養(yǎng)基+6-BA0.3mg/L+KT0.1mg/L+白砂糖在無菌環(huán)境下，將誘導(dǎo)出的新梢，切成帶1個(gè)~2個(gè)腋芽的長(zhǎng)2cm左右的莖段，快速放置到增殖培養(yǎng)基上，每瓶培養(yǎng)基均勻放置5個(gè)外植體，蓋緊瓶蓋或捆綁封口膜，標(biāo)明編號(hào)，進(jìn)行無菌苗的8.3培養(yǎng)培養(yǎng)條件同7.3。25d~30d繼代一次，繁殖系數(shù)以5~8較為適宜。繼代時(shí)將0切下，選擇1cm以上的增殖芽接種到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)。pH5.8~6.0。將0.5cm~2.5cm的叢生芽分株切9生根培養(yǎng)9.1生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)使用MS培養(yǎng)基+IBA0.01mg/L+白砂9.2外植體接種據(jù)培養(yǎng)瓶大小均勻放置外植體，蓋緊瓶蓋或捆綁封口膜，標(biāo)明編9.3培養(yǎng)培養(yǎng)條件同7.3。培養(yǎng)10d~15d時(shí)，組培苗開始產(chǎn)缺水干枯。光照強(qiáng)度1500lx~2000lx左右，溫度保持20℃~30℃,相對(duì)濕度80%~90%。洗凈根部瓊脂，將生根苗置溫室苗床煉苗2周，初期需用遮陽網(wǎng)遮陰，半開瓶鍛煉，一周后逐步將瓶根據(jù)生根苗高和根生長(zhǎng)情況進(jìn)行移栽前的分級(jí)。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照倍液多菌靈或甲基托布津消毒滅菌?；|(zhì)采用細(xì)沙：營(yíng)養(yǎng)土=1:1，添加少量木霉菌或芽孢桿菌菌劑，提高移栽苗成活率。移栽完成后澆一遍透水。當(dāng)小苗長(zhǎng)至10cm即可出苗，期間注意溫度在20℃~25℃,濕度移栽后每隔5天噴施多菌靈800倍液或70小苗經(jīng)過溫室的苗期培育后可根據(jù)不同規(guī)格直接裝箱進(jìn)行圃地移栽，對(duì)圃地的要求參見GB6MS培養(yǎng)基母液配制見表B.1。