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文檔簡介
ICS67.220
CCSX04
T/BPMA
北京預防醫(yī)學會團體標準
T/BPMAXXXX—XXXX
火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的測
定液相色譜-串聯(lián)質譜法
Determinationofhigenamineandtretoquinolincondimentsbyultra
highperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry
(征求意見稿）
XXXX年XX月XX日發(fā)布XXXX年XX月XX日實施
北京預防醫(yī)學會發(fā)布
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火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的測定
液相色譜-串聯(lián)質譜法
1范圍
本文件規(guī)定了火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚液相色譜-串聯(lián)質譜的檢測方法。
本文件適用于火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的測定。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過本文的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中凡是注日期的引
用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改
單）適用于本文件。
GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3術語和定義
本文件沒有需要界定的術語和定義
4方法原理
火鍋底料中的去甲烏藥堿和曲托喹酚，用含5%甲酸的乙醇溶液提取，經(jīng)C18、GCB以及EMR組
合填料凈化后，采用液相色譜串聯(lián)質譜法測定，內(nèi)標法定量。
5試劑和材料
除另有說明外，所用試劑均為優(yōu)級純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水
5.1試劑
5.1.1甲醇（CH3OH）：色譜純。
5.1.2乙醇（C2H5OH）：色譜純。
5.1.3甲酸（CH3COOH）：色譜純。
5.1.4甲酸銨（NH4HCO3）：色譜純。
5.2溶液配制
5.2.1含5%甲酸的乙醇溶液：取甲酸12.5mL，用乙醇定容至250mL容量瓶中，混勻。
5.2.210mmol/L甲酸銨水溶液（含0.1%甲酸）：稱取0.315g甲酸銨溶解于500mL水中，加入0.5
mL甲酸，0.22μm聚醚砜微孔濾膜過濾。
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5.3標準品
標準物質：去甲烏藥堿（CAS：5843-65-2）；曲托喹酚鹽酸鹽（CAS：18559-59-6；去甲烏藥
堿-D4（CAS：2249814-83-1）、曲托喹酚鹽酸鹽-D9（CAS：18559-63-2），純度均≥99.0%。
5.4標準溶液的制備
5.4.1標準儲備液：分別準確稱取按其純度折算為100%的去甲烏藥堿、曲托喹酚鹽酸鹽、去甲烏藥
堿-D4、曲托喹酚鹽酸鹽-D9標準物質10mg，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶，得到1000mg/L
標準儲備液，-20℃避光保存。
5.4.2混合標準儲備液：分別準確移取兩種標準儲備液各100μL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至
刻度，配制成10μg/mL的混合標準儲備溶液。
5.4.3混合標準儲備液：準確移取混合標準儲備溶液（10μg/mL）100μL于10mL容量瓶中，用甲
醇定容至刻度，配制成100ng/mL的混合標準儲備溶液。
5.4.4混合內(nèi)標標準溶液：準確移取去甲烏藥堿-D4和曲托喹酚鹽酸鹽-D9標準溶液各100μL于10
mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到10mg/L混合內(nèi)標標準儲備溶液。
5.4.5混合內(nèi)標工作溶液：準確移取10mg/L混合內(nèi)標標準儲備溶液1.0mL于10mL容量瓶中，用
甲醇定容至刻度，得到1mg/L混合內(nèi)標工作溶液。
5.4.6取適量混合標準溶液和混合內(nèi)標工作溶液，用甲醇+10mmol/L甲酸銨水溶液（含0.1%甲酸）
（1+1）稀釋配制成濃度為0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL的系列標準工作溶
液，其中內(nèi)標濃度為5ng/mL。
5.5材料
5.5.1石墨化碳黑（120μm~400μm）。
5.5.2十八烷基鍵合硅（40μm~60μm）。
5.5.3EMR凈化材料。
6儀器和設備
6.1超高效液相色譜儀串聯(lián)三重四極桿質譜儀；
6.2離心機；
6.3恒溫水浴氮吹儀；
6.4多管渦旋混勻儀；
6.5渦旋混合器；
6.6超聲波清洗器；
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7試樣制備和保存
7.1試樣制備
取適量代表性樣品，用攪碎機充分攪碎混勻（塊狀樣品需先在60℃水浴中融化后再用攪碎機充
分攪碎混勻；組合包裝樣品需將干制蔬菜包、干制菌菇包等全部料包倒入攪碎機內(nèi)攪碎混勻），分
成適量等份，并標明標記。
8測定步驟
8.1樣品的處理
8.1.1提取
稱取試樣2g（精確到0.01g）于50mL的具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中，準確加入100μL1mg/L
混合內(nèi)標工作溶液，加入20mL含5%甲酸的乙醇溶液，渦旋混勻，振蕩提取30min，8000r/min離
心5min。
8.1.2凈化
移取2.0mL上清液于含有10mL的凈化管中，加入65mgGCB、65mgC18和65mgEMR，渦
旋混合，8000r/min離心5min，移取1.0mL上清液，氮氣吹至近干，用1.0mL甲醇+10mmol/L甲
酸銨水溶液（含0.1%甲酸）（1+1）定容，渦旋30s，0.22μm尼龍微孔濾膜過濾，供高效液相色譜
串聯(lián)質譜測定。
8.2空白試驗
除不稱取試樣外，均按8.1的步驟進行。
8.3儀器分析條件
8.3.1液相色譜條件
a)色譜柱：ACQUITYUPLCHSST3色譜柱，1.8μm，100mm×2.1mm
b)柱溫：30℃；
c)進樣量：5μL；
d)流速：0.3mL/min，梯度洗脫程序見表1。
表1HPLC梯度洗脫條件
10mmol/L甲酸銨水溶液
時間（min）甲醇（%）
（含0.1%甲酸）（%）
0.0397
1.5397
5.5955
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5.6397
7.5397
8.3.2質譜條件
a)離子源：電噴霧離子源，正離子掃描（ESI+）；
b)檢測方式：多重反應監(jiān)測（MRM）；
c)毛細管電壓：3.0kV；
d)離子源溫度：150℃；
e)脫溶劑溫度：500℃；
f)脫溶劑氣流量：800L/hr；
g)錐孔氣流量：50L/hr；
h)碰撞氣體：氬氣；
i)甲烏藥堿和曲托喹酚的MRM參數(shù)見表2。
表2甲烏藥堿和曲托喹酚的MRM參數(shù)
序號被測物定量離子對（m/z）CV/CE定性離子對（m/z）CV/CE
1去甲烏藥堿272.4>107.240/20272.4>161.240/18
2去甲烏藥堿-D4276.5>108.340/20276.5>164.340/18
3曲托喹酚346.5>164.26/14346.5>149.16/5
4曲托喹酚-D9355.6>164.112/16355.6>137.112/46
8.4定性判定
用液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用法對試樣進行定性判定，在相同試驗條件下，樣液譜圖中應呈現(xiàn)定量
離子對和定性離子對的色譜峰，被測物質的質量色譜峰保留時間與標準溶液中對應物質的色譜峰保
留時間偏差在±5%之內(nèi)；試樣色譜圖中所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度與相當濃度標準溶液的離子
相對豐度比的偏差不超過表3規(guī)定范圍，則可以判斷試樣中存在對應的目標物質。
表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差
相對離子豐度/%>5020~50（含）10~20（含）≤10
允許的相對偏差/%±20±25±30±50
8.5定量測定
在儀器最佳工作條件下，將系列標準工作溶液由低濃度至高濃度依次注入液質聯(lián)用儀后，以標
準工作液濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對試樣進行內(nèi)標
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法定量，試樣溶液中待測物的響應值均應在儀器測定的線性范圍內(nèi)。2種被測物質的多反應監(jiān)測
（MRM）色譜圖參見附錄A。
9結果計算和表述
結果按式（1）計算：
X....................（1）
晦晦晦
式中:=