TGXAS-抗血液型膿病家蠶品種種性保持技術(shù)規(guī)程

Q/LB.□XXXXX-XXXXT/GXASXXXX—XXXX前言本文件參照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出、歸口并宣貫。本文件起草單位：廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站、興業(yè)縣華盛蠶業(yè)科技有限責(zé)任公司、河池市蠶業(yè)技術(shù)推廣站。本文件主要起草人：浦月霞、黃文功、蘭艷妮、安春梅、李楓燁、吳靜顏、黃紅燕、黃揚(yáng)玉、譚福洋、蘇紅梅、黃凌、劉艷偉、閉立輝、張桂征、毛洪斌、韋博尤、黃玲莉、蒙藝英、羅群、楊其保、黃勝、陶積陽(yáng)、陸俁伽、黃康東、石海潛、石韡韜、覃龍偉、陳振烽、熊碧蘭?？寡盒湍摬〖倚Q品種種性保持技術(shù)規(guī)程范圍本文件確立了抗血液型膿?。˙ombyxmorinucleopolyhedr-ovirus，BmNPV）家蠶品種種性保持技術(shù)的程序，界定了抗BmNPV家蠶品種種性保持技術(shù)涉及的術(shù)語(yǔ)和定義，規(guī)定了設(shè)施設(shè)備及人員、種性保持原則的要求，以及出庫(kù)催青、收蟻、飼育、抗BmNPV測(cè)試、上蔟采蠶、蔟中管理、種繭調(diào)查、蛾區(qū)初選、蛾區(qū)復(fù)選、繭（蛹）個(gè)體選擇、交配制種、蠶種保護(hù)、冷藏、浸酸和蠶種檢疫等操作指示。本文件適用于廣西行政區(qū)域內(nèi)抗血液型膿病家蠶品種種性的保持。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。DB45/T82桑蠶種檢驗(yàn)檢疫技術(shù)規(guī)程DB45/T83種繭育養(yǎng)蠶技術(shù)規(guī)程DB45/T84桑蠶種保護(hù)、冷藏、浸酸技術(shù)規(guī)程DB45/T90桑蠶種質(zhì)量術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。蠶血液型膿病Bombyxmorinucleopolyhedr-ovirus，BmNPV家蠶核型多角體病毒寄生在血細(xì)胞和體腔內(nèi)各種組織細(xì)胞的細(xì)胞核中，并在其中形成多角體，稱(chēng)為核型多角體病，也稱(chēng)血液型膿病，英文簡(jiǎn)稱(chēng)BmNPV。

抗血液型膿病家蠶品種BmNPV-resistantsilkwormvarieties對(duì)家蠶核型多角體病毒經(jīng)口感染有一定抵抗性的蠶品種。單蛾育singlebatchrearing以一只雌蛾所產(chǎn)的蠶卵為一個(gè)群體，將孵化的蟻蠶作為一個(gè)飼育區(qū)進(jìn)行飼育，稱(chēng)為蛾區(qū)育，也叫單蛾育。

異品系交配exogamy同一品種兩個(gè)不同品系的雌雄蛾進(jìn)行的交配。

異蛾區(qū)交配interbatchmating同一品種或同一品系的兩個(gè)不同蛾區(qū)的雌雄蛾進(jìn)行的交配。

實(shí)用孵化率practicalhatchability在標(biāo)準(zhǔn)催青條件下，連續(xù)二日孵化蟻蠶的數(shù)量占良卵總數(shù)的百分比。設(shè)施設(shè)備及人員要求設(shè)施設(shè)備應(yīng)設(shè)催青室、專(zhuān)用蠶室、桑葉消毒車(chē)間、貯桑室、上蔟室、制種室及添毒專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室等生產(chǎn)設(shè)施，生產(chǎn)區(qū)布局合理，室內(nèi)、周?chē)h(huán)境及主要道路的地面硬化，具有專(zhuān)用曬場(chǎng)。應(yīng)配備相應(yīng)的雄蛾低溫保護(hù)室、蠶種保護(hù)冷藏庫(kù)及生產(chǎn)附屬用房。催青室、蠶室、上蔟室、制種室等應(yīng)配備溫濕度調(diào)控設(shè)備、消毒機(jī)具。添毒專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備顯微鏡、離心機(jī)、血球計(jì)數(shù)器。人員要求配備相關(guān)專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員負(fù)責(zé)催青、養(yǎng)蠶、抗BmNPV性能測(cè)試、制種、蠶種冷藏浸酸、蠶種檢疫等工作。種性保持原則保育方式實(shí)行繁育單位和品種育成單位雙線保育，每3～5年比較品種（品系）性狀，必要時(shí)進(jìn)行品種（品系）復(fù)壯提純或更換。飼育形式全齡采用單蛾育，防區(qū)間混雜，每個(gè)品種（系）的飼育量不少于20個(gè)飼育區(qū)，各飼育區(qū)環(huán)境條件一致。抗BmNPV特性測(cè)試對(duì)抗BmNPV蠶品種添毒測(cè)試，采用定量添食一定濃度的BmNPV病原多角體，調(diào)查血液型膿病發(fā)病率。制種方式按同品種同品系異蛾區(qū)交配制種，每蛾單獨(dú)產(chǎn)卵，制成14個(gè)卵圈為1張的框制種。防止品種混雜各級(jí)蠶種繁育應(yīng)防止品種（系）混雜、錯(cuò)亂，認(rèn)真做好繁育全過(guò)程的隔離和標(biāo)識(shí)工作。采用專(zhuān)用蠶房、專(zhuān)用蠶具和專(zhuān)人負(fù)責(zé)的方式進(jìn)行飼養(yǎng)管理。蠶種出庫(kù)、催青、包種和收蟻應(yīng)認(rèn)真核對(duì)品種（系）和編號(hào)等信息，嚴(yán)格分區(qū)飼養(yǎng)。質(zhì)量要求母種飼養(yǎng)成績(jī)和種繭質(zhì)量按照DB45/T90的規(guī)定執(zhí)行。選擇深度選制母種的蛾區(qū)數(shù)不超過(guò)飼育蛾區(qū)數(shù)的20％。種性保持流程見(jiàn)圖1。卵期卵期選擇蠶期選擇出庫(kù)催青收蟻飼育上蔟采繭蔟中管理種繭調(diào)查蛾區(qū)初選蛾區(qū)復(fù)選繭（蛹）個(gè)體選擇交配制種抗BmNPV測(cè)試蠶種保護(hù)、冷藏、浸酸、檢疫抗BmNPV家蠶品種種性保持技術(shù)流程圖種性保持要求出庫(kù)催青出庫(kù)準(zhǔn)備根據(jù)繼代目標(biāo)任務(wù)，結(jié)合氣候條件、桑樹(shù)長(zhǎng)勢(shì)和品種特性等因素制定出庫(kù)計(jì)劃，確定出庫(kù)時(shí)間。出庫(kù)前整理品種（品系）、卵圈數(shù)，按出庫(kù)日期統(tǒng)一擺放，做好標(biāo)識(shí)。出庫(kù)數(shù)量出庫(kù)蛾區(qū)數(shù)是計(jì)劃飼育蛾區(qū)數(shù)的3～5倍。出庫(kù)浸酸按照DB45/T84的規(guī)定執(zhí)行。催青要求將蠶種按照品種（品系）分別放置，卵面朝上平鋪于竹匾內(nèi)，避免卵面交疊，感溫均勻，定時(shí)換氣。根據(jù)發(fā)育情況調(diào)整催青溫濕度。用2％福爾馬林溶液在蠶種轉(zhuǎn)青后浸泡5min進(jìn)行卵面消毒，清水漂洗干凈，晾干后按品種（品系）逐個(gè)單卵圈包種。包種的白紙上標(biāo)明對(duì)應(yīng)的品種名、蛾區(qū)對(duì)交號(hào)，同一品種卵圈置于同一蠶匾內(nèi)，統(tǒng)計(jì)各親本入選卵圈的明細(xì)，附上注明品種名、收蟻日期、收蟻數(shù)量的標(biāo)識(shí)牌。催青具體要求如表1所示。簡(jiǎn)易兩段催青法要求催青時(shí)間胚子發(fā)育程度溫度/℃相對(duì)濕度/％光照1～4甲～戊225～2675～80自然光線5～8戊3～己328～2980～85人工感光到18h9～10己4～己528～2980～85遮光卵期選擇初選催青初期淘汰卵色、卵形、產(chǎn)附等特性不符合品種固有性狀及化性不穩(wěn)定的卵圈。復(fù)選催青中期，選擇水印較淺，死卵、不受精卵較少，卵形好且卵量較多的卵圈做標(biāo)識(shí)，標(biāo)上品種名、上一代對(duì)交的蛾區(qū)號(hào)、死卵粒數(shù)、不受精卵粒數(shù)。選留卵圈數(shù)是計(jì)劃飼育區(qū)數(shù)的2～2.5倍。終選包種前，選擇點(diǎn)青和轉(zhuǎn)青整齊、轉(zhuǎn)青死卵少的卵圈、單卵圈包種。若同一蛾區(qū)對(duì)交號(hào)出現(xiàn)多個(gè)轉(zhuǎn)青死卵的卵圈，則該對(duì)交號(hào)的卵圈全部淘汰。收蟻收蟻準(zhǔn)備收蟻前7d對(duì)蠶室、蠶具進(jìn)行消毒清洗，收蟻前1d將蠶室內(nèi)環(huán)境調(diào)節(jié)至目的溫濕度。收蟻方法采用單蛾區(qū)收蟻的方法，在自然孵化率最大一日收蟻。收蟻前4h開(kāi)始感光，早上9:00～10:00收蟻，日系品種及秋期應(yīng)適當(dāng)提前，同一品種的收蟻時(shí)間宜在60min內(nèi)完成。選擇孵化整齊的卵圈放入蠶匾，打開(kāi)包種紙平攤在蠶座內(nèi)，撒新鮮石灰粉或防僵粉，再撒孵出桑，下午15：00定座，按順序編排飼育區(qū)號(hào)，填寫(xiě)飼育區(qū)片。加收5％～10％的飼育區(qū)供蠶期選擇。孵化調(diào)查收蟻結(jié)束后，及時(shí)調(diào)查登記卵殼色、蟻蠶體色。收蟻當(dāng)日下午，對(duì)已收蟻的卵圈用60℃溫水浸泡，燙死未孵化卵，1h后取出晾干，點(diǎn)數(shù)孵化卵數(shù)、不受精卵數(shù)、死卵數(shù)、未孵化卵數(shù)，計(jì)算孵化率、不受精卵率、死卵率。孵化調(diào)查應(yīng)在四齡餉食前完成。孵化率計(jì)算見(jiàn)公式（1）：a=式中：a——孵化率，單位為百分比（％）；b——孵化頭數(shù)，單位為只（只）；c——總受精頭數(shù)，單位為只（只）。d=式中：d——不受精卵率，單位為百分比（％）；e——不受精卵數(shù)，單位為只（只）；f——總卵數(shù)，單位為只（只）。 g=式中：g——死卵率，單位為百分比（％）；h——死卵數(shù)，單位為只（只）；f——總卵數(shù)，單位為只（只）。飼育飼育方法及技術(shù)要求按照DB45/T83的規(guī)定執(zhí)行，包括蠶室溫濕度環(huán)境、桑葉質(zhì)量、飼養(yǎng)管理和眠起處理。幼蟲(chóng)期調(diào)查按蛾區(qū)調(diào)查以下項(xiàng)目，調(diào)查結(jié)果登記在飼育區(qū)片上：經(jīng)過(guò)時(shí)間：收蟻時(shí)間、各齡餉食、止桑時(shí)間、見(jiàn)熟、盛熟、終熟時(shí)間；眠起狀況：各齡止桑后，記錄遲眠蠶；眠起第二次給桑前記錄遲起蠶，遲起蠶并入遲眠蠶計(jì)算；發(fā)育整齊度：每齡期眠中，觀察并記錄發(fā)育整齊程度；體色、斑紋、體形：在5齡盛食期觀察，發(fā)現(xiàn)異常，及時(shí)記錄；弱小病死蠶：及時(shí)撿出并記錄。幼蟲(chóng)期選擇整區(qū)淘汰：淘汰孵化率低、發(fā)育不整齊、眠性異常、混雜、有微粒子病及蠶體色、體型、斑紋不符合品種固有性狀的飼育區(qū)。個(gè)體淘汰：淘汰遲眠蠶、遲起蠶、弱小蠶、病蠶、畸形蠶?？笲mNPV測(cè)試母種繼代時(shí)，每一代都對(duì)所有飼育區(qū)的2齡起蠶隨機(jī)抽取20條，定量添食BmNPV病原多角體，添毒濃度為1×107～9×107個(gè)/PIBs/mL，2齡眠蠶至三齡第2d調(diào)查發(fā)病率；根據(jù)添毒發(fā)病情況，選留無(wú)膿病發(fā)生的區(qū)繼續(xù)飼育，淘汰有發(fā)病蠶的區(qū)。每年對(duì)生產(chǎn)用原原種、原種、一代雜交種進(jìn)行抽樣添毒測(cè)試，4齡起蠶抽樣，定量添食BmNPV病原多角體，濃度為1×109PIBs/mL，通過(guò)發(fā)病情況及時(shí)了解品種抗性保持情況。上蔟采繭、蔟中管理分區(qū)上蔟上蔟前，保持“上蔟室、蔟具、環(huán)境”三干燥。提前將塑料折蔟平鋪于蠶匾內(nèi)，貼上記有品種名及上蔟區(qū)號(hào)的標(biāo)簽。上蔟過(guò)程中，確保品種、小系、飼育區(qū)號(hào)、上蔟區(qū)號(hào)相對(duì)應(yīng)。及時(shí)加蓋覆蔟網(wǎng)，待吐絲結(jié)繭基本完成后，揭去覆蔟網(wǎng)。蔟中保護(hù)上蔟室溫度調(diào)節(jié)為25℃～26℃，相對(duì)濕度75％以下。保持室內(nèi)空氣流通、光線均勻，避免陽(yáng)光直射和震動(dòng)。采繭以吐絲完成、未化蛹前為采繭適期，采繭前再次核對(duì)品種、小系、飼育區(qū)號(hào)、上蔟區(qū)號(hào)，記錄并淘汰蔟中減蠶數(shù)，包括落地蠶、不結(jié)繭蠶、病死蠶等。按上蔟區(qū)號(hào)順次進(jìn)行種繭，飼育區(qū)號(hào)、上蔟區(qū)號(hào)標(biāo)簽隨蠶匾流轉(zhuǎn)。采下的種繭橫向薄層平鋪于蠶匾內(nèi)，薄皮繭、病態(tài)繭、雙宮繭堆放于蠶匾一角落。種繭保護(hù)種繭保護(hù)室，溫度以25℃～26℃為宜。采繭到觸角著色時(shí)以相對(duì)濕度75％為宜，觸角著色后待羽化以相對(duì)濕度85％為宜。自然光線，空氣流通。種繭調(diào)查調(diào)查時(shí)間從盛上蔟當(dāng)日算起的第7d～10d進(jìn)行，以復(fù)眼著色為調(diào)查適期。調(diào)查項(xiàng)目普通繭、雙宮繭、下繭粒數(shù)，死籠繭粒數(shù)，全繭量、繭層量。調(diào)查和計(jì)算方法逐區(qū)將種繭按普通繭、雙宮繭、下繭進(jìn)行分類(lèi)并點(diǎn)數(shù)，按公式（4）（5）計(jì)算結(jié)繭率。i=式中：i——結(jié)繭率，單位為百分比（％）；j——收繭顆數(shù)，單位為顆（顆）；k——病蠶數(shù)，單位為只（只）；l——弱小蠶數(shù)，單位為只（只）；m——蔟中減蠶數(shù)，單位為只（只）。逐區(qū)采取人工搖繭的方法調(diào)查死籠繭粒數(shù)，按公式（6）計(jì)算死籠率。n=式中：n——死籠率，單位為百分比（％）；o——死籠數(shù)，單位為只（只）；j——收繭顆數(shù)，單位為顆（顆）。逐區(qū)隨機(jī)抽取雌、雄繭各25粒削繭，剝除繭衣后，分別稱(chēng)取雌、雄繭的全繭量、繭層量。按公式（7）計(jì)算繭層率。p=式中：p——繭層率，單位為百分比（％）；q——繭層量，單位為克（克）；r——全繭量，單位為克（克）。 蟲(chóng)蛹統(tǒng)一生命率按公式（8）計(jì)算。 s=i×式中：s——蟲(chóng)蛹統(tǒng)一生命率，單位為百分比（％）；i——結(jié)繭率，單位為百分比（％）；n——死籠率，單位為百分比（％）。蛾區(qū)初選核對(duì)抗BmNPV測(cè)試結(jié)果，淘汰有膿病發(fā)生區(qū)；淘汰繭型、繭色、縮皺等特性不符合品種固有性狀的區(qū)；淘汰蠶病、不結(jié)繭蠶多的區(qū)；淘汰普通繭率低，雙宮繭、穿頭繭、綿繭率高的區(qū)。蛾區(qū)復(fù)選區(qū)間選擇重于個(gè)體選擇。選擇繭型好，大小一致，縮皺中等，孵化率高，不良卵率低，蟲(chóng)蛹統(tǒng)一生命率、結(jié)繭率高于飼育批平均值，死籠率低于批平均值，全繭量開(kāi)差在批平均值±0.05g的區(qū)作為母種留種區(qū)。留種蛾區(qū)數(shù)量占飼育蛾區(qū)數(shù)的20％。繭（蛹）個(gè)體選擇肉眼評(píng)選：在母種留種區(qū)內(nèi)，初選繭型好，大小一致、無(wú)穿頭，繭層均勻的個(gè)體，剝繭衣，選擇縮皺中等的個(gè)體。單個(gè)削開(kāi)選擇無(wú)縮尾、無(wú)駝背、體型伸展的蛹，分開(kāi)雌雄后，裝回原繭殼。個(gè)體稱(chēng)量：?jiǎn)蝹€(gè)稱(chēng)量入選種繭的全繭量、繭層量。選擇全繭量在該區(qū)平均值±0.10g以內(nèi)，繭層量在該區(qū)平均值±0.02g的種繭作為留種個(gè)體。留種個(gè)體分雌雄放入對(duì)應(yīng)制種盒，附標(biāo)識(shí)牌。交配制種交配型式采用品種內(nèi)異小系異蛾區(qū)交配，按制種計(jì)劃進(jìn)行不同蛾區(qū)的配對(duì)。雄蛾交配次數(shù)以一次為限。蛾期選擇交配前淘汰禿翅、短翅、卷翅、黑斑、黑環(huán)節(jié)、體型過(guò)大或過(guò)小等不良蛾。制種方式制成14蛾為一張的框制種，蠶種紙上注明品種、編號(hào)，蛾區(qū)對(duì)交號(hào)，產(chǎn)卵日期。交配產(chǎn)卵交配宜在上午9：00～10:00進(jìn)行，交配20min后捉出單只雌、雄蛾，另行交配。根據(jù)品種交尾習(xí)性，交配時(shí)長(zhǎng)4h～6