TSATA 068-2024 動(dòng)物源性食品中氯霉素和甲硝唑殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS75.160.20CCSE30Determinationofchloramphenicolandmetronidazoleresiduesinporkandbeefbyliquidchromatography-tandemmassspectIT/SATA068—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5試劑 6儀器 27試樣制備與保存 2試樣的的制備 2試樣的的保存 28測(cè)定步驟 2提取 2凈化 2測(cè)定條件 29結(jié)果計(jì)算 410測(cè)定低限 411精密度和回收率 4附錄A（資料性）氯霉素（CAP）、D5-氯霉素（D5-CAP）、甲硝唑（MDZ）和D4-甲硝唑（D4-MDZ）多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）色譜圖 5附錄B（資料性）氯霉素和甲硝唑在不同基質(zhì)中的平均回收率和精密度 6T/SATA068—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本標(biāo)準(zhǔn)可能涉及某些有危險(xiǎn)性的材料、操作和設(shè)備，但是并未對(duì)與此有關(guān)的所有安全問題都提出建議。因此，使用者在應(yīng)用本標(biāo)準(zhǔn)前應(yīng)建立適當(dāng)?shù)陌踩头雷o(hù)措施，并確定相關(guān)規(guī)章限制的適用性。本文件由深圳市分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：深圳市龍華區(qū)疾病預(yù)防控制中心，深圳市疾病預(yù)防控制中心，深圳市南山區(qū)疾病預(yù)防控制中心，深圳市羅湖區(qū)疾病預(yù)防控制中心。本文件主要起草人：羅蘭，秦威振，王甫，黃承鵬，鐘寶輝，熊韋，任燕，曹赫，林啟輝，劉紅河，姜杰，劉桂華，曾憲東，柳潔，朱波，賴少陽，葉敏。1T/SATA068—2024動(dòng)物源性食品中氯霉素和甲硝唑殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本方法適用于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)氯霉素和甲硝唑抗生素殘留量的同時(shí)測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬、牛、雞、鴨、魚、蝦、貝類中氯霉素和甲硝唑抗生素殘留量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T5009.1食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分總則GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB/T22338-2008動(dòng)物源性食品中氯霉素類藥物殘留測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法GB/T27404實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理采用乙酸乙酯提取試樣中氯霉素和甲硝唑藥物殘留，經(jīng)低溫離心，正己烷除油，氮吹、定容后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定目標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。正己烷（C6H14）：色譜純。乙腈（C2H3N）：色譜純。乙酸銨（C2H7NO2）：色譜純。氫氧化銨（NH3OH，濃度為25%~28%）。無水硫酸鈉（Na2SO4使用前經(jīng)馬弗爐550℃灼燒2h，冷卻后密封保存。5mmol/L乙酸銨溶液：稱取0.39g乙酸銨，用水稀釋至1000mL，混勻。CAS:443-48-1）、D4-甲硝唑（C6H5D4N4O3，CAS:1261392-47-5）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥98%標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：1000mg/mL。分別準(zhǔn)確稱取氯霉素、甲硝唑、D5-氯霉素、D4-甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg（按照純度示值折算），用甲醇溶解并定容至10mL，配成1000mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20℃以下避光保存，保存期為12個(gè)月。混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確吸取100μL氯霉素、甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇定容至10mL，配成濃度為10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20℃以下避光保存，保存期為6個(gè)月。2量濃度為0.05mg/L,4℃保存，保存期為7天。3T/SATA068—2024c)柱溫：40℃;d)進(jìn)樣量：5μL。8.3.2質(zhì)譜條件a)進(jìn)樣離子源：ESI源，離子源溫度550℃。b)掃描模式：氯霉素、D5-氯霉素為負(fù)離子掃描模式，甲硝唑、D4-甲硝唑?yàn)檎x子掃描模式。c)監(jiān)測(cè)模式：多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。d)噴霧電壓：4.5kV。e)源內(nèi)氣：55psi。f)輔助氣：55psi。g)氣簾氣：30psi。h)其他質(zhì)譜參數(shù)見表2：表2監(jiān)測(cè)離子對(duì)D-氯霉素D-甲硝唑注：對(duì)不同質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。8.3.3定性測(cè)定將試樣溶液注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，測(cè)得其峰面積，以保留時(shí)間（偏差在±2.5%之內(nèi)）和監(jiān)測(cè)離子的相對(duì)豐度比（監(jiān)測(cè)離子相對(duì)豐度的最大允許偏差見表3）定性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)試樣溶液中氯霉素和甲硝唑的質(zhì)量濃度。平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。表3定性時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差8.3.4定量測(cè)定在儀器最佳工作條件下，對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.16）進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分峰面積和氘代內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分濃度與氘代內(nèi)標(biāo)濃度的比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。內(nèi)標(biāo)法定量。氯霉素（CAP）、D5-氯霉素（D5-CAP）、甲硝唑（MDZ）和D4-甲硝唑（D4-MDZ）的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)色譜圖參見圖A.1。4T/SATA068—20249結(jié)果計(jì)算試樣中各目標(biāo)化合物的含量按公式（1）計(jì)算：式中：X——試樣中目標(biāo)化合物的含量，單位為微克每千克(μg/kgc——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的試樣中目標(biāo)化合物的濃度，單位為微克每升(μg/Lv——定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的取用量，單位為克（gf——稀釋倍數(shù)。10測(cè)定低限本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)氯霉素、甲硝唑的測(cè)定低限均為0.05μg/kg。11精密度和回收率本標(biāo)準(zhǔn)的精密度數(shù)據(jù)是參考GB/T27404附錄F有關(guān)規(guī)定而確定的，參見附錄B。5圖44443.43.3404244484s6