《職業(yè)衛(wèi)生實驗室質量控制樣品研制規(guī)范 第5部分 生物樣本類（征求意見稿）》

ICS13.100CCSC5232Guidelinesforthedevelopmentoflaboratoryqualitycontrolsamples（QCM）ofoccupationalhealthiPart5biologicalspeIDB32/TXXXX.1—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術語、定義 4生物樣本類質量控制樣品的技術要求 5生物樣本類質量控制樣品的研制步驟 26生物樣本類質量控制樣品的制備 27生物樣本類質量控制樣品的貯存/使用 3附錄A（資料性） 4附錄B（資料性） 7附錄C（資料性） 7DB32/TXXXX.1—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件為DB/TXXXX《職業(yè)衛(wèi)生實驗室質量控制樣品研制規(guī)范》的第5部分。DB/TXXXX分為以下5個部分：——第1部分：固體吸附劑管類；——第2部分：濾料類；——第3部分：吸收液類；——第4部分：粉塵類（游離二氧化硅測定）；——第5部分：生物樣本類。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由江蘇省衛(wèi)生標準化技術委員會提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省疾病預防控制中心、無錫市疾病預防控制中心、蘇州市疾病預防控制中心、蘇州工業(yè)園區(qū)疾病防治中心有限公司、東南大學、無錫市第八人民醫(yī)院本文件主要起草人：周長美、朱寶立、龔燕、孟元華、劉文衛(wèi)、張利明、李大偉、王樂華、史俊文、羅凱、宋振威1DB32/TXXXX.1—2024職業(yè)衛(wèi)生實驗室質量控制樣品研制規(guī)范第5部分：生物樣本類本文件適用于職業(yè)衛(wèi)生實驗室研制生物樣本類質量控制樣品（QCM）。本文件規(guī)定了該類QCM的技術要求、制備步驟、規(guī)范使用等原則。本文件的基本用戶是需要研制特定的QCM的實驗室人員。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T15000.1標準樣品工作導則(1)在技術標準中陳述標準樣品的一般規(guī)定GB/T15000.2標準樣品工作導則第2部分：常用術語及定義GB/T15000.3標準樣品工作導則(3)標準樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法GB/T15000.7標準樣品工作導則第7部分：標準樣品生產者能力的通用要求CNAS-GL003能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南CNAS-GL005實驗室內部研制質量控制樣品的指南GBZ/T224職業(yè)衛(wèi)生名詞術語ISO/IEC指南99國際計量學詞匯-基本及一般概念和相關術語ISO3534-1統(tǒng)計學-術語及符號：第一部分通用統(tǒng)計學及概率論術語3術語、定義GB/T15000.2-2019、ISO/IEC指南99、ISO3534-1、GBZ/T224-2010中界定的術語和定義適用于本文件。4生物樣本類質量控制樣品的技術要求4.1基體要求生物樣本原料成分一般比較復雜，選擇的生物樣本類QCM的基體應與日常檢測樣品的基體相同或者盡可能接近，均勻性穩(wěn)定性能達到使用要求，且目標化學物質本底值較低。生物樣本原料總量可在考慮實驗室一定周期（如每年）的QCM需求量及研制過程用量后確定。2DB32/TXXXX.1—2024制備過程中使用5/10mL西林瓶或者聚乙烯塑料小瓶分裝，小瓶需使用同一生產商的同一批次產品，驗收合格后使用。目標化學物質標準儲備液采用國家一級標準物質。選擇符合要求的分液瓶，移液器，真空冷凍干燥器。4.2特性和特性值生物樣本類QCM的特性與所需進行質量控制的測量特性一致，其特性值的范圍可在考慮該目標化學物質的職業(yè)衛(wèi)生限值、日常樣品濃度、標準曲線范圍等因素后確定。4.3均勻性和穩(wěn)定性4.3.1均勻性：運用單因素方差分析統(tǒng)計分析抽取樣品的檢測結果有無顯著性差異，判定該批次QCM均勻性是否符合要求。4.3.2穩(wěn)定性：各存放條件下，各考察時間點抽取樣品的檢測結果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，無顯著性差異時間點前該批次QCM的穩(wěn)定性符合要求。5生物樣本類質量控制樣品的研制步驟使用一種實用且簡便的方法來確保QCM的均勻性和穩(wěn)定性，以達到開發(fā)成本和預期用途之間的平衡，可為實驗室提供較有證標準物質（CRM）更為經濟的識別測量波動的方法。研制過程除需具備一定技術水平和能力的組織外，研制人員還應有豐富的樣品知識并熟悉相關過程。生物樣本類QCM研制步驟為：原材料準備→原材料制備→加料制備→分裝→冷凍干燥→輻照滅菌→均勻性評估→賦值→穩(wěn)定性評估→研制文件整理→貯存/使用。材料及其處理、分裝、包裝和輻照等均可由具有一定經驗和特定設備的第三方完成。6生物樣本類質量控制樣品的制備6.1材料準備按照4.1要求，準備一定數(shù)量的同基質生物樣本原材料，經過均質化處理（例如尿樣：振蕩混勻、離心、過濾等步驟制備更加均勻的原材料；準備足夠量的低本底西林瓶或聚乙烯塑料瓶；準備分液器，移液槍，真空冷凍干燥機。按照4.2要求準備符合要求的目標化學物質儲備液。6.2加料封裝目標化學物質的添加可根據生物樣本原材料的性質采取一次直接添加或分步添加。（例如血液樣本相對比較粘稠，為了增加均勻性我們可以采取分步添加。以1L血液為例，我們可以將其按3：3：4的比例分成3份，用移液槍準確定量吸取目標化學物質儲備液添加入第一份樣本中，充分混合均勻后再依次于第二、第三份樣本混合，并充分混合均勻。）制備好的加料生物樣本用分液器準確定量分裝到各個西林瓶（或聚乙烯瓶）中，經真空冷凍干燥箱制備成凍干粉，加蓋密封。該批次QCM全部完成加料封裝后還應給每個樣品貼上清晰的標簽，標簽內容應包括樣品名稱和材料描述、編號、批號等內容。輻照滅菌后-18℃冷凍保存6.3均勻性評估3DB32/TXXXX.1—2024從該批次QCM中隨機抽取不少于10個樣品用于均勻性檢驗。使用目標化學物質規(guī)定/推薦測定方法程序測定，每個樣品重復測定3次。樣品的重復測定可按隨機次序進行，以降低測量飄移對均勻性評估的影響。采用單因素方差分析法對測定結果進行統(tǒng)計處理，若F＜自由度為（f1，f2）及給定顯著性水平α（通常α=0.05）的臨界值Fα（f1，f2），P>0.05，則表明樣品內和樣品間無顯著性差異，樣品是均勻的。6.4定值將6.3中均勻性評估研究獲得的樣本總平均值作為指示值，3倍總評均值的標準偏差建立指示值的控制限。6.5穩(wěn)定性評估-18℃存放條件下，按照每個考察時間點（時間點的確定可參考附錄B）隨機抽取6個樣本，使用目標化學物質規(guī)定/推薦測定方法程序測定，每個樣品重復測定3次。各時間點檢測結果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，無顯著性差異時間點前該批次QCM的穩(wěn)定性符合要求。各時間點樣本測定前，應使用CRM等對實驗室測量程序進行校準，以降低實驗室長期再現(xiàn)性對穩(wěn)定性評估的影響。QCM復溶后于4℃保存，按照考察時間點，將樣本取出恢復至室溫，使用目標化學物質規(guī)定/推薦測定方法程序測定，每個樣品重復測定3次。各時間點檢測結果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，無顯著性差異時間點前該QCM的復溶穩(wěn)定性符合要求。各時間點樣本測定前，應使用CRM等對實驗室測量程序進行校準，以降低實驗室長期再現(xiàn)性對穩(wěn)定性評估的影響。6.6樣品信息文件QCM的單個樣品除應有清晰、合適的標簽外，還應附有使用說明文件。文件信息應包括制備日期、貯存條件、有效期、預期的用途、指示值、制備單位、使用的安全注意事項等內容。7樣品的貯存/運輸/使用7.1貯存QCM制備完成后，應嚴格按照樣品信息文件中的貯存條件來貯存，確保包裝容器密封、遠離熱源、避光和防潮。此外，還應定期監(jiān)測貯存條件（如：冰箱溫度）并記錄，以確保貯存條件合適。7.2運輸本文件所述QCM通常無需廣泛分發(fā)，如需要運輸還有必要進行運輸穩(wěn)定性評估，可參考ISO指南35。7.3使用生物樣本類QCM的使用應嚴格按照有效期、預期用途、使用安全注意事項等內容進行。生物樣本類QCM啟封復溶后在一定存儲條件下重復使用，4℃冰箱冷藏條件下可以穩(wěn)定一個月，應定期監(jiān)測貯存條件（如：冰箱溫度）并記錄，以確保貯存條件合適。4DB32/TXXXX.1—2024尿中鎘QCM研制（示例）A.1材料準備：健康人尿：經0.22μm濾膜過濾后混合備用（1L水中鎘成分分析標準物質（GBW086121000μg/mL西林瓶及瓶蓋（或聚乙烯瓶分液器，真空冷凍干燥機。A.2加工制備：尿中鎘質量控制樣品（QCM）內部研制的步驟：取健康人尿→過濾→混合均勻→加標充分混勻→分裝→冷凍干燥→輻照滅菌→冷凍保存→均勻性檢驗→定值→穩(wěn)定性檢驗→樣本信息成文。將1000μg/mL鎘標準溶液用1%硝酸釋成10μg/mL標準儲備液備用。取1mL10μg/mL標準儲備液備，直接加入到1L尿中，充分攪拌均勻。用分液器準確取5mL加標尿液于各個西林瓶（或聚乙烯瓶）中，分裝約200瓶左右。經真空冷凍干燥機凍干處理，待成凍干粉后密封。該批次尿鎘全部完成加料封裝后，再逐一貼上包括“尿鎘、批號、編號”等信息的標簽。輻照滅菌后-18℃冷凍保存。A.3均勻性評估：從該批次尿中鎘QCM中隨機抽取10瓶用于均勻性檢驗。取尿鎘QCM恢復至室溫，加入5mL純水，待溶解后充分混勻，靜置20min。按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測定第2部分：電感耦合等離子體質譜法進行測定，每個樣品重復測定3次，測定結果見表1。樣品的重復測定應按隨機次序進行（可參考如下示例以降低測量漂移對均勻性評估的影響。采用單因素方差分析法對測定結果進行統(tǒng)計處理，樣品間均值無顯著性差異則表明樣品是均勻的，單因素方差分析結果見表2。示例：10個樣品，重復測量3次，適合的測量方案如下：第一次測量順序：1、3、5、7、9、2、4、6、8、10第二次測量順序：10、9、8、7、6、5、4、3、2、1第三次測量順序：2、4、6、8、10、1、3、5、7、9表1尿中鎘均勻性測定結果(μg/L)石墨爐樣號測定次數(shù)123110.099.919.84210.289.9510.30310.2510.1010.3049.689.869.96510.369.549.96610.2210.0310.2879.769.8410.30810.3810.199.8699.849.6710.329.869.9910.41總平均值10.04標準偏差0.245DB32/TXXXX.1—2024表2單因素方差分析結果方差來源平方和均方F單元間90.4650.0520.825重復測定1.2510.063F臨界值F0.05(9,20)=2.39。計算的F值為0.825，該值＜F臨界值，表明在0.05顯著性水平時，該批次尿中鎘QCM是均勻的。A.4定值：將均勻性評估研究中獲得的10瓶尿中鎘QCM的總平均值作為指示值，3倍標準偏差建立指示值的控制限，本批次尿中鎘QCM的指示值及控制限為：10.04±0.72(μg/L）。A.5穩(wěn)定性評估：-18℃冷凍條件下按照0、1個月、3個月、6個月、12個月存放時間（存放條件及時間點的選擇可參考附錄B各時間點取出6個樣本恢復至室溫，加入5mL純水，待溶解后充分混勻，靜置20min。按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測定第2部分：電感耦合等離子體質譜法進行測定，每個樣品重復測定3次進行測定，測定結果見表3。各時間點檢測結果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，如無顯著性差異，此時間點前該批次尿中鎘QCM的穩(wěn)定性符合要求。表3尿中鎘穩(wěn)定性測定結果(μg/L)0136110.0410.17210.20310.19410.1359.50610.31平均值10.08標準偏差0.29t0.31按下式計算t值：式中：x-─n次測量的平均值；μ─參考值(指示值)；n─測量次數(shù)；S─n次測量結果的標準偏差。注：為了保證平均值和標準偏差的準確度，n≥6。表3結果顯示，室溫條件下存放1個月、3個月、6個月、12個月后，各時間點測定6個樣本計算所得t值均小于臨界值t(0.05,5)=2.57，各時間點平均值與參考值之間無顯著性差異，表明室溫條件下該批次尿中鎘QCM至少可穩(wěn)定存放12個月。6DB32/TXXXX.1—2024復溶樣本穩(wěn)定性評估：取6份尿中鎘QCM恢復至室溫，加入5mL純水復溶，待溶解后充分混勻，靜置20min，于4℃冰箱保存，分別于第1天、第7天、第15天、第30天取出，恢復至室溫后，混勻，按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測定第2部分：電感耦合等離子體質譜法進行測定，每個樣品重復測定3次，測定結果見表4。各時間點檢測結果與均