流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用課件

流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)，工作原理和應(yīng)用概況流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-2-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理流式細(xì)胞儀的測量參數(shù)和檢測指標(biāo)流式細(xì)胞儀獲取的數(shù)據(jù)和分析方法流式細(xì)胞儀在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀在臨床檢測和科研中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)、工作原理和應(yīng)用概況流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-3-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－基本概念流式細(xì)胞儀(FlowCytometer，F(xiàn)CM):

是集合光電子物理，光電測量技術(shù)，液流技術(shù)，計(jì)算機(jī)技術(shù)等現(xiàn)代高科技技術(shù)為一體的測量和分析細(xì)胞的儀器。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry，F(xiàn)CM):

是應(yīng)用流式細(xì)胞儀，對處于快速流動(dòng)液體中的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行“多參數(shù)快速測量”和“定量分析”，以及“分選細(xì)胞”的技術(shù)。流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-4-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－基本概念流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn)可多參數(shù)（散射光和多種熒光）測量和分析；可快速測量和分析：每秒可達(dá)1000-10000個(gè)細(xì)胞。分選細(xì)胞的純度高：目的細(xì)胞純度可達(dá)99%以上。獲取的數(shù)據(jù)分析結(jié)果更具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對檢測樣本要求：待測細(xì)胞必須是單個(gè)細(xì)胞懸液。

(組織塊樣品需制備成單細(xì)胞懸液）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-5-臺(tái)式機(jī)——FACSCalibur雙激光

488nm 635nm四色熒光（6參數(shù)）分選細(xì)胞

300個(gè)∕每秒

效率很低（基本不用）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-6-流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-7-臺(tái)式分選機(jī)——FACSAria雙激光–三激光

488nm 633nm407nm7色～13色熒光高速分選細(xì)胞

30000個(gè)細(xì)胞∕每秒流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-8-大型機(jī)——FACSVantageSE多激光多波長八熒光參數(shù)

高速分選單細(xì)胞點(diǎn)對點(diǎn)分選流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-9-流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-10-流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-11-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理流式細(xì)胞儀的測量參數(shù)和檢測指標(biāo)流式細(xì)胞儀獲取的數(shù)據(jù)和分析方法流式細(xì)胞儀在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀在臨床檢測和科研中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)、工作原理和應(yīng)用概況流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-12-二、流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理光路系統(tǒng)：

激光光源，光路系統(tǒng)（透鏡、濾光片）電子系統(tǒng)：光電倍增管（PMT），補(bǔ)償電路液流系統(tǒng)：

鞘液系統(tǒng)，樣品流動(dòng)系統(tǒng)數(shù)據(jù)系統(tǒng)：計(jì)算機(jī)，數(shù)據(jù)測量和分析軟件。細(xì)胞分選系統(tǒng)（一）流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)

流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-13-流式細(xì)胞儀－光路系統(tǒng)激光(Laser)是一種相干光源，它能提供單一波長、單一方向、同步的穩(wěn)定光照激光波長:488nm,635nm光收集系統(tǒng)是由若干組透鏡,濾波片,小孔組成，將產(chǎn)生的光信號(hào)引導(dǎo)至檢測器流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-14-光路系統(tǒng)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-15-InjectorTip流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-16-InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-17-流式細(xì)胞儀－光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)光源與熒光標(biāo)記物流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-18-光學(xué)檢測信號(hào)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-19-流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)FACSCalibur流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-20-流式細(xì)胞儀－液流系統(tǒng)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-21-液流系統(tǒng)：鞘液系統(tǒng)＋樣品流動(dòng)系統(tǒng)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-22-

流式細(xì)胞儀的電子系統(tǒng)

信號(hào)檢測和分析當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素,通過激光照射區(qū),受到激發(fā)產(chǎn)生不同波長的、代表細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)的熒光信號(hào)熒光信號(hào)由光電接收器接收，轉(zhuǎn)變?yōu)殡娒}沖信號(hào)，電脈沖信號(hào)經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)數(shù)字信號(hào)傳送到計(jì)算機(jī)，進(jìn)行儲(chǔ)存、作圖和統(tǒng)計(jì)分析流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-23-

數(shù)據(jù)系統(tǒng)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-24-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理流式細(xì)胞儀的測量參數(shù)和檢測指標(biāo)流式細(xì)胞儀獲取的數(shù)據(jù)和分析方法流式細(xì)胞儀在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀在臨床檢測和科研中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)、工作原理和應(yīng)用概況流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-25-三、流式細(xì)胞儀的測量參數(shù)和檢測指標(biāo)流式細(xì)胞儀可檢測的參數(shù)1：光學(xué)參數(shù)(1)散射光信號(hào)。前向角散射光（FSC,ForwardScatter）入射光的前向(５°)散射光信號(hào),可反映：細(xì)胞相對大小及其表面積

側(cè)向角散射光（SSC,SideScatter）

入射光90°角的散射光信號(hào)，可反映：細(xì)胞顆粒性程度（胞內(nèi)成分和構(gòu)造和表面結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-26-（二）流式細(xì)胞儀可檢測的參數(shù)1：光學(xué)參數(shù)

(1).

散射光信號(hào)前向角散射光（FSC,ForwardScatter）

入射光的前向

(５°)散射光信號(hào),

可反映：細(xì)胞相對大小及其表面積側(cè)向角散射光（SSC,SideScatter）

入射光90

角的散射光信號(hào)，

可反映：細(xì)胞顆粒性程度

（胞內(nèi)成分和構(gòu)造和表面結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-27-散射光信號(hào)前向角散射光－FSC:

可以反映細(xì)胞相對大小的參數(shù)FALSSensorLaser流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-28-散射光信號(hào)側(cè)向角散射光－SSC：

可以反映細(xì)胞顆粒性程度的參數(shù)（與胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜性及膜表面有關(guān)）FALSSensor90LSSensorLaser流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-29-流式細(xì)胞的基本信息:“形態(tài)”流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-30-流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-31-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）以散射光

（FSC/SSC)

表示的雙參數(shù)點(diǎn)陳圖（dotplot）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-32-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）以散射光

（FSC/SSC)

表示的雙參數(shù)點(diǎn)陳圖（dotplot）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-33-（二）流式細(xì)胞儀檢測的參數(shù)1:光學(xué)參數(shù)

(2).

特征信息－熒光（Fluorescence）信號(hào)熒光素吸收激光（激發(fā)光波長）能量熒光素將吸收能量釋放，轉(zhuǎn)換為釋放較入射光波長更長的光量子（發(fā)射光波長）熒光素與特異抗體結(jié)合（熒光抗體）熒光抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合越多，產(chǎn)生熒光信號(hào)越強(qiáng) 熒光素與細(xì)胞核酸結(jié)合，熒光強(qiáng)度反映核酸含量熒光素與細(xì)胞蛋白結(jié)合，熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞蛋白含量流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-34-（二）流式細(xì)胞儀檢測的參數(shù)1:光學(xué)參數(shù)

(2).

特征信息－熒光（Fluorescence）信號(hào)Forwardscatter(FSC)Sidescatter(SSC)FL1（第一熒光）-FITC(異硫氰酸熒光素）FL2（第二熒光）-PE（藻紅蛋白）FL3（第三熒光）-PerCP,PeCy5等PL4（第四熒光）-APC（別藻藍(lán)蛋白）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-35-熒光信號(hào)FluorescenceFALSSensorFluorescencedetector(PMT3,PMT4etc.)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-36-流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-37-OpticalFiltersDichroicFilter/Mirrorat45degReflectedlightTransmittedLightLightSource流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-38-StandardBandPassFiltersTransmittedLightWhiteLightSource630nmBandPassFilter620-640nmLight流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-39-StandardLongPassFiltersTransmittedLightLightSource520nmLongPassFilter>520nmLightTransmittedLightLightSource575nmShortPassFilter<575nmLightStandardShortPassFilters流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用FACSCalibur的濾光片系統(tǒng)FL1：530/30BP:FITCFL2：585/42BP:PEFL3：670LP:PeCy5,PeCy5.5,PerCPFL4:661/16BP:APC流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-41-PMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBandpassFiltersFlowCytometryOpticsLaser1234Flowcell流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-42-EthidiumPEcis-ParinaricacidTexasRedPE-TRConj.PIFITC600nm300nm500nm700nm400nm457350514610632488CommonLaserLine流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-43-Fluoresceinisothiocyanate(FITC)

（異硫氰酸熒光素）400nm500nm600nm700nmWavelengthProteinExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nm流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-44-ExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nmPhycoerytherin(PE),藻紅蛋白)Protein流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-45-PropidiumIodide(PI),(碘化丙錠)400nm500nm600nm700nmPIDNAExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nm流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-46-Allophycocyanin(APC)Protein632.5nm(HeNe)ExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nm流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-47-ProbeEx(nm)Em(nm)MWNotesHydroxycoumarin325386331SuccinimidylesterAminocoumarin350445330SuccinimidylesterMethoxycoumarin360410317SuccinimidylesterCascadeBlue375;400423596HydrazideLuciferyellow425528

NBD466539294NBD-XR-Phycoerythrin(PE)480;565578240,000

PE-Cy5conjugates480;565;650670

akaCychrome,R670,Tri-Color,QuantumRedPE-Cy7conjugates480;565;743767

Red613480;565613

PE-TexasRedFluorescein495519389FITC;pHsensitiveBODIPY-FL503512

Cy3512;552565,615

TRITC547572444TRITCX-Rhodamine570576548XRITCLissamineRhodamineB570590

PerCP490675

PeridininchlorphyllproteinTexasRed589615625SulfonylchlorideCy5625-650670

Cy77437671,001

Allophycocyanin(APC)650660104,000

TruRed490,675695

PerCP-Cy5.5conjugateAPC-Cy7conjugates650;755767

PharRed流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-48-熒光信號(hào)雙色直接染色流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-49-Compensation（補(bǔ)償）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-50-Compensation

（補(bǔ)償）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-51-Compensation

（補(bǔ)償）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-52-（二）流式細(xì)胞儀可檢測的參數(shù)2:細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞顆粒性程度細(xì)胞表面面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量細(xì)胞功能細(xì)胞表面蛋白抗原細(xì)胞胞漿內(nèi)蛋白性抗原細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子細(xì)胞增殖細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度二、流式細(xì)胞儀的工作原理和測量參數(shù)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-53-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理流式細(xì)胞儀的測量參數(shù)和檢測指標(biāo)流式細(xì)胞儀獲取的數(shù)據(jù)和分析方法流式細(xì)胞儀在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀在臨床檢測和科研中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)、工作原理和應(yīng)用概況流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-54-四、流式細(xì)胞儀獲取的數(shù)據(jù)和分析方法流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn)可多參數(shù)（散射光和多種熒光）測量和分析；可快速測量和分析：每秒可達(dá)1000-10000個(gè)細(xì)胞。是單個(gè)細(xì)胞懸液。流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-55-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)及常見圖形：數(shù)據(jù)存儲(chǔ):LISTMODE數(shù)據(jù)顯示:

二維點(diǎn)圖(DotPlot)

直方圖(Histogramplot)

等高線圖(ContourPlot)

密度圖(Densityplot)等流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-56-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

1.（二維）點(diǎn)陳圖/散點(diǎn)圖(DotPlot)適用于：雙參數(shù)分析流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-57-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：點(diǎn)圖分析(dotplot)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-58-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

2.直方圖(HistogramPlot)適用于：單參數(shù)分析流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-59-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形直方圖分析(histogram)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-60-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：等高圖和密度圖分析(densityplot)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-61-散點(diǎn)圖

密度圖二維等高圖直方圖圖報(bào)告中常見的幾種流式細(xì)胞圖流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-62-圖雙標(biāo)記分析小鼠脾細(xì)胞中T細(xì)胞亞群流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-63-流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的熒光標(biāo)記方法單標(biāo)：

一種單抗:FL1,FSC,SSC（三參數(shù)）雙標(biāo)：兩種單抗：FL1,FL2,FSC,SSC（四參數(shù)）三標(biāo)：三種單抗：FL1,FL2,FL3,FSC,SSC（五參數(shù)）四標(biāo)－四種熒光標(biāo)記抗體：四種單抗：FL1,FL2,FL3,FL4,FSC,SSC（六參數(shù)）流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-64-流式細(xì)胞儀應(yīng)用軟件主軟件：

CELLQuest：樣本獲取，數(shù)據(jù)分析儀器校正軟件：

FACSComp：儀器自動(dòng)校準(zhǔn)，設(shè)定實(shí)驗(yàn)分析條件臨床應(yīng)用自動(dòng)軟件：

SimulSET/MultiSET：淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)分析，可報(bào)告T淋巴細(xì)胞（T輔助細(xì)胞、T抑制細(xì)胞）、B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞含量，還可以報(bào)告絕對計(jì)數(shù)

ProCOUNT：干細(xì)胞計(jì)數(shù)分析，報(bào)告CD34+細(xì)胞絕對值HLA-B27：自動(dòng)測定全血HLA-B27

Retic-COUNT：網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-65-流式細(xì)胞儀應(yīng)用軟件CellQuest，BD公司FACS系列儀器系統(tǒng)操作和分析軟件流式細(xì)胞儀的各種工作狀態(tài)設(shè)定，功能控制，樣品檢測，獲取和儲(chǔ)存數(shù)據(jù)文件，樣品數(shù)據(jù)文件的數(shù)據(jù)分析等功能，是流式細(xì)胞儀技術(shù)的主要系統(tǒng)軟件。只能在蘋果機(jī)計(jì)算機(jī)（Machintoshi）上使用。

ModFit：DNA周期分析，檢查細(xì)胞周期分析，染色體倍體性分析（腫瘤細(xì)胞），以及細(xì)胞凋亡和增殖的分析。WinMDI：用共享軟件，可以對流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)文件進(jìn)行多參數(shù)分析，分析功能與CellQuest軟件基本相同，

可在PC機(jī)的Windows界面下使用。

流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-66-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理流式細(xì)胞儀的測量參數(shù)和檢測指標(biāo)流式細(xì)胞儀獲取的數(shù)據(jù)和分析方法流式細(xì)胞儀在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀在臨床檢測和科研中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)、工作原理和應(yīng)用概況流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-67-五、流式細(xì)胞術(shù)在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn)可多參數(shù)（散射光和多種熒光）測量和分析；可快速測量和分析：每秒可達(dá)1000-10000個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞懸液。流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-68-淋巴細(xì)胞亞群分析細(xì)胞凋亡

腫瘤學(xué)移植免疫三流式細(xì)胞儀在臨床檢測和科研中的應(yīng)用血小板其它流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-69-淋巴細(xì)胞亞群分析流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-70-AdhesionMetabolic流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-71-流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-72-流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-73-淋巴細(xì)胞亞群檢測意義疾病機(jī)理研究

疾病輔助診斷移植后免疫檢測治療方案的確定及療效評(píng)價(jià)CD25高于正常值5-10%,表明即將或已發(fā)生排斥CD4/CD8比值下降提示并發(fā)兇險(xiǎn)感染

<0.2時(shí),必須停用免疫抑制劑CD2+HLA-DR+增加5-10%,且不伴有CD25的增加,提示巨細(xì)胞病毒感染慢性疲勞,感染后綜合征,纖維肌痛,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,過敏等

疾病預(yù)防流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-74-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理流式細(xì)胞儀的測量參數(shù)和檢測指標(biāo)流式細(xì)胞儀獲取的數(shù)據(jù)和分析方法流式細(xì)胞儀在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀在臨床檢測和科研中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)、工作原理和應(yīng)用概況流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-75-五、流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢測和科研中的應(yīng)用流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn)可多參數(shù)（散射光和多種熒光）測量和分析；可快速測量和分析：每秒可達(dá)1000-10000個(gè)細(xì)胞。分選細(xì)胞的純度高可達(dá)99%以上。。流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-76-淋巴細(xì)胞亞群檢測意義

Control（n=20)ActiveSLE(n=17)StableSLE(n=13)CD370.4±5.8765.8±10.968.5±8.95CD435.0±5.7022.1±4.15**34.5±4.23CD827.9±5.7345.7±9.58**32.7±9.01CD4/CD81.27±0.140.43±0.12**1.05±0.26*NK17.8±5.484.37±3.31**7.59±5.01**鑒別活動(dòng)期和非活動(dòng)期SLE流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-77-HIVANDAIDS流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-78-Th1/Th2細(xì)胞流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-79-Th1/Th2細(xì)胞Th1型細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)引起遲發(fā)型過敏反應(yīng)、巨噬細(xì)胞活化、局部炎癥刺激來源：病毒、某些細(xì)菌Th2型介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)引起B(yǎng)細(xì)胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、促進(jìn)I型變態(tài)反應(yīng)（過敏反應(yīng)）刺激來源：多細(xì)胞寄生蟲、過敏原流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-80-Th1/Th2細(xì)胞PMA+Ionomycin刺激4-6hr流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-81-四色標(biāo)記胞內(nèi)因子FCM檢測流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-82-流式細(xì)胞儀檢測胞內(nèi)細(xì)胞因子

新鮮分離PBMC

加PMA＋I(xiàn)o刺激后6h測定胞內(nèi)細(xì)胞因子IL-4和IFN-g

檢測免疫細(xì)胞表型和結(jié)合檢測胞內(nèi)細(xì)胞因子：操作和分析方法；

流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-83-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病變應(yīng)性疾病

變應(yīng)性哮喘,

春季結(jié)膜炎炎性和自身免疫性疾病

系統(tǒng)性紅斑狼瘡類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫性甲狀腺疾病銀屑病(牛皮癬)IgA腎病多發(fā)性硬化流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-84-腫瘤學(xué)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-85-腫瘤發(fā)生發(fā)展流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-86-細(xì)胞周期G1MG2SQuiescentcellsG0流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-87-G2MG0G1s0

200

400

600

8001000G0G1sG2MDNAAnalysisDNAcontentCount2N4NNormalCellCycle

流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-88-ADNAhistogramG0-G1SG2-MFluorescenceIntensityCellNumber流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-89-DDM檢查——區(qū)分雙粘體細(xì)胞流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-90-AtypicalDNAHistogramG0-G1SG2-MFluorescenceIntensity#ofEvents流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-91-0

200

400

600

8001000PI熒光強(qiáng)度(DNA含量)DNA含量分析2N4NCountsG0/G1G2/MS異倍體流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-92-MultiparametergatingHumanProstatetumorcelllineDU-145DNA-HoechstCyclin-B1-FITCP-105Cy5EndoduplicatingpopulationMitoticcellsDNA-HoechstR1-gateDatafromDr.JamesJacobberger流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-93-0

200

400

600

8001000PIFluorescenceDNA

Analysis2N4N02004006008001000PIFluorescenceDNAAnalysisAneuploidpeak流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-94-DNA含量分析70%人類癌癥中存在著異倍體或細(xì)胞周期的改變DNA倍體和S期比例--指導(dǎo)治療[2]卵巢癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，子宮內(nèi)膜癌，原發(fā)部位不明的癌癥--早期(I/II期)DNA倍體和DNA指數(shù)--預(yù)后長期和無病生存期[2]卵巢癌--晚期流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-95-P53/Bcl-2流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-96-P53乳腺癌

與病理學(xué)分級(jí)有關(guān),并與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)大腸腫瘤

早期發(fā)現(xiàn)大腸癌胃癌

與預(yù)后相關(guān)肝細(xì)胞癌

與組織分級(jí),腫瘤預(yù)后,轉(zhuǎn)移及腫瘤大小密切相關(guān)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-97-Bcl-2Bcl-2在正常組織中的表達(dá)

造血系統(tǒng)細(xì)胞—淋巴,單核細(xì)胞等受激素或生長因子調(diào)節(jié)的腺上皮—前列腺上皮,子宮內(nèi)膜等干細(xì)胞或增值細(xì)胞—皮膚的基底細(xì)胞,腸上皮壽命長的分裂細(xì)胞—神經(jīng)元胚胎組織Bcl-2在腫瘤組織中的表達(dá)

腎臟腫瘤—腎癌,腎盂乳頭瘤,Wilms瘤,腎嗜酸細(xì)胞瘤前列腺癌

B細(xì)胞性淋巴瘤乳腺癌(43%)

甲狀腺癌流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-98-nm23nm23與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)

肝細(xì)胞癌甲狀腺腫瘤乳腺癌結(jié)腸癌肉瘤流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-99-CD44(CD44s/CD44v)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-100-CD44(CD44s/CD44v)

nExpressionofCD44v6-～+++～+++Lymphnodemetastasis

With247(29.1%)17(70.9%)##

Without3624(66.7%)12(33.3%)DukesstageA107(70.0%)3(30.0%)B2214(63.6%)8(36.4%)C166(37.5%)10(62.5%)**D124(33.3%)8(66.7%)**CD44v6與大腸癌流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-101-腫瘤多藥耐藥性(MDR)檢測P-gp在腫瘤組織中的表達(dá)

乳腺癌,膀胱癌,胃癌,食管癌,卵巢癌,前列腺癌等化療前高表達(dá)化療后高表達(dá)

腎細(xì)胞癌,結(jié)腸癌,肝癌,腎上腺皮質(zhì)癌,胰腺癌等化療前低表達(dá)

非何杰金氏淋巴瘤,成神經(jīng)細(xì)胞瘤,急性髓白血病等化療不敏感化療敏感化療不敏感流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-102-乳腺癌石蠟切片脫臘ER(雌激素受體)ER抗體染色酶解流式檢測固定(多聚甲醛)破膜(70%甲醇)細(xì)胞流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-103-Cyclin(細(xì)胞周期蛋白)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-104-細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-105-DNA斷裂流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-106-Fas/FasL(CD95/CD95L)T細(xì)胞與T細(xì)胞之間的凋亡T淋巴細(xì)胞與靶細(xì)胞間的凋亡靶細(xì)胞與靶細(xì)胞之間的凋亡流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-107-乳腺癌Fas/FasL與疾病慢性病毒性肝炎惡性腫瘤細(xì)胞-黑色素瘤、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌等腦缺血后細(xì)胞凋亡自身免疫性疾病—系統(tǒng)性紅斑狼瘡Fas/FasL(CD95/CD95L)流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-108-乳腺癌Caspases早期細(xì)胞凋亡AnnexinV/PI流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-109-移植免疫流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-110-CD25高于正常值5-10%,表明即將或已發(fā)生排斥CD4/CD8比值下降提示并發(fā)兇險(xiǎn)感染

<0.2時(shí),必須停用免疫抑制劑CD2+HLA-DR+增加5-10%,且不伴有CD25的增加提示巨細(xì)胞病毒感染移植后免疫監(jiān)測流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-111-血小板流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-112-血小板活化靜止血小板活化血小板流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-113-血小板活化流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)工作原理和應(yīng)用-114-網(wǎng)織血小板ITP(特發(fā)