2025屆云南省麗江市玉龍縣第一中學(xué)高三生物第一學(xué)期期末考試試題含解析

2025屆云南省麗江市玉龍縣第一中學(xué)高三生物第一學(xué)期期末考試試題注意事項(xiàng)1．考生要認(rèn)真填寫考場(chǎng)號(hào)和座位序號(hào)。2．試題所有答案必須填涂或書寫在答題卡上，在試卷上作答無效。第一部分必須用2B鉛筆作答；第二部分必須用黑色字跡的簽字筆作答。3．考試結(jié)束后，考生須將試卷和答題卡放在桌面上，待監(jiān)考員收回。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）1．對(duì)現(xiàn)代進(jìn)化理論的理解，錯(cuò)誤的是（）A．能遺傳的變異是生物進(jìn)化的基礎(chǔ)B．環(huán)境改變使生物產(chǎn)生適應(yīng)性的變異C．突變與基因重組產(chǎn)生的變異是不定向的D．變異經(jīng)過長(zhǎng)期的自然選擇和積累就可能產(chǎn)生出生物的新類型2．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞編程性死亡的敘述，正確的是A．細(xì)胞癌變屬于細(xì)胞編程性死亡B．細(xì)胞編程性死亡屬于正常生理過程C．細(xì)胞編程性死亡屬于細(xì)胞分化過程D．細(xì)胞編程性死亡與基因表達(dá)無關(guān)3．下列關(guān)于人體體溫調(diào)節(jié)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．人體和無機(jī)物都通過物理方式散熱B．恒溫動(dòng)物從高溫環(huán)境轉(zhuǎn)至低溫環(huán)境，散熱量減少C．肌肉是人在安靜時(shí)的主要產(chǎn)熱器官之一D．皮膚是人體主要的散熱器官4．水稻體細(xì)胞有24條染色體，非糯性和糯性是—對(duì)相對(duì)性狀。非糯性花粉中所含的淀粉為直鏈淀粉，遇碘變藍(lán)黑色。而糯性花粉中所含的淀粉為支鏈淀粉，遇碘變橙紅色。下列有關(guān)水稻的敘述正確的是A．要驗(yàn)證孟德爾的基因分離定律，必需用純種非糯性水稻（AA）和糯性水稻（aa）雜交，獲得F1，F(xiàn)1再自交B．用純種非糯性水稻（AA）和糯性水稻（aa）雜交獲得F1，F(xiàn)1再自交獲得F2，取F1花粉加碘染色，在顯微鏡下觀察到藍(lán)黑色花粉粒占3/4C．二倍體水稻的花粉經(jīng)離體培養(yǎng)，可得到單倍體水稻，稻穗、米粒變小D．若含有a基因的花粉50%的死亡，則非糯性水稻（Aa）自交后代基因型比例是2：3：15．下列關(guān)于脂質(zhì)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．1g油脂所含的能量是1g糖類所含能量的2倍以上B．驗(yàn)證花生組織中存在油脂，必須在顯微鏡下觀察C．脂雙層的形成是由磷脂分子的物理和化學(xué)性質(zhì)決定的D．膽固醇是細(xì)胞膜的成分之一，其作用是使細(xì)胞膜比較堅(jiān)實(shí)6．研究表明，人體的乳腺癌細(xì)胞中染色體數(shù)目為48條，若用15N標(biāo)記乳腺癌細(xì)胞DNA的雙鏈，在含14N的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)5代，下列敘述正確的是（）A．乳腺癌細(xì)胞間期染色體復(fù)制后，染色體與DNA數(shù)量均加倍B．第1代細(xì)胞在分裂中期時(shí)，只有一半染色體上含有15N標(biāo)記C．乳腺細(xì)胞癌變的原理是基因突變，其染色體未發(fā)生變異D．使用RNA聚合酶抑制劑可以抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）（生物——現(xiàn)代生物科技專題）毛角蛋白Ⅱ型中間絲（KIFⅡ）基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關(guān)。獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡(jiǎn)單流程如圖。（1）過程①中最常用的運(yùn)載工具是_______，所需要的酶是限制酶和____________。（2）在過程②中，用________處理將皮膚組織塊分散成單個(gè)成纖維細(xì)胞。在培養(yǎng)過程中，將成纖維細(xì)胞至于5％CO2的氣體環(huán)境中，CO2的作用是_________。（3）在過程③中，用_______處理以獲取更多的卵（母）細(xì)胞。成熟卵（母）細(xì)胞在核移植前需要進(jìn)行________處理。（4）從重組細(xì)胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術(shù)是_________。在胚胎移植前，通過_______技術(shù)可獲得較多胚胎。8．（10分）某地區(qū)果農(nóng)開墾荒山種植果樹，發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)（養(yǎng)雞、養(yǎng)兔），栽培食用菌等，形成生態(tài)果園，提高了生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益。回答下列問題：（1）荒山變果園，說明人類活動(dòng)會(huì)使群落演替按照不同于自然演替的___________進(jìn)行。（2）該果園中養(yǎng)雞、養(yǎng)兔增加了___________的復(fù)雜性，加快物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)，提高果園生產(chǎn)力。果農(nóng)在雞舍安裝補(bǔ)充光源，延長(zhǎng)光照時(shí)間，提高了雞的產(chǎn)蛋量，由此說明信息傳遞在生態(tài)系統(tǒng)中的作用是______________________。（3）食用菌在該生態(tài)系統(tǒng)中的組成成分屬于______________，其作用是_________________。9．（10分）下圖為培育某種轉(zhuǎn)基因抗蟲植物的過程示意圖。請(qǐng)回答下列問題：（1）實(shí)施基因工程的核心操作是________，目的是________。（2）圖中將含抗蟲基因的質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌前，常用________處理農(nóng)桿菌。一般情況下，不能用未處理的農(nóng)桿菌作為受體細(xì)胞，原因是________________。（3）重組Ti質(zhì)粒上的青霉素抗性基因是作為________。含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與愈傷組織在培養(yǎng)基2上共同培養(yǎng)的目的是________________。由植物未成熟的胚獲得愈傷組織的過程稱為________。（4）培養(yǎng)基2與培養(yǎng)基3中所添加物質(zhì)的主要區(qū)別是除了特定的、起篩選作用的物質(zhì)外，還有________的不同。10．（10分）癌細(xì)胞表面蛋白“PDL-1”與T細(xì)胞表面蛋白“PD-1”特異性結(jié)合后，可抑制T細(xì)胞活性并啟動(dòng)其凋亡，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫“逃逸”。研究者對(duì)“PD-1”基因進(jìn)行克隆、表達(dá)及生物學(xué)活性鑒定，為制備抗體打基礎(chǔ)。研究中所用引物α和β堿基序列見圖1、幾種常用限制酶名稱及識(shí)別序列與酶切位點(diǎn)見圖2：α鏈：5'-TCACTCGAGACCATGCAGATCCCACAGGCGCCC-3'β鏈：5'-CTCGAATTCTCAGAGGGGCCAAGAGCAGTG-3'圖1（1）首先提取細(xì)胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄生成____________________作為模板；設(shè)計(jì)含有不同的限制酶切點(diǎn)的α和β序列為引物，通過____________________技術(shù)擴(kuò)增目的基因。（2）選用圖1中的兩種名稱分別為____________________的限制酶將“pIRES2-EGFP質(zhì)?！陛d體進(jìn)行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構(gòu)建表達(dá)載體。該表達(dá)載體的組成，除了目的基因、標(biāo)記基因抗卡那霉素基因外，還必須具有____________________等。（3）而后一定溫度下，與經(jīng)過處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有_____________培養(yǎng)基中，可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌，繼續(xù)培養(yǎng)該種大腸桿菌以擴(kuò)增重組DNA。（4）將擴(kuò)增后的“pIRES2-EGFP載體/PD-1重組DNA”轉(zhuǎn)入可高度表達(dá)外源基因的原代293T細(xì)胞。一段時(shí)間后，為確定PD-1基因是否表達(dá)，檢測(cè)細(xì)胞膜表面是否具有____________________。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能，則可裂解293T細(xì)胞，提取該物質(zhì)看能否與____________________發(fā)生結(jié)合，從而阻斷“PD-1與PDL-1信號(hào)通路”。研究中還會(huì)有一步驟，只將“pIRES2-EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞，其目的是_________________________。11．（15分）人t-PA蛋白能高效溶解血纖維蛋白凝聚的血栓。用傳統(tǒng)基因工程生產(chǎn)的t-PA給心?；颊叽髣┝孔⑸鋮s會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血，原因在于其與血纖維蛋白結(jié)合的特異性低，但若將其第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，就能顯著降低出血副作用。據(jù)此，科學(xué)家對(duì)人t-PA基因進(jìn)行序列改造，再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該突變基因，制造出了高性能的t-PA突變蛋白。（1）人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA。絲氨酸的密碼子為UCU，突變基因中對(duì)應(yīng)該氨基酸密碼子的堿基序列應(yīng)設(shè)計(jì)為______。（2）上述獲得突變目的基因的基本途徑是___。（3）如圖所示t-PA突變基因、質(zhì)粒，用__________限制酶切開該質(zhì)粒較好。（4）將相應(yīng)的重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中，含t-PA突變基因的細(xì)胞應(yīng)具有的性狀是______。（5）上述生物工程技術(shù)是以_______為基礎(chǔ)的，首先通過________，再進(jìn)行______，以滿足醫(yī)療需求的。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）1、B【解析】

現(xiàn)代生物進(jìn)化理論的基本觀點(diǎn)：種群是生物進(jìn)化的基本單位；生物進(jìn)化的實(shí)質(zhì)在于種群基因頻率的改變；突變和基因重組、自然選擇及隔離是物種形成過程的三個(gè)基本環(huán)節(jié)。通過它們的綜合作用，種群產(chǎn)生分化，最終導(dǎo)致新物種的形成。其中突變和基因重組產(chǎn)生生物進(jìn)化的原材料，自然選擇使種群的基因頻率發(fā)生定向的改變并決定生物進(jìn)化的方向，隔離是新物種形成的必要條件?！驹斀狻緼、可遺傳的變異能為生物進(jìn)化提供原始材料，所以遺傳和變異是自然選擇發(fā)生作用的基礎(chǔ)，A正確；B、變異是不定向的，在環(huán)境變化之前就存在，環(huán)境只是對(duì)生物的變異起到了選擇的作用，B錯(cuò)誤；C、突變與基因重組產(chǎn)生的變異是不定向的，而自然選擇是定向的，因此自然選擇能決定生物進(jìn)化的方向，C正確；D、變異經(jīng)過長(zhǎng)期的自然選擇和積累，就會(huì)導(dǎo)致生物間基因庫的差異增大，當(dāng)生物之間形成生殖隔離時(shí)，就產(chǎn)生了新物種，D正確。故選B。【點(diǎn)睛】本題考查現(xiàn)代生物進(jìn)化理論的主要內(nèi)容，要求考生識(shí)記現(xiàn)代生物進(jìn)化理論的主要內(nèi)容，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)。2、B【解析】

細(xì)胞編程性死亡是由基因所決定的細(xì)胞自動(dòng)結(jié)束生命的過程，受到嚴(yán)格的由遺傳機(jī)制決定的程序性調(diào)控，是一種正常的生理過程。而細(xì)胞癌變是由于原癌基因和抑癌基因發(fā)生突變，導(dǎo)致正常細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂失控所致。因此，B正確。3、B【解析】

人是恒溫動(dòng)物，恒溫動(dòng)物在低溫環(huán)境中要減少散熱，增加產(chǎn)熱，而在高溫環(huán)境中，要增加散熱，這樣才能維持體溫相對(duì)穩(wěn)定。溫度感受器接受體內(nèi)、外環(huán)境溫度的刺激，通過下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞的活動(dòng)，相應(yīng)地引起內(nèi)分泌腺、骨骼肌、皮膚血管和汗腺等組織器官活動(dòng)的改變，從而調(diào)整機(jī)體的產(chǎn)熱和散熱過程，使體溫保持在相對(duì)恒定的水平。皮膚是主要的散熱器官，在寒冷的刺激下，皮膚溫度感受器產(chǎn)生反射性的血管收縮反應(yīng)，皮膚溫度下降，散熱量減少；在溫?zé)岬拇碳は?，刺激皮膚中另一種溫度感受器產(chǎn)生反射性的血管舒張反應(yīng)，血流量增加?！驹斀狻緼、人體和無機(jī)物都通過物理方式散熱，如輻射、對(duì)流、蒸發(fā)等，A正確；B、恒溫動(dòng)物從高溫環(huán)境轉(zhuǎn)至低溫環(huán)境，散熱量增加，但是機(jī)體會(huì)通過一系列活動(dòng)減少散熱量，B錯(cuò)誤；C、安靜時(shí)主要靠?jī)?nèi)臟、腦、肌肉等組織產(chǎn)熱，C正確；D、人體主要靠皮膚散熱，D正確。故選B。4、D【解析】

分離定律的驗(yàn)證可以用測(cè)交法，如果是植物，還可以用花粉鑒定法?！驹斀狻緼、用純種非糯性水稻（AA）和糯性水稻（aa）雜交，獲得F1，然后取F1的花粉用碘液染色，用顯微鏡觀察到花粉一半呈藍(lán)黑色、一半呈橙紅色，即可驗(yàn)證孟德爾的基因分離定律，A項(xiàng)錯(cuò)誤；B、用純種非糯性水稻（AA）和糯性水稻（aa）雜交獲得F1（Aa），F(xiàn)1可產(chǎn)生含A、a基因的兩種數(shù)量相等的花粉，所以取F1花粉加碘染色，在顯微鏡下觀察到藍(lán)黑色花粉粒占1/2，B項(xiàng)錯(cuò)誤；C、二倍體水稻的花粉經(jīng)離體培養(yǎng)，可得到單倍體水稻，由于單倍體水稻體細(xì)胞內(nèi)不含同源染色體，所以不能產(chǎn)生可育配子，表現(xiàn)為高度不育，故C項(xiàng)錯(cuò)誤；D、由于含有a基因的花粉50%的死亡，所以該植株產(chǎn)生的雌配子是A∶a＝1∶1，而雄配子是A∶a＝2∶1，自交后代中三種基因型之比為AA∶Aa∶aa＝（1/2×2/3）∶（1/2×2/3＋1/2×1/3）∶（1/2×1/3）＝2∶3∶1，D項(xiàng)正確。故選D。5、B【解析】

1、脂質(zhì)的種類及功能：（1）脂肪：良好的儲(chǔ)能物質(zhì)；（2）磷脂：構(gòu)成生物膜結(jié)構(gòu)的重要成分；（3）固醇：分為膽固醇（構(gòu)成細(xì)胞膜的重要成分，在人體內(nèi)參與血液中脂質(zhì)的運(yùn)輸）、性激素（能促進(jìn)人和動(dòng)物生殖器官的發(fā)育以及生殖細(xì)胞的形成）、維生素D（能有效促進(jìn)人和動(dòng)物腸道對(duì)鈣和磷的吸收）?！驹斀狻緼、油脂中C、H的比例遠(yuǎn)高于同等質(zhì)量的糖類，因此1g油脂所含的能量是1g糖類所含能量的2倍以上，A正確；B、向花生種子勻漿中滴加蘇丹Ⅲ染液，可以直接觀察顏色反應(yīng)，把花生種子制作成臨時(shí)裝片，必須在顯微鏡下才能觀察到顏色變化，B錯(cuò)誤；C、磷脂分子的性質(zhì)頭部親水，尾部疏水，而細(xì)胞內(nèi)外是液體環(huán)境，因此磷脂分子在細(xì)胞膜中呈雙層排列，而且頭部分布在外側(cè)。由此可見，脂雙層的形成是由磷脂的物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)決定的，C正確；D、細(xì)胞膜上的上磷脂和膽固醇使細(xì)胞膜既有一定的流動(dòng)性又比較堅(jiān)實(shí)，D正確。故選B?！军c(diǎn)睛】本題考查脂質(zhì)的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記脂質(zhì)的組成元素、種類及其功能，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)，屬于考綱識(shí)記層次的考查。6、D【解析】

1、DNA的復(fù)制是半保留復(fù)制，以兩條鏈作為模板進(jìn)行的。2、（1）間期：進(jìn)行DNA的復(fù)制和有關(guān)蛋白質(zhì)的合成；（2）前期：核膜、核仁逐漸解體消失，出現(xiàn)紡錘體和染色體；（3）中期：染色體形態(tài)固定、數(shù)目清晰；（4）后期：著絲點(diǎn)分裂，姐妹染色單體分開成為染色體，并均勻地移向兩極；（5）末期：核膜、核仁重建、紡錘體和染色體消失。【詳解】A、間期染色體復(fù)制后，DNA分子數(shù)目加倍，而染色體數(shù)目不變，A錯(cuò)誤；B、由于DNA的復(fù)制方式是半保留復(fù)制，所以第1代細(xì)胞在分裂中期時(shí)，每條染色體上都有15N標(biāo)記，B錯(cuò)誤；C、乳腺細(xì)胞癌變的原理是基因突變（堿基對(duì)發(fā)生了堿基對(duì)的增添、缺失和替換），染色體上DNA分子的堿基排列順序發(fā)生改變，C錯(cuò)誤；D、使用RNA聚合酶抑制劑可以抑制癌細(xì)胞中基因的表達(dá)，進(jìn)而抑制癌細(xì)胞的增殖，D正確。故選D。【點(diǎn)睛】解答本題的B選項(xiàng)中，需要結(jié)合半保留復(fù)制和細(xì)胞分裂的特點(diǎn)進(jìn)行分析。二、綜合題：本大題共4小題7、質(zhì)粒DNA連接酶胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）維持培養(yǎng)基（液）的pH促性腺激素（或促濾泡素，孕馬血清）去核早期胚胎培養(yǎng)胚胎分割【解析】

分析題圖：圖示表示獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡(jiǎn)單流程圖，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程需要限制酶和DNA連接酶；②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程，該過程需要采用胰蛋白酶處理組織塊以獲得單個(gè)細(xì)胞；③表示卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)過程?！驹斀狻浚?）基因工程中，運(yùn)載工具包括質(zhì)粒、噬菌體及動(dòng)植物病毒等，其中質(zhì)粒是主要運(yùn)載工具，化學(xué)本質(zhì)是雙鏈環(huán)狀的DNA，所需要的酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。

（2）胰蛋白酶可將組織塊分散成單個(gè)細(xì)胞；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要一定的氣體環(huán)境（95%氧氣和5%二氧化碳），其中5%CO2的作用是維持培養(yǎng)基（液）的pH。

（3）要得到更多的卵（母）細(xì)胞需用促性腺激素對(duì)動(dòng)物進(jìn)行超數(shù)排卵處理；成熟卵（母）細(xì)胞在核移植前需要進(jìn)行去核處理，以保證克隆后代的遺傳性狀主要來自于供體核。從重組細(xì)胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術(shù)是早期胚胎培養(yǎng)，在胚胎移植前，通過技術(shù)胚胎分割可獲得較多胚胎。8、速度和方向營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)生物種群的繁衍，離不開信息的傳遞分解者能將動(dòng)植物遺體和動(dòng)物的排遺物分解成無機(jī)物【解析】

人類活動(dòng)往往會(huì)使群落的演替按照不同于自然演替的方向和速度進(jìn)行。信息傳遞的作用：（1）生命活動(dòng)的正常進(jìn)行，離不開信息的作用；（2）生物種群的繁衍，也離不開信息的傳遞；（3）信息還能夠調(diào)節(jié)生物的種間關(guān)系，以維持生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定?！驹斀狻浚?）荒山變果園，說明人類活動(dòng)會(huì)使群落演替按照不同于自然演替的方向和速度進(jìn)行。（2）該果園中養(yǎng)雞、養(yǎng)兔，增加了生物的種類和數(shù)量，使該生態(tài)系統(tǒng)中形成更多的食物鏈，因此增加了營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。根據(jù)題干信息“果農(nóng)在雞舍安裝補(bǔ)充光源，延長(zhǎng)光照時(shí)間，提高了雞的產(chǎn)蛋量”，說明生物種群的繁衍，離不開信息的傳遞。（3）食用菌屬于真菌，在該生態(tài)系統(tǒng)中的組成成分屬于分解者，其作用是能將動(dòng)植物遺體和動(dòng)物的排遺物分解成無機(jī)物。【點(diǎn)睛】本題考查人類活動(dòng)對(duì)群落演替的影響、信息傳遞的作用以及生態(tài)系統(tǒng)的組成成分和作用等知識(shí)，意在考查考生對(duì)所學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)的識(shí)記和理解能力。9、基因表達(dá)載體的構(gòu)建使目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)并能遺傳給子代Ca2+未處理的農(nóng)桿菌吸收質(zhì)粒的能力極弱標(biāo)記基因篩選得到含有重組質(zhì)粒的愈傷組織脫分化生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的濃度及比例【解析】

分析題圖可知，重組Ti質(zhì)粒中，抗蟲基因?yàn)槟康幕?，青霉素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因；將重組Ti質(zhì)粒通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入受體細(xì)胞中；將植物未成熟的胚放入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，脫分化后形成愈傷組織，愈傷組織作為受體細(xì)胞與農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，獲得具有重組Ti質(zhì)粒的愈傷組織，最終培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因作物?！驹斀狻浚?）基因工程的核心操作時(shí)基因表達(dá)載體的構(gòu)建；目的是使目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)并能遺傳給子代；（2）含抗蟲基因的質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌之前，常用Ca2+處理農(nóng)桿菌獲得感受態(tài)細(xì)胞；未處理的農(nóng)桿菌由于吸收質(zhì)粒的能力極弱，一般不用作受體細(xì)胞；（3）重組Ti質(zhì)粒上的青霉素抗性基因是作為標(biāo)記基因；含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與愈傷組織在培養(yǎng)基2上共同培養(yǎng)的目的是篩選得到含有重組質(zhì)粒的愈傷組織；由植物未成熟的胚獲得愈傷組織的過程稱為脫分化；（4）培養(yǎng)基2與培養(yǎng)基3分別用于篩選愈傷組織與培養(yǎng)愈傷組織，所以添加物質(zhì)中，還有生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的濃度比例不同?！军c(diǎn)睛】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，其中涉及植物組織培養(yǎng)、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、標(biāo)記基因的使用與農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法等相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，需要學(xué)生將所學(xué)的零散知識(shí)連接起來，理解題圖所示的實(shí)驗(yàn)各個(gè)步驟的含義以及注意事項(xiàng)。10、cDNAPCRXhoIEoRI啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)卡那霉素PD-1蛋白PDL-1或答PD-1抗體作為對(duì)照【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因采用DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA采用分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)采用抗原—抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫（cDNA）。其中基因組文庫包含某種生物所有的基因，而部分基因文庫只包含某種生物的部分基因，可以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄形成cDNA；由于PCR技術(shù)利用的是DNA分子復(fù)制的原理，所以用該cDNA進(jìn)行PCR技術(shù)擴(kuò)增短時(shí)間內(nèi)可以獲得大量的目的基因。（2）分析圖1中堿基序列，α鏈上有“—CTCGAC—”識(shí)別序列，β鏈上有“—GAATTC—”堿基識(shí)別序列，與圖2中XhoI限制酶和EoRI限制酶的識(shí)別序列相同。故選用XhoI限制酶和EoRI限制酶將“pIRES2-EGFP質(zhì)?！陛d體進(jìn)行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構(gòu)建基因表達(dá)載體。基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)等。（3）根據(jù)第（2）題可知，基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，因此一定溫度下，與經(jīng)過Ca2+處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有卡那霉素的培養(yǎng)基，可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌。（4）基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，一段時(shí)間后，為確定PD-1基因是否表達(dá)，可以檢測(cè)細(xì)胞膜表面是否具有PD-1基因表達(dá)的PD-1蛋白。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能，可采用抗原—抗體雜交技術(shù)，即從裂解293T細(xì)胞中，提取PD-1蛋白看能否與PDL-1發(fā)生結(jié)合，從而阻斷“PD-1與PDL-1信號(hào)通路”。為了增加實(shí)驗(yàn)的可信度，還需要設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，只將“pIRES2-EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞，因?yàn)椴缓琍D-1基因