DB11∕T 1809-2020 實驗動物 微生物檢測

DB11北京市市場監(jiān)督管理局發(fā)布 1459.4—2018《實驗動物微生物檢測與評價第4部分:實驗用狨猴》、DB11/T1459.5—2018《實）；本文件主要起草人：岳秉飛、王淑菁、馮育芳、李曉波、邢進、王吉、付瑞、賀爭鳴、姚波、魏強、向志光、佟巍、張麗芳、阮研碩、李長龍、薩曉嬰、戴方偉、陳振文、杜實驗動物微生物檢測貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿、實驗魚（斑馬魚和劍尾魚）的微生物檢法對待檢實驗動物的精神狀態(tài)、行為、被毛、天然孔分泌物進行外觀▲▲▲▲▲▲▲●▲●○○○▲ ●級●●●○●●●●●●●○○○ ●●●●●●●●●●●●●●●●級●○●○●○ ●○○●●注：“▲”表示必檢項，普通級實驗動物可以免疫，無特定病原體級實驗動物和無特定抗▲▲▲▲●○○○○○ ○○▲▲●●●●●○○○○○○○●●●●●●● ●●●○○○ ●●●●● ○○○●●●○●●●●●○●●●●○●●●●○○●●●●○●●●○●●●●●●●●●●●●●●○○○○○●●●●●▲▲▲●●●●●●●○○○○○○○●●●●○●▲▲▲▲●○●●●●●○●●○○●●○○○○○○●表7實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿各等級▲▲▲○▲●●●▲▲傳染性喉氣管炎病毒（InfectionLaryngotracheitis▲ ▲▲▲▲●▲ ▲ ▲● ●●○●●● ●●● ▲ 級●●●○●●●●●●傳染性喉氣管炎病毒（InfectionLaryngotracheitis● ●●●○○● ● ●●●●●● ● ●●○● ● ○●●○●●●●● ●●● ● ●●●●●●●●注：“▲”表示必檢項，普通級實驗動物可以免疫，無特定病原體級實驗動物和無特定抗●●●●●●○●●●●●●○●●●●●●○○○○○●6.1.1實驗小型豬、實驗豬、實驗牛、實驗羊、實驗狨猴、實驗長6.1.2麻醉應根據(jù)不同動物種類、采集部位決定是否需要麻醉。需6.1.4需要時可根據(jù)臨床癥狀和前期檢測結果，進一步采集動!↓!!!6.2.2實驗魚的麻醉應方便于檢查、6.2.3需要時可根據(jù)臨床癥狀和前期檢測結果，進一步采集動↓!!!!!↓↓實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿病原微生物學檢實驗魚抽樣數(shù)量：同一水環(huán)境實驗魚數(shù)量少于100尾，>500按照檢測規(guī)則，若檢測指標有1項（含）以上不合格，依據(jù)表1～表8，判為不符合相應空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙蒸水作根據(jù)vp2基因序列（GenBan上游引物序列（5′-3′）：AGTTCAACAAG）：20μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2+）2μL，dNTP（21μL，Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板DNA2μL，最后用滅菌雙陽性對照出現(xiàn)301bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)301bp目的片段時，判定貓泛白細胞減少癥病毒陽性；未出現(xiàn)301bp目的片段時，判定貓泛白細胞減少癥病毒陰性?？瞻讓φ眨涸跀U增反應階段設置。以滅菌雙蒸水作U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。上游引物序列（5′-3′）：AACCTGCGC）：25μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2各1.5μL，Taq酶（5U/μL）1.0μL，模板cDNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。陽性對照出現(xiàn)926bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)926bp目的片段時，判定貓杯狀病毒陽性；未出現(xiàn)926bp目的片段時，判定貓杯狀病空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙蒸水作根據(jù)tk基因序列（GenBank：FJ上游引物序列（5′-3′）：ATACTGTCCGCA）：20μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2+）2μL，dNTP（21μL，Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板DNA2μL，最后用滅菌雙陽性對照出現(xiàn)531bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)531bp目的片段時，判定貓皰疹病毒I型陽性；未出現(xiàn)531bp目的片段時，判定貓皰疹病毒I型陰性?？瞻讓φ眨涸跀U增反應階段設置。以滅菌雙蒸水作U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。上游引物序列（5′-3′）：AGAACCTGGTGATA）：探針（5′-3′FAM）TATGCCTGTGGAGGGCCTTCCT（TAMRA）50μL體系包括2×Mixbuffer2U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。）：）：25μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2各1.5μL，Taq酶（5U/μL）1.0μL，模板cDNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。陽性對照出現(xiàn)223bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)223bp目的片段時，判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現(xiàn)223bp目的片段時，判定貓傳染性腹膜炎病U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。）：）：各1.0μL，Taq酶（4U/μL）0.5μL，模板cDNA1.0μL，最后用滅菌雙蒸水陽性對照出現(xiàn)366bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)366bp目的片段時，判定貓腸道冠狀病毒陽性；未出現(xiàn)366bp目的片段時，判定貓腸道冠狀病U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。陽性對照出現(xiàn)269bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)269bp目的片段時，判定空腸彎曲桿菌陽性；