第二章 微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)課件

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)

微生物的純培養(yǎng)及顯微技術(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第一節(jié)微生物的分離和培養(yǎng)培養(yǎng)物（Cluture）：在一定條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物（MixedCluture）：含多種微生物的培養(yǎng)物；純培養(yǎng)物（PureCluture）：只有一種微生物的培養(yǎng)物；

純培養(yǎng)技術(shù)是進(jìn)行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以重復(fù)的結(jié)果在研究中所使用的微生物培養(yǎng)群體：第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)無菌技術(shù)用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)單細(xì)胞（單孢子）分離選擇培養(yǎng)分離微生物的保藏技術(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)一、無菌技術(shù)在轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)微生物室防止其他微生物的污染；其自身不污染操作環(huán)境在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)(物)時防止其被其他微生物污染的技術(shù)。用于分離、培養(yǎng)微生物的器皿事先不含任何微生物；幻燈片5第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)1、微生物培養(yǎng)的常用器具：試管、三角瓶、培養(yǎng)皿等第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2、保持無菌的方法高壓蒸氣滅菌（最常見）高溫干熱滅菌棉塞超凈工作臺無菌接種高壓滅菌鍋第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)接種操作火焰（酒精燈等）附近超凈工作臺第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)二、用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)菌落（cloney）

單個（或聚集在一起的一團(tuán)）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長群體眾多菌落連成一片菌苔（lawn）第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)各種微生物形成的菌落特征第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)同一細(xì)菌在不同培養(yǎng)基上形成不同菌落特征第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)平板分離微生物純培養(yǎng)技術(shù)（原理及方法）稀釋倒平板法

涂布平板法

平板劃線法

稀釋搖管法

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)1、稀釋倒平板法（傾注平板法

pourplatemethod）無菌水、梯度稀釋、50-55℃左右的瓊脂培養(yǎng)基、滅過菌的培養(yǎng)皿。注意要稀釋得當(dāng)。分離出單個菌落以后，重復(fù)上述操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)十倍稀釋法第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：適合分離和計(jì)數(shù)目的局限：操作麻煩；

不合適熱敏感菌；

不適合嚴(yán)格好氧菌；

同一微生物，培養(yǎng)基內(nèi)外形成菌落形態(tài)差異第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2、涂布平板法（spreadplatemethod）無菌水、梯度稀釋涂布平板Liquidspecimenisspreadonthesurfaceofsolidagarwithasterileglassrod。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：簡單易行；常規(guī)用法局限：涂布不均與；

易造成機(jī)械損傷第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)稀釋倒平板法&涂布平板法第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)3、平板劃線法（streakplatemethod）Aninoculatingloopisusedtothinoutorganismsonthesurfaceoftheagar.第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)劃線方法第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)特點(diǎn)：快速、方便。分區(qū)劃線（適用于濃度較大的樣品）連續(xù)劃線（適用于濃度較小的樣品）第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)厭氧罐4、厭氧微生物的分離第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)厭氧手套箱第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)密封容器除氧方法生物方法

與需氧微生物共同培養(yǎng)物理方法抽氣法——將培養(yǎng)物置真空干燥器中抽真空，再培養(yǎng)。充氣法——把培養(yǎng)物放一密閉貯器中充入N2（排盡空氣）第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)化學(xué)方法化學(xué)吸氧法——利用化學(xué)反應(yīng)耗氧達(dá)到形成厭氧環(huán)境的目的。用焦性沒食子酸（1g）與NaOH（10%）反應(yīng)除氧（100ml空氣中的O2）。密閉容器中利用硫磺或磷的燃燒耗氧形成厭氧環(huán)境NaHSO3+NaCO3混和反應(yīng)耗氧培養(yǎng)基預(yù)還原法培養(yǎng)基中加入還原劑（半胱氨酸、Na2S、Vc）再隔絕空氣培養(yǎng)，適于培養(yǎng)專性厭氧菌。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)稀釋搖管法（shaketubemethod)

用于分離嚴(yán)格厭氧菌。試管培養(yǎng)基融化

50℃保溫

樣品梯度稀釋后加入試管培養(yǎng)基中

搖勻冷卻凝固

石蠟油封閉

培養(yǎng)。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)特點(diǎn)：嚴(yán)格厭氧菌分離技術(shù)；

適用缺乏專業(yè)設(shè)備的情況局限：觀察和挑取菌落難第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)三、用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)用于細(xì)胞大的細(xì)菌、原生動物和藻類等的純化分離。稀釋法：經(jīng)高度稀釋后，同一個稀釋度的試管中大多數(shù)（95%以上）表現(xiàn)不生長，很可能得到的是純培養(yǎng)。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)四、顯微單細(xì)胞（單孢子）分離法適合混合菌中的少數(shù)菌；一般采用顯微操作儀，在顯微鏡下進(jìn)行；操作難度與細(xì)胞或個體大小成反比毛細(xì)管法：用毛細(xì)管提取微生物個體，適合于較大微生物。顯微操作儀：用顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。小液滴法：將經(jīng)適當(dāng)稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含一個細(xì)胞的液滴來進(jìn)行純培養(yǎng)物分離第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)五、選擇培養(yǎng)分離當(dāng)微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化使待分離的微生物在群落中數(shù)量上升，方便用稀釋法對其進(jìn)行純化使待分離的微生物生長“突出”直接挑取待分離的微生物的菌落獲得純培養(yǎng)抑制大多數(shù)其他微生物的生長；使待分離的微生物生長更快；第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)高溫條件下分離高溫菌；培養(yǎng)基添加抗生素，分離抗性菌；培養(yǎng)基中不含N，分離固氮菌1、利用選擇平板進(jìn)行直接分離第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2、富集培養(yǎng)主要是指利用不同微生物間生命活動特點(diǎn)的不同，制定特定的環(huán)境條件，使僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)如果要從環(huán)境中分離得到僅能夠利用苯作為碳源和能源的微生物純培養(yǎng)物，你該如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案？（1）富含苯采樣（2）十倍稀釋（3）培養(yǎng)（富集或直接篩選）（4）對照培養(yǎng)（利用空氣中的CO2的自養(yǎng)型微生物）第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)二元培養(yǎng)物

純培養(yǎng)物：只有一種微生物的培養(yǎng)物?；旌吓囵B(yǎng)物：含有兩種以上微生物的培養(yǎng)物。二元培養(yǎng)物：只含兩種微生物且有意識地保持二者之間特定關(guān)系的培養(yǎng)物。病毒和宿主細(xì)胞第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)六、微生物的保藏技術(shù)影響微生物菌種穩(wěn)定性的因素：

a）變異

b）污染

c）死亡

基本要求：在一定時間內(nèi)使菌種不雜、不亂、不衰、不退基本原理：

菌種：優(yōu)良純種（最好是休眠體）

手段：低溫、缺氧、缺乏營養(yǎng)、添加保護(hù)劑等

環(huán)境：生長受到抑制，難以突變第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)1、傳代培養(yǎng)保藏法是微生物保存的基本方法。瓊脂斜面、半固體瓊脂柱和液體培養(yǎng)等。橡皮塞封口或用石蠟覆蓋，并放置低溫保存4-6℃保存。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)斜面低溫保藏法

原理：低溫

方法：將菌種接種在新鮮斜面培養(yǎng)基上

適溫培養(yǎng)至生長完全

4℃冰箱保藏

每隔一段時間移接一次

優(yōu)點(diǎn)：適用于各種微生物；簡便易行；易于觀察；缺點(diǎn)：保藏時間短；傳代次數(shù)多；易變異；易污染、保藏時間：霉4個月酵4—6個月

放3個月細(xì)1—2個月改良方法：橡皮塞取代棉塞、加礦油第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2、石蠟油封藏法原理：低溫、缺氧方法：將無菌石蠟油注入生長良好的斜面種試管內(nèi)（油量高出斜面1cm）

包扎后豎直放入冰箱保藏。說明：保藏時間1—2年；斜面培養(yǎng)基能干燥則保藏效果好；適于各種微生物，尤其適合絲狀真菌和擔(dān)子菌能同化和敏感烴類的微生物不宜用此法。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)3、砂土管保藏法（干燥-載體保藏）原理：干燥、缺氧方法：取河砂若干，24目過篩

10%HCl浸泡24h

水洗至中性

烘干后分裝安瓿瓶或試管，加棉塞滅菌無菌檢查

每管加孢子懸液，接種環(huán)拌勻

干燥器中干燥

火焰熔封或蠟封

干燥器中保藏說明：適于保藏霉菌和放線菌孢子及芽孢桿菌時間2—10年一般細(xì)菌芽孢常用砂土管保藏，霉菌的孢子多用麩皮管保藏。一般細(xì)菌芽孢常用砂土管保藏，霉菌的孢子多用麩皮管保藏。一般細(xì)菌芽孢常用砂土管保藏，霉菌的孢子多用麩皮管保藏。一般細(xì)菌芽孢常用砂土管保藏，霉菌的孢子多用麩皮管保藏。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)4、液氮超低溫保藏法（冷凍保藏法）原理：低溫方法：將菌種置于保護(hù)劑中，預(yù)凍后保存在液氮超低溫冰箱中（-196℃）。優(yōu)點(diǎn)：適用于各種微生物的較理想的保藏方法。缺點(diǎn)：專門的設(shè)備；運(yùn)輸過程比較麻煩；操作要求第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)5、真空冷凍干燥法原理：低溫、干燥、真空（缺氧）方法：將菌種用保護(hù)劑制成菌懸液，先在極低溫度下快速冷凍，再在極低的溫度下抽真空干燥，使其中的水分直接升華為水蒸汽，以達(dá)干燥的目的。常用的細(xì)胞保護(hù)劑：血清、脫脂牛奶、淀粉、葡聚糖優(yōu)點(diǎn)：適用各種微生物；便于大量保藏；可避免污染變異率低；菌種存活時間長（幾到幾十年）缺點(diǎn)：操作過程復(fù)雜，需要一定的專業(yè)設(shè)備

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)幾種常用菌種保藏方法的比較第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)菌種保藏機(jī)構(gòu)的任務(wù)：廣泛收集科研和生產(chǎn)菌種、菌株，并加以妥善保管，使之達(dá)到不死、不衰、不亂以及便于研究、交換和使用的目的。菌種保藏機(jī)構(gòu)：中國微生物菌種保藏委員會(CCCCM)

美國的典型菌種保藏中心(ATCC)

英國國家典型菌種保藏所（NCTC）法國里昂巴斯德研究所（IPL）國內(nèi)外菌種保藏機(jī)構(gòu)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)七、菌種的衰退與復(fù)壯1、菌種的衰退衰退（degeneration）：菌種在培養(yǎng)或保藏過程中，由于自發(fā)突變的存在，出現(xiàn)某些原有優(yōu)良生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標(biāo)記的丟失等現(xiàn)象，稱為菌種的衰退。常見的衰退現(xiàn)象：

菌落和細(xì)胞形態(tài)的改變；生長速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少；抵抗力、抗不良環(huán)境能力減弱；代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力或其對宿主寄生能力下降等第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2、衰退的原因①基因突變，②分離現(xiàn)象3、防止菌種衰退的方法采用不同類型的細(xì)胞進(jìn)行傳代（對絲狀微生物而言，通常采用穩(wěn)定的單核孢子進(jìn)行接種）選擇合適的培養(yǎng)條件控制傳代次數(shù)（一般在DNA的復(fù)制過程中，堿基的錯配率是5x10-4，自發(fā)突變的頻率為10-8~10-9，采用良好的菌種保藏方法，可以減少移種和傳代的次數(shù)）采用有效的菌種保藏方法第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)4、

菌種的復(fù)壯（rejuvenation）

使衰退的菌種恢復(fù)原來優(yōu)良性狀。狹義的復(fù)壯是指在菌種已發(fā)生衰退的情況下，通過純種分離和生產(chǎn)性能測定等方法，從衰退的群體中找出未衰退的個體，以達(dá)到恢復(fù)該菌原有典型性狀的措施；

廣義的復(fù)壯是指在菌種的生產(chǎn)性能未衰退前就有意識的經(jīng)常、進(jìn)行純種的分離和生產(chǎn)性能測定工作，以期菌種的生產(chǎn)性能逐步提高。

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)菌種的復(fù)壯措施：純種分離（平板劃線法、涂布法、傾注法、單細(xì)胞挑取法等）通過寄主體內(nèi)生長進(jìn)行復(fù)壯（如Bacillusthuringiensis的復(fù)壯）；淘汰已衰退的個體（采用比較激烈的理化條件進(jìn)行處理，以殺死生命力較差的已衰退個體）采用有效的菌種保藏方法第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第二節(jié)顯微鏡的種類及顯微技術(shù)

（了解）

顯微鏡的種類及原理顯微觀察樣品的制備

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)一、顯微鏡的種類及原理

普通光學(xué)顯微鏡暗視野顯微鏡相差顯微鏡熒光顯微鏡透射電子顯微鏡掃描電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)光學(xué)顯微鏡原理利用物鏡和目鏡的多組凸透鏡將物象逐漸放大并放射到視網(wǎng)膜的過程第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)分辨率肉眼分辨率一般只有0.25mm光學(xué)顯微鏡分辨率0.18μm電子顯微鏡可達(dá)0.2nmd=0.5λ/ｎsinαＲ

（１／ｄ）式中：n=介質(zhì)折射率；α=鏡口角（標(biāo)本對物鏡鏡口的張角），ｎsinα

=鏡口率介質(zhì)空氣水香柏油α溴萘折射率11.331.5151.66第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)普通生物顯微鏡由三部分構(gòu)成：機(jī)械裝置：保證光學(xué)系統(tǒng)的準(zhǔn)確配制，用于固定材料和觀察方便。照明系統(tǒng)：包括光源和聚光器。光學(xué)放大系統(tǒng)：由物鏡和目鏡組成，是顯微鏡的主體，為了消除球差和色差，目鏡和物鏡都由復(fù)雜的透鏡組構(gòu)成。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理機(jī)械裝置光學(xué)裝置聚光器聚光器透鏡虹彩光圈升降螺旋顯微鏡的放大倍數(shù)：物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)顯微鏡使用的方法原因分析現(xiàn)象可能原因解決辦法視野內(nèi)沒有物像要觀察的標(biāo)本不在視野內(nèi)調(diào)整玻片位置物鏡頭與玻片標(biāo)本間的距離大于或小于低（高）倍鏡的工作距離重新調(diào)節(jié)焦距標(biāo)本太小需用推進(jìn)器反復(fù)找或更換標(biāo)本標(biāo)本的顏色淺或透明調(diào)節(jié)聚光鏡或光圈，使視野變暗第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)明視野顯微鏡明視野顯微鏡即常用的普通光學(xué)顯微鏡，生活的細(xì)菌在明視野顯微鏡下觀察是透明的，不易看清。解決的措施，一方面是對觀察的樣品進(jìn)行改造，發(fā)展出各種染色技術(shù)，通過特殊的染色方法使細(xì)胞著色，增加與背景的反差，便于觀察；另一方面進(jìn)行顯微鏡的改造，由此發(fā)展出不同種類的顯微鏡，適用于不同的觀察目的。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2、暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡是應(yīng)用了特殊聚光器，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。應(yīng)用：生活細(xì)菌運(yùn)動性觀察。特點(diǎn):只能看到物體的存在與運(yùn)動，不能辨清其微細(xì)結(jié)構(gòu)。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)3、相差顯微鏡光波的長短表現(xiàn)為顏色差別，光的振幅高低表現(xiàn)為明亮程度的不同。觀察樣品各部分厚薄、密度不同，光線通過時直射光和衍射光的光程產(chǎn)生差別，導(dǎo)致出現(xiàn)相位差。相差顯微鏡配備了特殊的光學(xué)裝置，利用光的干涉現(xiàn)象，將光的相位差轉(zhuǎn)變成人眼可辨的振幅差（明暗差），形成反差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。應(yīng)用：觀察活的細(xì)胞以及細(xì)胞內(nèi)的一些細(xì)微結(jié)構(gòu)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)4、熒光顯微鏡紫外線光源照射在具有熒光素的樣本上，激發(fā)出熒光，使標(biāo)本在暗的視野中顯現(xiàn)出光亮的物體，不同的熒光素還表現(xiàn)為不同的顏色，由此可以進(jìn)行定性和定量的研究。應(yīng)用：生物組織、生理、病理、微生物、醫(yī)藥、食品、化學(xué)等諸方面的鑒定等第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的差異：1）以電子波(波長最短可達(dá)到0.005nm)代替光源，電鏡實(shí)際的分辨率比光鏡提高約1000倍。2）電鏡鏡筒中要求高真空。所以很難觀察活的生物。3）以電子透鏡（電磁圈）代替光學(xué)透鏡，4）電子像人肉眼看不到，需用熒光屏來顯示或感光膠片作記錄。

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)電子顯微鏡按結(jié)構(gòu)和用途可分為：透射電子顯微鏡(transmissionelectronmicroscope):電子束穿過薄切片掃描電子顯微鏡(scanningelectronmicroscope):觀察樣品的表面結(jié)構(gòu)

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)二、顯微觀察樣品的制備

要根據(jù)顯微鏡和樣品的特點(diǎn)來制備主要講述光學(xué)顯微鏡的制樣。

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)1、活體觀察壓滴法：將菌懸液滴于載玻片上，加蓋蓋玻片后立即進(jìn)行顯微鏡觀察。懸滴法：在蓋玻片中央加一小滴菌懸液后反轉(zhuǎn)置于特制的凹載玻片上后進(jìn)行顯微鏡觀察，為防止液滴蒸發(fā)變干，一般還應(yīng)在蓋玻片四周加封凡士林。菌絲埋片法：將無菌小塊玻璃紙鋪于平板表面，涂布放線菌或霉菌孢子懸液，經(jīng)培養(yǎng)，取下玻璃紙置于載玻片上，用顯微鏡對菌絲的形態(tài)進(jìn)行觀察。插片法：

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2、染色觀察固定的目的：殺死細(xì)菌并使菌體粘附于玻片上。增加細(xì)菌對染料的親和力。常用的方法有酒精燈火焰加熱和化學(xué)固定二種第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)細(xì)菌染色法死菌正染色負(fù)染色：莢膜染色法等簡單染色法鑒別染色法革蘭氏染色法抗酸性染色法芽孢染色法姬姆薩染色法活菌:用美藍(lán)或TTC（氯化三苯基四氮唑）等作活菌染色染色觀察第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)滴加少量水挑取菌體涂片干燥固定染色水洗干燥第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第三節(jié)顯微鏡下的微生物原核微生物——指細(xì)胞核無核膜、無核仁，沒有染色體，不進(jìn)行有絲分裂的微生物。真核微生物——指具有完整的細(xì)胞核、有核仁、核膜、染色體，能進(jìn)行有絲分裂的微生物。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)一、細(xì)菌和古生菌定義：細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短（細(xì)胞直徑約0.5um，長度約0.5~5um）、結(jié)構(gòu)簡單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌、以二等分裂方式繁殖和水生性較強(qiáng)的原核微生物。生存環(huán)境：溫暖潮濕、富含有機(jī)物的地方，都有大量細(xì)菌活動。有特殊的臭味或酸敗味，發(fā)粘、發(fā)滑。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)1、細(xì)菌的形態(tài)和排列

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)（1）球菌形狀：球形（獨(dú)存）或近似球形（幾個連在一起，稍扁）大小：?0.5～1μm分裂與排列：第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)單球菌細(xì)胞分裂沿一個平面進(jìn)行，新個體分散而單獨(dú)存在.如尿素微球菌(Micrococcusureae)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)細(xì)胞沿一個平面分裂，新個體成對排列.

如肺炎雙球菌(Diplococcuspneumoniae)雙球菌第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)細(xì)胞沿一個平面進(jìn)行分裂，新個體不但可保持成對的樣子，并可連成鏈狀.如：乳鏈球菌（Streptococcuslactis）無乳鏈球菌（Streptococcusagalactiae)溶血鏈球菌（Streptococcushemolyticus)鏈球菌第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)細(xì)胞分裂是沿兩個相垂直的平面進(jìn)行，分裂后每四個細(xì)胞特征性地連在一起，呈田字形.如四聯(lián)微球菌（Micrococcustetragenus）四聯(lián)球菌第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)細(xì)胞按三個互相垂直的平面進(jìn)行分裂后，每八個球菌特征性地連在一起成立方體形.

如藤黃八疊球菌（Sarcinaureae)八疊球菌第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)細(xì)胞無定向分裂，多個新個體形成一個不規(guī)則的群體，猶如一串葡萄。如金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)白色葡萄球菌（Staphylcoccusalbus)葡萄球菌第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)桿菌是細(xì)菌中種類最多的類型,因菌種不同,菌體細(xì)胞的長短、粗細(xì)等都有所差異。桿菌的形態(tài)：短桿狀、長桿狀、棒桿狀、梭狀桿狀、月亮狀、竹節(jié)狀等；短桿菌（2）桿菌(bacillus)及其排列狀態(tài)大腸桿菌第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)長桿菌梭狀芽孢桿菌第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)大小：1～5μm×0.5～μm形狀：主要桿狀或圓柱形。其它：青煙狀、弧狀、胡蘿卜狀、大腦骨狀、分枝狀、絲狀分裂：二分分裂；折斷分裂斷面不規(guī)則，子細(xì)胞大小不一；出芽分裂排列：鏈狀；柵欄狀；八”字狀；分散隨機(jī)排列 Bacterialshape第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)鏈狀

2）桿菌的排列狀態(tài)X,V或Y型柵欄狀第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)3）桿菌端部特征-1

大腸桿菌(鈍圓)肉毒梭菌(梭狀)炭疽桿菌（平截）第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)桿菌是細(xì)菌中種類最多的，工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中所用的細(xì)菌大多是桿菌，如淀粉酶、蛋白酶生產(chǎn)菌--枯草桿菌，谷氨酸生產(chǎn)菌--北京棒桿菌，細(xì)菌肥料--根瘤菌，殺蟲劑--蘇云金桿菌，致病菌--傷寒沙門氏菌，痢疾志賀氏菌等。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)（3）螺旋菌(spirilla)螺旋狀的細(xì)菌稱為螺旋菌。

根據(jù)其彎曲情況分為：

弧菌（vibrio)：螺旋不滿一圈，菌體呈弧形或逗號形

例：霍亂弧菌、逗號弧菌

螺旋菌(spirillum)：螺旋滿2—6環(huán)，螺旋狀

例：干酪螺菌

螺旋體(spirochaeta)：旋轉(zhuǎn)周數(shù)在6環(huán)以上，菌體柔軟。例：梅毒密螺旋體Vibriocholerae第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)4.特殊形狀的細(xì)菌柄細(xì)菌、腎形菌、臂微菌、網(wǎng)格硫細(xì)菌、貝日阿托氏菌(絲狀)、具有子實(shí)體的粘細(xì)菌等是特殊形態(tài)的細(xì)菌。粘細(xì)菌柄細(xì)菌臂微菌腎形菌網(wǎng)格硫細(xì)菌貝日阿托氏菌第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)影響細(xì)菌形態(tài)的因素培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基成分、濃度、pH值結(jié)核桿菌的正常形態(tài)結(jié)核桿菌的異常形態(tài)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)（二）細(xì)菌的大小(1)測量：測微尺(2)長度單位：微米(μm)(3)表示：球菌：直徑桿菌：寬×長螺菌：寬、長、螺距通常球菌直徑：0.2—

1.5

μm，

桿菌:長1—5μm,寬0.5—1μm。例如：E.coli：平均長度：2μm；寬度0.5μm1500個大腸桿菌頭尾相接等于3mm;109個大腸桿菌重1mg.第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)細(xì)菌大小舉例

菌名

直徑或?qū)挕灵L/

（μm×μm

）乳鏈球菌金黃色葡萄球菌大腸桿菌枯草芽孢桿菌霍亂弧菌0.5~10.8~10.5×(1~3)(0.8~1.2)×(1.2~3)(0.2~0.6)×(1~3)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2、古生菌（自學(xué)）與細(xì)菌有著類似的個體形態(tài)，但多生活在極端環(huán)境中如高溫、高鹽等。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)二、真菌

霉菌

酵母菌

第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)1霉菌(molds)霉菌(mould)是一些絲狀真菌的通稱，并不是分類學(xué)上的名稱。在自然界分布很廣。大量存在于中性或偏酸性土壤中。概念分類位置分布應(yīng)用危害第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)1、霉菌霉菌即絲狀真菌，有分枝與不分枝、無隔菌絲（根霉、毛霉）與有隔菌絲（青霉、曲霉）之分。

菌絲體：由許多菌絲交織在一起而組成。

在固體培養(yǎng)基上，真菌菌絲可分為：營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)霉菌菌絲類型按分化程度分：依形態(tài)分：1)營養(yǎng)菌絲(Vegetatilehypha):

在固體培養(yǎng)基上伸入基內(nèi)的菌絲.行吸收養(yǎng)料之功能.2)氣生菌絲(Aerialhypha):

向空中生長的菌絲.發(fā)育到一定階段可分化成孕育（繁殖）菌絲（Reproductivehypha）.霉菌（青霉）的菌絲第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)霉菌菌絲類型①依形態(tài)分：②按分化程度分：無隔菌絲：為長管狀單細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含多個核。其生長表現(xiàn)為菌絲的延長和細(xì)胞核的增多。這是低等真菌所具有的菌絲類型。有隔菌絲菌絲中有隔膜，被隔膜隔開的一段菌絲就是一個細(xì)胞，菌絲由多個細(xì)胞組成，每個細(xì)胞內(nèi)有一至多個核。隔膜上有單孔或多孔，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核可自由流通，每個細(xì)胞功能相同。這是高等真菌所具有的類型。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)菌落特征：霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，多呈絨毛狀、絮狀或網(wǎng)狀等，菌體可沿培養(yǎng)基表面蔓延生長，由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈紅、黃、綠、青綠、青灰、黑、白、灰等多種顏色。液體培養(yǎng)時的特征：如果是靜止培養(yǎng)，菌絲往往在液體表面生長，液面上形成菌膜。如果是震蕩培養(yǎng)，菌絲可相互纏繞在一起形成菌絲球，亦可形成絮片狀，與震蕩震蕩速度有關(guān)。霉菌的培養(yǎng)特征第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)（2）重要的代表霉菌與人類的關(guān)系非常密切。日常生活中衣物、食品的發(fā)霉現(xiàn)象、釀酒（根）、制醬（曲）、做腐孔（毛霉）、生產(chǎn)抗生素等。霉菌是人們在實(shí)踐活動中認(rèn)識最早并加以利用的一類微生物。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)2酵母菌——yeast

酵母菌是一類單細(xì)胞真菌的俗稱，分類學(xué)上分屬于子囊菌綱和半知菌類。特征:

1.

個體一般以單細(xì)胞狀態(tài)存在；

2.

多數(shù)營出芽生殖，有的裂殖；

3.

能發(fā)酵糖類產(chǎn)能；

4.

細(xì)胞壁常含有甘露聚糖；

5.

喜在含糖量較高、酸度較大的水生環(huán)境中生長。分布：偏酸性的含糖環(huán)境。水果、蔬菜、蜜餞的表面，果園土壤中與環(huán)境有關(guān)。酵母菌與人類的關(guān)系極其密切。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)（1）酵母菌的形態(tài)和大小細(xì)胞直徑比細(xì)菌粗10倍左右，?1—5μm×5～30μm。因此在光學(xué)顯微鏡下可以模糊地看到它們細(xì)胞內(nèi)的各種結(jié)構(gòu)分化。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)通常有球狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀、香腸狀及假絲狀等多種。第二章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)酵母菌用途主要用途有：