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DB41DB41/T1515—2017豬乙型腦炎病毒RT-PCR檢測(cè)方法2017-12-06發(fā)布2018-03-06河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1豬乙型腦炎病毒RT-PCR檢測(cè)方法適用于對(duì)疑似豬乙型腦炎病毒感染的腦組織、血液，精液，流產(chǎn)胎兒、死胎、木乃伊胎等樣），2.1.5裂解液（TriZol），氯仿，0），2采集的樣品密封后，采用保溫壺或保溫桶加冰密封，盡快運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室。樣品在2℃~8℃條件）；配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)混合液，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)混合液成份含：M-MLV5×Reactionbuffer(含Mg2+)，4μ2.5mMdNTPs，4μL；M-MLV，0.5μL；RNA酶抑制劑，0.5μL；反轉(zhuǎn)錄引物（JEV-P2，也是RT-P34.3RT-PCR擴(kuò)增緩沖液，使液面剛剛沒(méi)過(guò)凝膠。取5～10μLPCR擴(kuò)增產(chǎn)物分別和3μL上樣緩沖液混合后，分別加樣到凝膠孔。5V/cm恒壓下電泳30min左右。將電泳若在314bp位置上條帶極弱，應(yīng)做復(fù)核試驗(yàn)，再次出現(xiàn)314bp大小條帶判定為豬乙型腦炎病毒4A.11×核酸電泳緩沖液：Tris堿，24.2g；冰乙酸，5.71mL；0.5mol/LEDA.20.01mol/L（pH7.2）的0.01mol/LPBS的配制：A液14mL，B液36mL，加NaCl8.5g，最后用蒸餾水稀釋并定容至10mL；121℃,15min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆谩?PCR擴(kuò)增上游引物PCR擴(kuò)增下游引物67

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