微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 10項(xiàng)目十：細(xì)菌接種技術(shù)

項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)1、掌握分區(qū)劃線細(xì)菌接種技術(shù)、連續(xù)劃線接種技術(shù)的目的、方法。2、掌握斜面接種技術(shù)、穿刺接種技術(shù)的目的、方法。3、了解液體培養(yǎng)基接種技術(shù)、傾注平板法的目的、方法。思維導(dǎo)圖項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)一、細(xì)菌的接種工具項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)一、細(xì)菌的接種工具（一）接種環(huán)與接種針接種環(huán)與接種針是微生物檢驗(yàn)中用來取菌、接種和分離細(xì)菌的器具，接種環(huán)是用來劃線、純菌轉(zhuǎn)種、分離培養(yǎng)和挑取菌落及菌液、制備細(xì)菌涂片等。接種針主要用于挑取單個(gè)菌落、穿刺接種及斜面接種細(xì)菌等。一、細(xì)菌的接種工具（二）紅外線接種環(huán)滅菌器紅外接種環(huán)滅菌器是采用紅外線熱能進(jìn)行滅菌的微生物檢驗(yàn)儀器。使用方便，操作簡單，無明火，不怕風(fēng)，使用安全?？蓮V泛用于厭氧培養(yǎng)箱、生物安全柜及運(yùn)動的車輛等環(huán)境中進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)。二、細(xì)菌接種方法項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)（一）、分區(qū)劃線接種技術(shù)概述

分區(qū)劃線接種技術(shù)是指把混雜在一起的不同種類的細(xì)菌或同一細(xì)菌群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在固體瓊脂胚芽及表面通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離細(xì)菌的純種。由于這種單菌落并非都由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。此種方法多用于含細(xì)菌量較多的臨床標(biāo)本，如膿汁、糞便等。（一）、分區(qū)劃線接種技術(shù)

方法

右手持接種環(huán)，先將接種環(huán)滅菌，待冷卻后從待分離標(biāo)本中挑取少量標(biāo)本，左手持瓊脂平板，將接種環(huán)深入皿內(nèi)，先在培養(yǎng)基一角涂成直徑約1cm大小的薄膜，并以此為起點(diǎn)在瓊脂表面接續(xù)不重疊劃線作為第一區(qū)；然后燒灼接種環(huán)，轉(zhuǎn)動平皿至合適操作的位置，將接種環(huán)通過第一區(qū)3~4次，連續(xù)劃線，線與線之間不要重疊作為第二區(qū)，，依次畫第3、4、5。平板上每一區(qū)的細(xì)菌數(shù)會逐漸減少，直至分離出單個(gè)菌落。這里需要注意的是除了最后一區(qū)，其余各區(qū)劃線面積不得超過平板面積的1/4。（一）、分區(qū)劃線接種技術(shù)

方法

各區(qū)之間交叉3~4次，各區(qū)間交角大約為120?，畫完第一區(qū)，第二、三、四區(qū)接種環(huán)需要滅菌。經(jīng)過18~24h培養(yǎng)，第四區(qū)出現(xiàn)了很多單菌落，即為細(xì)菌的“純種”（一）、分區(qū)劃線接種技術(shù)方法（二）、連續(xù)劃線接種技術(shù)概述

連續(xù)劃線也是細(xì)菌分離純化的一種方法，將含有多種細(xì)菌的臨床標(biāo)本和固體培養(yǎng)物，經(jīng)過連續(xù)劃線接種到固體培養(yǎng)基表面，由于劃線的分散作用，使原來混雜在一起的細(xì)菌細(xì)胞在培養(yǎng)基表面分開呈單個(gè)菌，經(jīng)18~24h培養(yǎng)后就得到單個(gè)菌落。此法適用于含細(xì)菌量不多的標(biāo)本或棉拭子、咽拭子。（二）、連續(xù)劃線接種技術(shù)方法

將標(biāo)本或棉拭子、咽拭子等直接涂布于培養(yǎng)基的1/5處，然后以此為起點(diǎn)開始用接種環(huán)或棉拭子、咽拭子在平板表面連續(xù)不重疊劃線并逐漸下移，直至劃滿整個(gè)瓊脂平板表面。（二）、連續(xù)劃線接種技術(shù)方法（三）、斜面接種技術(shù)概述

斜面接種技術(shù)主要用于保存菌種或細(xì)菌純種增菌，也可以用于某些生化反應(yīng)鑒定試驗(yàn)，如枸櫞酸鹽、尿素和克氏雙糖鐵培養(yǎng)基的接種。但由于目的不同，接種的方法也略有差異。（三）、斜面接種技術(shù)方法

用于保存菌種或細(xì)菌純培養(yǎng)的斜面接種法是將接種環(huán)（接種針）燒灼滅菌，挑取單個(gè)菌落從培養(yǎng)基底部向上劃一條直線，再從底部開始向上連續(xù)不重疊劃曲線接種，線條盡可能的密且均勻；或者直接自下而上劃曲線接種。用于生化反應(yīng)鑒定的高層斜面培養(yǎng)基接種方法是用接種針挑取待鑒定細(xì)菌的菌落，一般挑取菌落的頂端，先用接種針插入斜面正中垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上劃曲線接種。斜面接種法（三）、斜面接種技術(shù)方法高層斜面接種法（四）、穿刺接種技術(shù)概述穿刺接種技術(shù)是用接種針從菌種斜面上挑取少量菌體并把它穿刺到固體或半固體的深層培養(yǎng)基中。穿刺接種法多用于半固體培養(yǎng)基或克氏雙糖鐵、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種。其中，半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可用于觀察細(xì)菌的動力。（四）、穿刺接種技術(shù)方法

接種時(shí)用接種針挑取細(xì)菌菌落，由培養(yǎng)基中央垂直刺入，至距管底約0.4cm處，在沿穿刺線退出接種針；克氏雙糖鐵、明膠等有高層斜面之分的培養(yǎng)基，先穿刺高層部分，退出接種針后直接劃線接種斜面部分。（五）、液體培養(yǎng)基接種技術(shù)概述液體培養(yǎng)基接種技術(shù)是由斜面菌種接種到液體培養(yǎng)基中的方法。此種方法多用于各種液體培養(yǎng)基，例如肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。（五）、液體培養(yǎng)基接種技術(shù)方法用接種環(huán)挑取單個(gè)菌落，傾斜液體培養(yǎng)管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立后液體淹沒接種物為準(zhǔn)）。此接種方法應(yīng)盡量避免接種環(huán)與液體培養(yǎng)基接觸，更不應(yīng)在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實(shí)驗(yàn)室污染。（六）、傾注平板技術(shù)概述傾注平板技術(shù)是使標(biāo)本中的細(xì)菌細(xì)胞充分分