微生物學檢驗技術(shù) 課件 17項目十七：微生物檢驗自動化和微型化

項目十七微生物檢驗自動化和微型化學習目標1.掌握臨床常用微生物自動培養(yǎng)系統(tǒng)種類及檢測原理。1.熟悉微生物數(shù)碼分類原理。2.了解臨床常用自動化藥敏試驗種類及檢測原理。3.具有正確自動化檢驗儀器來檢測微生物的能力。4．能進行臨床常見微生物檢驗的自動化和微型化操作。思維導圖一、微生物自動培養(yǎng)系統(tǒng)（一）自動血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)

基本原理

（1）放射性物質(zhì)標記法

一般采用放射性碳14標記法：細菌生長時利用標記底物產(chǎn)生含14C的CO2，當14C標記的CO2量超過界限時，檢測器報告陽性生長。

（2）二氧化碳感受器

每一血液培養(yǎng)瓶底部都含有Novel顏色感應器，當血液培養(yǎng)瓶內(nèi)有微生物生長釋出之CO2后，感應器之酸堿值也跟著改變，從深綠色變?yōu)辄S色，檢測器報告陽性。

（3）均質(zhì)熒光技術(shù)

在血培養(yǎng)基內(nèi)含有發(fā)熒光物質(zhì)。微生物生長代謝過程中產(chǎn)生各種帶電荷的原子團，培養(yǎng)瓶發(fā)出的熒光，即可檢測有細菌存在。

2．儀器的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑

全自動恒溫孵育系統(tǒng)包括恒溫裝置和震蕩培養(yǎng)裝置，儀器培養(yǎng)瓶容量常分為60瓶、120瓶、240瓶等，對培養(yǎng)瓶進行震蕩恒溫培養(yǎng)，溫度常設(shè)為37℃。儀器均配置電腦，在電腦上可設(shè)置培養(yǎng)時間、溫度等參數(shù)，顯示陽性或陰性瓶所在的位置，及自動分析。3．注意事項及結(jié)果報告制度（1）培養(yǎng)瓶的選擇如果患者未使用抗生素，可選擇一般需氧菌培養(yǎng)瓶，如果已經(jīng)使用抗生素則選用可中和血液中抗生素的培養(yǎng)瓶。如懷疑厭氧菌、L型菌、真菌、分枝桿感染，則選用厭氧菌培養(yǎng)瓶、L型菌培養(yǎng)瓶、真菌培養(yǎng)瓶、分枝桿菌培養(yǎng)瓶。（2）采血時間對入院患者中有高熱、寒戰(zhàn)、白細胞增多或疑有感染者，最好在使用抗生素前采血送檢。住院患者出現(xiàn)發(fā)熱等敗血癥癥狀時，應及時采血，盡可能在使用抗生素前采血。已使用抗生素的患者最好在下次使用抗生素前采血。（3）采血量采血量一般為血培養(yǎng)瓶中肉湯培養(yǎng)基量的1/4-1/5為宜，成人一般每次采集3-10ml，以8-10ml最佳，小兒一般每次采集1-3ml即可。每天最好采血2-3次，以提高檢出率，并幫助判斷是感染菌或污染菌。（4）采血方法一般多從肘靜脈采血，采集前應嚴格消毒采血部位，采血過程中注意無菌操作，否則易被皮膚表面細菌污染，導致假陽性。使用真空采血系統(tǒng)，利用配套的一次性使用的無菌采血管，血液因負壓作用進入培養(yǎng)瓶中。（5）標本送檢采血后應及時送檢，檢驗者收到血培養(yǎng)瓶后應盡快上機。如不能及時送檢，應將血培養(yǎng)瓶放置室溫保存。（二）自動分枝桿菌培養(yǎng)檢測系統(tǒng)

多數(shù)自動血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)可檢測血液中的分枝桿菌，目前針對分枝桿菌有專門的自動分枝桿菌培養(yǎng)檢測系統(tǒng)，可對各類標本中的分枝桿菌進行培養(yǎng)及檢測，原理基本同自動血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)，配套專門的培養(yǎng)瓶。一般將各類標本直接送檢，檢驗者收到標本后，如為清亮的穿刺液標本，可直接注入培養(yǎng)瓶內(nèi)，放入儀器自動培養(yǎng)并檢測。如為痰液等其他含有雜菌或細胞的標本，應先進行消化、中和等處理后再注入培養(yǎng)瓶，否則會導致假陽性結(jié)果。二、微生物鑒定的自動化與微型化二、微生物鑒定的自動化和微型化（一）微生物數(shù)碼分類原理1．數(shù)據(jù)庫由許多細菌條目組成，每個條目代表一個細菌種或一個細菌生物型。2．編碼將細菌生化反應模式轉(zhuǎn)換成數(shù)學模式，可把生化反應結(jié)果快速轉(zhuǎn)錄成數(shù)字（編碼），經(jīng)查閱編碼檢索本或電腦分析系統(tǒng)又可將數(shù)字轉(zhuǎn)化成相應的細菌名稱。3．查碼在編碼檢索本內(nèi)尋找數(shù)碼信息：如菌名，鑒定結(jié)果的評價，生化結(jié)果，陽性百分率，必須增加的補充試驗項目，指出注意要點等。/basis沙雷氏菌屬4．解釋

如果一個編碼只對應一種細菌，無論幾率大小，為該種細菌的可能性(ID%)均為99.99%。如果一個編碼對應兩種或兩種以上種類的細菌，應計算每種細菌出現(xiàn)的幾率所占的百分比ID%。如ID%≥99%，為該種菌的可能性非常大；如ID%≥90%，為該種菌的可能性較大；如ID%≥80%，為該種菌的可能性也較大，但需做補充試驗進一步確證；如ID%<80%，則一般無法準確區(qū)分菌種，必須增加多個補充試驗才可得出準確結(jié)果。（二）微生物自動鑒定儀器的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑數(shù)碼分類鑒定系統(tǒng)的組成由鑒定卡、添加試劑及檢索工具配套形成的完整的微生物鑒定體系。（1）鑒定卡常用的生化反應有：①發(fā)酵試驗；②同化試驗；③同化或發(fā)酵抑制試驗；④酶試驗；⑤其他傳統(tǒng)的生化反應。（2）添加試劑：有些試驗經(jīng)孵育后需添加試劑才能呈現(xiàn)顏色變化。添加的試劑有配套試劑盒或單種試劑。（3）檢索工具：檢索工具可由電腦自動處理并報告。三、微生物藥敏試驗的自動化與微型化三、微生物藥敏試驗的自動化和微型化（一）原理:自動化藥敏試驗使用藥敏試驗卡進行檢測，實質(zhì)就是微型化的肉湯稀釋試驗。根據(jù)不同的藥物對不同菌種最低抑菌濃度（minimalinhibitoryconcentration,MIC）的不同，每一種藥物一般選用3種或以上不同藥物濃度，每一藥敏試驗卡（板）可同時檢測約20種抗生素的藥敏試驗結(jié)果。藥敏試驗檢測原理有：光電比濁法測定細菌濃度、熒光標記法測定熒光強度的變化、氧化還原指示劑檢測細菌生長代謝產(chǎn)物等方法。經(jīng)數(shù)小時孵育后，每隔一定時間自動測定每一藥敏試驗孔中細菌生長情況，與細菌生長對照孔的結(jié)果進行比較計算出生長率。將藥敏試驗卡中各測定孔的生長率在數(shù)據(jù)庫中進行比較分析，可得到最低抑菌濃度MIC值，常參照相關(guān)標準，判斷最終結(jié)果為敏感(S)、中度敏感(MS)和耐藥(R)，并對結(jié)果進行解讀。（二）儀器的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑

微生物自動鑒定系統(tǒng)大多與藥敏試驗系統(tǒng)組合在一起，藥敏試驗系統(tǒng)常配備計算