微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件全套 胡生梅 1項(xiàng)目一：血液標(biāo)本采集與處理-33-5綜合技能訓(xùn)練：尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)

項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握血液標(biāo)本的采集和與處理方法。2．熟悉標(biāo)本的采集、送檢、處理總的原則和注意事項(xiàng)。3．具有正確采集和處理臨床常見標(biāo)本采集與處理的能力。4．能對標(biāo)本采集和處理不當(dāng)做出分析。項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理思維導(dǎo)圖項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理血液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查血液標(biāo)本的細(xì)菌培養(yǎng)是診斷敗血癥的基本方法。如從患者血液中檢出細(xì)菌，一般應(yīng)視為病原菌。菌血癥，一過性、間歇性、持續(xù)性項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理血培養(yǎng)常見的病原菌主要有金黃色或表皮葡萄球菌、鏈球菌（A，B群、肺炎鏈球菌等）、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌、腦膜炎奈瑟菌、傷寒及副傷寒沙門菌，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、不動桿菌屬、厭氧菌和念珠菌等。項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理血標(biāo)本采集和運(yùn)送：采血指征采血量:成人采血量是8～10ml,兒童1～5ml血液和肉湯之比為1∶5～1∶10血培養(yǎng)次數(shù)和采血時(shí)間具體操作標(biāo)本運(yùn)送項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理菌血癥時(shí)血液中的細(xì)菌并不多，通常僅10～20CFU/ml,故采血量大陽性率高。采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進(jìn)行,在24h內(nèi)采集2～3次做血培養(yǎng)(一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng))。對間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱，應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5

1h采集血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后1h進(jìn)行。標(biāo)本運(yùn)送:采血后應(yīng)該立即送檢,如不能立即送檢,需室溫保存或置35℃～37℃孵箱中,切勿冷藏。項(xiàng)目一血液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握膿液標(biāo)本的采集和與處理方法。2．熟悉標(biāo)本的采集、送檢、處理總的原則和注意事項(xiàng)。3．具有正確采集和處理臨床常見標(biāo)本采集與處理的能力。4．能對標(biāo)本采集和處理不當(dāng)做出分析。項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理思維導(dǎo)圖項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理膿液標(biāo)本中常見病原菌

種類革蘭陽性革蘭陰性球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、消化鏈球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌桿菌結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌、破傷風(fēng)桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、炭疽芽胞桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、擬桿菌、梭桿菌、肺炎克雷白桿菌、變形桿菌其他衣氏放線菌、諾卡菌項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理首先用無菌生理鹽水清洗病灶雜菌，用酒精消毒表面，無菌抽取貼近傷口創(chuàng)面創(chuàng)傷分泌物和膿液作標(biāo)本皮膚或下表皮的散播性感染，應(yīng)取病灶邊緣而非中央處檢測厭氧菌要注意厭氧運(yùn)送環(huán)境盡量避免接觸空氣，可床邊接種或用厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目二膿液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握痰液標(biāo)本的采集和與處理方法。2．熟悉標(biāo)本的采集、送檢、處理總的原則和注意事項(xiàng)。3．具有正確采集和處理臨床常見標(biāo)本采集與處理的能力。4．能對標(biāo)本采集和處理不當(dāng)做出分析。項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理思維導(dǎo)圖項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理呼吸系統(tǒng)感染的細(xì)菌學(xué)檢查上呼吸道：從鼻部到喉部，包括口咽和鼻咽，以及相連的腔、竇和中耳。咽炎、鼻咽炎、中耳炎、竇炎、會厭炎正常菌群：草綠色鏈球菌和肺炎鏈球菌非致病性奈瑟氏菌種、卡他布蘭漢氏菌、類白喉?xiàng)U菌嗜血桿菌酵母菌各種嚴(yán)格的厭氧性陽性球菌和革蘭氏陰性桿菌項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理下呼吸道：包括氣管、支氣管和肺氣管炎、支氣管炎、肺膿腫、肺炎項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理正常人下呼吸道基本無菌，當(dāng)機(jī)體全身或局部抵抗力減低時(shí)，上呼吸道的正常菌群可侵入下呼吸道，也可因直接吸入病原微生物或通過淋巴-血循環(huán)導(dǎo)致感染。下呼吸道標(biāo)本主要為痰液和支氣管分泌物，排出的痰液經(jīng)過咽喉及口腔后，?；煊猩虾粑赖某＞泳?。上呼吸道存在正常菌群，在采集標(biāo)本與結(jié)果分析時(shí)應(yīng)予考慮。

項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理呼吸道標(biāo)本中常見分離菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、其他葡萄球菌真桿菌、丙酸桿菌、乳酸桿菌放線菌、奴卡菌、結(jié)核分枝桿菌白喉棒狀桿菌、假絲酵母菌腦膜炎奈瑟菌、其他奈瑟菌肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌沙雷菌、變形桿菌大腸埃希菌及其他腸桿菌科細(xì)菌百日咳鮑特菌、不動桿菌銅綠假單胞菌及其他假單胞菌屬細(xì)菌、嗜肺軍團(tuán)菌、流感嗜血桿菌、副流桿嗜血桿菌項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理上呼吸道感染細(xì)菌性咽炎和扁桃體炎——化膿性鏈球菌猩紅熱、皮膚紅疹風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎百日咳——百日咳鮑特菌白喉——白喉棒狀桿菌鼻咽拭子標(biāo)本的檢測有助于猩紅熱、風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎病人的臨床診斷；還可檢出化膿鏈球菌、奮森螺旋體、腦膜炎奈瑟菌、麻風(fēng)桿菌等以協(xié)助診斷；對白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的診斷有意義，應(yīng)結(jié)合臨床。

項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理上呼吸道標(biāo)本的采集和運(yùn)送 病人朝亮光處坐立，用壓舌板壓下舌頭，無菌棉拭子擦拭扁桃體、咽喉壁及感染區(qū)域。不要接觸舌或頰表面，最好同一處用兩個(gè)拭子擦拭。

項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理下呼吸道感染咳嗽咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常見的癥狀，咳嗽的性質(zhì)與痰的性狀如膿或鐵銹樣痰具有鑒別診斷意義?？┭硪韵碌暮粑莱鲅獮榭┭?，包括泡沫血痰、鮮血和痰中帶血等。呼吸困難呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。發(fā)熱伴白細(xì)胞增高尤其是中性粒細(xì)胞或CRP明顯增高。胸部影像學(xué)檢查提示有感染可能。項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理下呼吸道標(biāo)本的采集和運(yùn)送

1.自然咳痰法：以晨痰為佳，采集標(biāo)本前應(yīng)用清水、冷開水漱口或用牙刷清潔口腔和牙齒，有假牙者應(yīng)取下假牙。盡可能在用抗菌藥物之前采集標(biāo)本。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標(biāo)本量應(yīng)≥1ml。咳痰困難者可用霧化吸入加溫至45°C的100g/LNaCl水溶液，使痰液易于排出。對難于自然咳痰患者可用無菌吸痰管抽取氣管深部分泌物。標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，不能及時(shí)送檢的標(biāo)本，室溫保存≤2h。項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理2.支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引法、經(jīng)胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法，均由臨床醫(yī)生按相應(yīng)操作規(guī)程采集，但必須注意采集標(biāo)本時(shí)盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理3.小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳痰時(shí)，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。對可疑烈性呼吸道傳染?。ㄈ鏢ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者采集檢驗(yàn)標(biāo)本時(shí)必須注意生物安全防護(hù)。項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理下呼吸道細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本涂片

顯微鏡白下細(xì)胞和鱗狀上皮細(xì)胞計(jì)數(shù)判斷標(biāo)準(zhǔn)

分類細(xì)胞數(shù)／低倍鏡結(jié)果判斷白細(xì)胞鱗狀上皮細(xì)胞A>25<10合格可用于細(xì)菌培養(yǎng)B>2510~25尚合格可用于細(xì)菌培養(yǎng)C<10>25不合格，重送標(biāo)本項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理實(shí)驗(yàn)室檢查：采集痰或鼻咽拭子要來自于呼吸道合格的標(biāo)本，以提高檢出率和陽性的正確率。鼻咽拭子的細(xì)菌學(xué)檢查應(yīng)緊密結(jié)合臨床。項(xiàng)目三痰液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握尿液標(biāo)本的采集和與處理方法。2．熟悉標(biāo)本的采集、送檢、處理總的原則和注意事項(xiàng)。3．具有正確采集和處理臨床常見標(biāo)本采集與處理的能力。4．能對標(biāo)本采集和處理不當(dāng)做出分析。項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理思維導(dǎo)圖項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理泌尿生殖道感染的細(xì)菌學(xué)檢查尿液標(biāo)本：尿路感染是人類最常見的感染之一尿路感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。診斷尿路感染最常用的方法是進(jìn)行尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查。根據(jù)感染可分為上尿路感染（如腎孟腎炎）及下尿路感染，男性還可出現(xiàn)前列腺感染，不同部位同時(shí)感染也很常見。項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理中段尿培養(yǎng)加計(jì)數(shù)對于泌尿道感染的診斷有重要價(jià)值。細(xì)菌培養(yǎng)必須結(jié)合菌落計(jì)數(shù)辨別是否為病原菌。有致病菌或條件致病菌生長，菌落計(jì)數(shù)>105/ml（球菌>104/ml），提示感染（膀胱炎，腎盂腎炎、腎或膀胱結(jié)核等）。常見病原菌主要有大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌、變形桿菌和傷寒沙門菌等。項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送采集指征有典型的尿路感染癥狀肉眼膿尿或血尿尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽性不明原因的發(fā)熱，無其他局部癥狀留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱膀胱排空功能受損泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前。

項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理采集方法：標(biāo)本采集應(yīng)力爭在未使用抗生素之前．注意避免消毒劑污染標(biāo)本，方法有：清潔中段尿：最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本，囑咐患者睡前少飲水，將前段尿排去，中段尿約10-20ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡單、易行，是最常用的尿培養(yǎng)標(biāo)本收集方法，但很容易受到會陰部細(xì)菌污染，應(yīng)由醫(yī)護(hù)人員采集或在醫(yī)護(hù)人員指導(dǎo)下由患者正確留取。

項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理恥骨上膀胱穿刺：使用無菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，但有一定的痛苦．患者難以接受。主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集。項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理直接導(dǎo)尿：按常規(guī)方法對會陰局部進(jìn)行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插人膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。但有可能將下尿道細(xì)菌引入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理采集容器應(yīng)由不與尿液成分發(fā)生反應(yīng)的惰性材料制成潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏不含防腐劑和抑菌劑廣口、具有較寬的底部、容積應(yīng)＞50ml、盒蓋易于開啟項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢、及時(shí)接種室溫下保存時(shí)間不得超過2h（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存）4℃冷藏保存時(shí)間不得超過8h應(yīng)注意冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)

項(xiàng)目四尿液標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握糞便標(biāo)本的采集和與處理方法。2．熟悉標(biāo)本的采集、送檢、處理總的原則和注意事項(xiàng)。3．具有正確采集和處理臨床常見標(biāo)本采集與處理的能力。4．能對標(biāo)本采集和處理不當(dāng)做出分析。項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理思維導(dǎo)圖項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理糞便標(biāo)本中常見的病原體腸毒素為主的病原菌霍亂弧菌、志賀菌(福氏、宋內(nèi))、大腸埃希菌(ETEC、EHEC、EAggEC)、金黃色葡萄球菌、難梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌。項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理侵襲性為主的病原菌沙門菌、大腸埃希菌(EPEC、EIEC)、志賀菌(鮑氏、志賀)、彎曲菌、副溶血弧菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、結(jié)核分枝桿菌、白假絲酵母菌。項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理臨床意義感染性腹瀉：最為常見，為胃腸炎的癥狀，由多種病原體感染所致。細(xì)菌性痢疾：是指由志賀菌屬(福氏和宋內(nèi)氏)引起的腸道傳染病。常有里急后重和膿血樣便，中毒性痢疾見于小兒。發(fā)病率呈下降趨勢。糞培養(yǎng)對診斷有價(jià)值。項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理細(xì)菌性食物中毒：常見于沙門菌、副溶血弧菌、致病性大腸埃希菌、葡萄球菌、肉毒梭菌、臘樣芽胞桿菌食物中毒。多發(fā)生在夏秋季，以暴發(fā)和集體發(fā)病為特征。致病性大腸埃希菌的腸道感染分為5類：即ETEC可致霍亂樣腸毒素水瀉，常見于兒童和旅行者腹瀉EPEC可引起嬰幼兒腹瀉EIEC可引起志賀菌樣粘液膿血便EHEC的0157：H7血清型可引起出血性腸炎和溶血性尿毒綜合征EAggEC是可引起慢性腹瀉的大腸埃希菌。

項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理糞便標(biāo)本采集常用方法有：自然排便法、直腸拭子法

，臨床多采用自然排便法采集糞便標(biāo)本。標(biāo)本立即送檢，室溫放置不能超過1小時(shí)。用物：無菌糞便盒或蠟紙盒、無菌竹簽。糞便標(biāo)本采集方法項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理自然排便法：自然排便法注意收集新鮮糞便，用無菌竹簽取膿血、粘液、組織碎片部分的糞便1～3g，液體狀糞便用無菌移液管取絮狀物，量約1～3ml。標(biāo)本采集后立即送檢。運(yùn)送途中嚴(yán)格按生物安全操作。項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理糞便標(biāo)本采集注意事項(xiàng)通常采用自然排出的糞便糞便標(biāo)本務(wù)必新鮮，不可混入尿液，盛器應(yīng)潔凈干燥，如作糞便細(xì)菌學(xué)檢查應(yīng)采集于消毒的容器內(nèi)項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)用干凈竹簽挑取有粘液或膿血部分的糞便，外觀無異常的糞便應(yīng)從糞便的表面不同部位、深處及糞端多處取材無糞便而又必須檢查時(shí)，可經(jīng)肛門指診采集糞便，灌腸或服油類瀉劑的糞便因過稀或混有油滴而不適合作檢查標(biāo)本項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理送檢的糞便標(biāo)本不能超過1小時(shí)核對患者信息是否齊全，標(biāo)本量是否符合要求觀察糞便的性狀，如有無膿血、粘液、脫落壞死的腸粘膜組織、淘米水樣、蛋花樣便水樣糞便可采用暗視野鏡檢，發(fā)現(xiàn)呈穿梭狀極活潑運(yùn)動的細(xì)菌，考慮為弧菌屬感染項(xiàng)目五糞便標(biāo)本采集與處理項(xiàng)目六細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握細(xì)菌的大小、形態(tài)與結(jié)構(gòu)。2．熟悉細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)及臨床意義。3．了解細(xì)菌的概念與分類。4．學(xué)會正確使用光學(xué)顯微鏡油鏡觀察細(xì)菌。5．學(xué)會顯微鏡下辨認(rèn)各種細(xì)菌形態(tài)和結(jié)構(gòu)。項(xiàng)目六細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)思維導(dǎo)圖項(xiàng)目六細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)一、微生物的概念與分類項(xiàng)目六細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)一、微生物的概念與分類（一）微生物的概念存在于自然界的一大群體積微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼直接看不見，必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)千倍，甚至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物。1.非細(xì)胞型微生物體積微小,能通過濾菌器，無典型細(xì)胞結(jié)構(gòu)，無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在敏感宿主活細(xì)胞內(nèi)才能增殖，如病毒、類病毒和朊病毒。（二）微生物的分類一、微生物的概念與分類2.原核細(xì)胞型微生物僅有原始核,無核膜和核仁,核呈環(huán)狀裸DNA團(tuán)塊結(jié)構(gòu)。細(xì)胞器很不完善，只有核糖體。如細(xì)菌、放線菌、衣原體、支原體、螺旋體、立克次體。（二）微生物的分類一、微生物的概念與分類3.真核細(xì)胞型微生物細(xì)胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器完整，如真菌。（二）微生物的分類一、微生物的概念與分類二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)項(xiàng)目六細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)細(xì)菌屬于原核細(xì)胞型微生物，是一類具有細(xì)胞壁的單細(xì)胞微生物，因此一個(gè)細(xì)菌就是一個(gè)細(xì)胞。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（一） 細(xì)菌的大小與形態(tài)（一） 細(xì)菌的大小與形態(tài)二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)測量細(xì)菌大小的單位是微米（μm）。多數(shù)球菌直徑為1.0μm，中等大小桿菌寬為0.3～0.5μm、長為2.0～3.0μm。同一種細(xì)菌可因菌齡不同和環(huán)境等因素而有差異。1.細(xì)菌的大小2.細(xì)菌的形態(tài)

（一） 細(xì)菌的大小與形態(tài)二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)螺形菌桿菌球菌細(xì)菌的基本形態(tài)有三種：（1）球菌外觀呈球形或近似球形，直徑1μm左右，根據(jù)繁殖時(shí)細(xì)菌分裂平面不同和分裂后菌體之間相互粘附程度不同，可有多種排列方式。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（一） 細(xì)菌的大小與形態(tài)葡萄球菌雙球菌

鏈球菌

二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（一） 細(xì)菌的大小與形態(tài)八疊球菌四聯(lián)球菌（2）桿菌形態(tài)多呈直桿狀，也有的菌體稍彎；多數(shù)呈分散存在。不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。大的桿菌如炭疽芽胞桿菌長3-10μm，中等的如大腸埃希菌長2-3μm，小的如布魯菌長僅0.6-1.5μm。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（一） 細(xì)菌的大小與形態(tài)

炭疽芽胞桿菌3-10μm大中

大腸埃希菌2-3μm小

布魯菌0.6-1.5μm棒狀桿菌鏈桿菌單桿菌分枝桿菌二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（一） 細(xì)菌的大小與形態(tài)（3）螺形菌菌體彎曲，長度不等，可分為弧菌、螺菌、螺桿菌等幾類。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（一） 細(xì)菌的大小與形態(tài)二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)1.細(xì)胞壁是細(xì)菌最外層堅(jiān)韌而富有彈性的結(jié)構(gòu)，與細(xì)胞膜緊密相連。革蘭陽性菌（G+菌）和革蘭陰性菌（G-菌）共有的細(xì)胞壁組分為肽聚糖，同時(shí)各自有其特殊組分。革蘭陽性菌細(xì)胞壁革蘭陰性菌細(xì)胞壁二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)（1）肽聚糖革蘭陽性菌的肽聚糖由聚糖骨架、四肽側(cè)鏈和五肽交聯(lián)橋3部分構(gòu)成三維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)（1）肽聚糖革蘭陰性菌的肽聚糖僅由聚糖骨架和四肽側(cè)鏈構(gòu)成二維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)（2）磷壁酸為革蘭陽性菌細(xì)胞壁所特有的成分，是由核糖醇或甘油經(jīng)磷酸二酯鍵連接而成的多聚物，包括壁磷壁酸和膜磷壁酸。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（3）外膜層為革蘭陰性菌細(xì)胞壁的特殊成分，由脂質(zhì)雙層、脂蛋白和脂多糖3部分組成。（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)脂多糖(LPS)LPS是Ｇ－菌的內(nèi)毒素脂質(zhì)A：毒性部分核心多糖：具有屬的特異性特異多糖：菌體O抗原類似于細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，雙層內(nèi)鑲嵌著多種蛋白質(zhì)稱為外膜蛋白。位于肽聚糖和脂質(zhì)雙層之間，穩(wěn)定外膜。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)脂質(zhì)雙層脂蛋白維持細(xì)菌形態(tài)抵御低滲環(huán)境參與菌體內(nèi)外的物質(zhì)交換具有免疫原性，可以誘發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答細(xì)胞壁的某些成分與細(xì)菌致病性有關(guān)二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁功能L型菌落形態(tài)大小不一，G－臨床意義：慢性和反復(fù)感染常規(guī)細(xì)菌檢查陰性二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)L型細(xì)菌葡萄球菌原型菌及L型形態(tài)組成：脂質(zhì)雙層，蛋白質(zhì)（無膽固醇）功能：物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)呼吸作用合成作用參與細(xì)菌分裂二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)2.細(xì)胞膜細(xì)胞膜內(nèi)陷、折疊形成的囊狀膜性結(jié)構(gòu)，多見于Ｇ＋菌。功能：與分裂有關(guān)；類似真核細(xì)胞線粒體。中介體二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)白喉棒狀桿菌中介體成分無色透明膠狀物，由水、蛋白質(zhì)、脂類、核酸及少量無機(jī)鹽組成功能細(xì)菌新陳代謝的場所內(nèi)含物質(zhì)粒胞質(zhì)顆粒核蛋白體二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)3.細(xì)胞質(zhì)胞質(zhì)顆粒：細(xì)菌儲存營養(yǎng)物質(zhì)。如：白喉?xiàng)U菌的異染顆粒，成分為RNA，多偏磷酸鹽質(zhì)粒細(xì)菌染色體外的雙鏈環(huán)狀DNA帶有遺傳信息，能自我復(fù)制控制細(xì)菌某些特定的遺傳性狀核糖體蛋白質(zhì)合成的場所某些抗生素作用部位二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)4.核質(zhì)細(xì)菌的遺傳物質(zhì)稱為核質(zhì)或擬核集中于細(xì)胞質(zhì)的某一區(qū)域，多在菌體中央無核膜、核仁二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（二） 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)僅在某些種類的細(xì)菌才具有的結(jié)構(gòu)二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)

莢膜莢膜二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)1.莢膜某些細(xì)菌在細(xì)胞壁外包繞的一層黏液性物質(zhì),為多糖或多肽,不易著色，經(jīng)革蘭染色后，只能見到菌體周圍有未著色的透明圈?？雇淌勺饔们v膜的功能黏附細(xì)胞作用

抗殺傷作用

抗干燥作用二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)具有免疫原性二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)2.鞭毛是某些細(xì)菌菌體表面細(xì)長呈波浪狀彎曲的絲狀物。所有的弧菌、螺菌、大多數(shù)桿菌和極個(gè)別球菌有鞭毛。鞭毛的主要成分是一種彈力纖維蛋白。二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)鞭毛的分類單毛菌雙毛菌周毛菌叢毛菌電鏡觀察特殊染色后用普通光學(xué)顯微鏡觀察壓滴法或懸滴法觀察細(xì)菌動力接種于半固體培養(yǎng)基觀察其擴(kuò)散生長現(xiàn)象二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)鞭毛的觀察運(yùn)動器官與致病性有關(guān)具有免疫原性二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)鞭毛的功能菌毛二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)3.菌毛是某些菌體表面生長的比鞭毛更細(xì)、短而直的絲狀附屬物。其化學(xué)成分是蛋白質(zhì)，須用電子顯微鏡才能看見。遍布細(xì)胞表面每菌可達(dá)數(shù)百根短而直粘附結(jié)構(gòu)每菌1～4根比普通菌毛長而粗傳遞質(zhì)粒二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)性菌毛普通菌毛二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)4.芽胞是某些細(xì)菌（主要為革蘭陽性桿菌）在不利環(huán)境條件下，細(xì)胞質(zhì)濃縮后在菌體內(nèi)形成的一個(gè)具有多層膜包裹的通透性很低的圓形或卵圓形小體。破傷風(fēng)梭菌炭疽芽胞桿菌肉毒梭菌二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)芽胞的形狀、大小及在菌體中的位置因菌種的不同而異，具有鑒別意義。判斷滅菌效果潛在病源鑒別細(xì)菌二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三） 細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)芽胞的功能增強(qiáng)細(xì)菌抵抗力三、顯微鏡油鏡的使用項(xiàng)目六細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)（一） 光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造油鏡觀察低倍鏡觀察

調(diào)節(jié)光亮度

換片用前檢查12435

用后復(fù)原6（二） 油鏡的使用方法用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔調(diào)節(jié)光亮度低倍鏡觀察：粗調(diào)、細(xì)調(diào)高倍鏡觀察油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細(xì)調(diào)至看清物象為止。換片：另換新片，必須從第三條開始操作。用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復(fù)原。（二） 油鏡的使用方法顯微鏡是貴重精密儀器，使用時(shí)要精心保護(hù)，不得隨意拆散和碰撞。取送顯微鏡時(shí)，右手持鏡臂，左手托鏡座，平端于胸前，然后輕放于桌面上或柜箱內(nèi)。鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度。觀察時(shí)，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時(shí)，右眼注視繪圖。不用時(shí)，將鏡頭轉(zhuǎn)離聚光器，油鏡頭朝前呈“八”字形，降下聚光器，對號放入鏡箱。標(biāo)本片按規(guī)定擦去鏡油后放入標(biāo)本盒，如該標(biāo)本片不再使用，則投入消毒缸內(nèi)。顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片。（三） 油鏡使用注意事項(xiàng)球形球菌螺形螺形菌桿菌形態(tài)細(xì)菌桿狀（四） 顯微鏡下辨認(rèn)細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)（四） 顯微鏡下辨認(rèn)細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)（四） 顯微鏡下辨認(rèn)細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)（四） 顯微鏡下辨認(rèn)細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)微生物是存在于自然界的一大群體積微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼直接看不見，必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)千倍，甚至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物。它可分為非細(xì)胞型微生物、原核細(xì)胞型微生物、真核細(xì)胞型微生物三類，其中細(xì)菌是原核細(xì)胞性微生物的典型代表。細(xì)菌形體微小，以微米為單位，只能用顯微鏡才能觀察到單個(gè)細(xì)菌，按其基本形態(tài)可分為球菌、桿菌和螺形菌三大類。細(xì)菌基本結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)。細(xì)菌經(jīng)革蘭染色分為革蘭陽性菌和革蘭陰性菌，二者細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)有顯著的不同，導(dǎo)致這兩類細(xì)菌在染色性、抗原性、致病性和對藥物的敏感性等方面均有很大差異。細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)有莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞。莢膜和菌毛與細(xì)菌致病性有關(guān)，鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動器官；芽胞是細(xì)菌的休眠形式，其抵抗力強(qiáng)，常作為滅菌的標(biāo)準(zhǔn)。普通光學(xué)顯微鏡最常用的一種顯微鏡，其油鏡可放大1000倍。使用油鏡時(shí)需在玻片標(biāo)本上加香柏油以保證視野足夠的亮度，提高分辨率。顯微鏡下可觀察細(xì)菌基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)，某些細(xì)菌還具有獨(dú)特的形態(tài)學(xué)特征，具有鑒定意義。項(xiàng)目小結(jié)項(xiàng)目六細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)項(xiàng)目六細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)項(xiàng)目七不染色標(biāo)本檢查學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握細(xì)菌不染色標(biāo)本檢查壓滴法和懸滴法的操作和結(jié)果觀察。2．熟悉各種不染色標(biāo)本檢查細(xì)菌的操作、注意事項(xiàng)和結(jié)果觀察。3．了解不染色標(biāo)本檢查的目的和意義。項(xiàng)目七不染色標(biāo)本檢查思維導(dǎo)圖項(xiàng)目七不染色標(biāo)本檢查一、目的和意義項(xiàng)目七不染色標(biāo)本檢查不染色標(biāo)本通常用于觀察細(xì)菌形態(tài)、動力及運(yùn)動狀況。有鞭毛的細(xì)菌運(yùn)動活潑，無鞭毛的細(xì)菌則呈不規(guī)則布朗運(yùn)動?；【⒙菪w、彎曲桿菌等細(xì)菌形態(tài)和運(yùn)動方式特征鮮明，具有診斷意義。常用的不染色檢查方法有壓滴法、懸滴法、毛細(xì)管法和暗視野顯微鏡檢查法。一、目的和意義二、常用方法項(xiàng)目七不染色標(biāo)本檢查取生理鹽水1滴于載玻片中央，挑取少許菌落或菌苔于鹽水中磨勻（或直接挑一環(huán)增菌液），取潔凈的蓋玻片一張，輕輕覆蓋其上，置顯微鏡下觀察。二、常用方法（一）壓滴法

取生理鹽水1滴于蓋玻片中央，挑取少許菌落或菌苔于鹽水中磨勻（或直接挑1~2環(huán)增菌液），取潔凈的抹有少許凡士林的凹玻片一張，翻轉(zhuǎn)蓋玻片輕輕覆蓋其上，置顯微鏡下觀察。二、常用方法（二）懸滴法用于檢查厭氧菌動力，以毛細(xì)管（長60～70mm，管徑0.5～1.0mm）接觸培養(yǎng)物，讓菌液吸入毛細(xì)管后，用火焰將毛細(xì)管兩端熔封，將毛細(xì)管固定在載玻片上鏡檢。二、常用方法（三）毛細(xì)管法光學(xué)顯微鏡的一種，是在顯微鏡中裝入特殊的暗視野聚光器。經(jīng)暗視野聚光器后，照明光線不能直接進(jìn)入物鏡，而是形成傾斜的光線通過標(biāo)本，標(biāo)本的像是由標(biāo)本散射和反射的光線形成的。數(shù)碼暗視野顯微鏡二、常用方法（四）暗示野顯微鏡檢查法暗視野顯微鏡形成的像，背景是黑暗的，像是亮的，由于反差的增大，提高了分辨率，所以適合于觀察有鞭毛的細(xì)菌等。使用時(shí)應(yīng)注意聚光器的數(shù)值孔徑應(yīng)大于物鏡的數(shù)值孔徑，以確保照明光線不進(jìn)入物鏡內(nèi)。倒置暗視野顯微鏡二、常用方法（四）暗示野顯微鏡檢查法三、影響因素項(xiàng)目七不染色標(biāo)本檢查三、影響因素操作因素制片時(shí)菌液要適量，不可有氣泡，不可外溢。制片后盡快觀察，避免水分蒸發(fā)而影響觀察結(jié)果。玻片因素玻片應(yīng)選擇清潔無油漬的進(jìn)行操作。使用暗視野顯微鏡時(shí)，載玻片的厚度以1.0～1.1mm為宜，太厚則影響調(diào)焦。光線因素不染色標(biāo)本檢驗(yàn)時(shí)，顯微鏡鏡下光線不易太亮?？赏ㄟ^調(diào)節(jié)光圈大小和聚光器位置來控制光線的亮度，以達(dá)到最加效果。不染色標(biāo)本通常用于觀察細(xì)菌形態(tài)、動力及運(yùn)動狀況。有鞭毛的細(xì)菌運(yùn)動活潑，無鞭毛的細(xì)菌則呈不規(guī)則布朗運(yùn)動。弧菌、螺旋體、彎曲桿菌等細(xì)菌形態(tài)和運(yùn)動方式特征鮮明，具有診斷意義。常用的不染色檢查方法有壓滴法、懸滴法、毛細(xì)管法和暗視野顯微鏡檢查法。影響不染色標(biāo)本檢查的主要因素有：操作因素、玻片因素和光線因素。項(xiàng)目小結(jié)項(xiàng)目七不染色標(biāo)本檢查項(xiàng)目七不染色標(biāo)本檢查項(xiàng)目八染色標(biāo)本檢查學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握革蘭染色和抗酸染色的原理、操作及結(jié)果判斷。2．熟悉細(xì)菌染色標(biāo)本檢查的一般程序。3．了解特殊結(jié)構(gòu)染色法和負(fù)染色法。4．能夠正確使用光學(xué)顯微鏡油鏡觀察細(xì)菌。5．嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，注意生物安全。項(xiàng)目八染色標(biāo)本檢查思維導(dǎo)圖項(xiàng)目八染色標(biāo)本檢查一、染色標(biāo)本檢查的一般程序項(xiàng)目八染色標(biāo)本檢查只用一種染料對細(xì)菌進(jìn)行染色的方法主要用于觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)和排列方式。常用的染料有亞甲藍(lán)、結(jié)晶紫、石炭酸復(fù)紅等堿性染料。染色方法為：細(xì)菌標(biāo)本經(jīng)涂片、干燥固定后，滴加染液染色1分鐘，水洗后待玻片干燥后即可在顯微鏡下進(jìn)行觀察。一、染色標(biāo)本檢查的一般程序（一）單染色法（二）復(fù)染色法用兩種或兩種以上的染料對細(xì)菌進(jìn)行染色的方法。既可以觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)與排列方式，又能鑒別細(xì)菌的染色性。最常用的是革蘭染色法。細(xì)菌染色的一般程序：

涂片--干燥--固定--初染—媒染--脫色--復(fù)染一、染色標(biāo)本檢查的一般程序二、常用染色方法項(xiàng)目八染色標(biāo)本檢查細(xì)菌革蘭染色是由丹麥病理學(xué)家ChristainGram于1884年創(chuàng)立的一種染色技術(shù)，后經(jīng)學(xué)者改進(jìn)一直沿用至今，是細(xì)菌檢驗(yàn)平臺經(jīng)常使用而不可或缺的檢驗(yàn)技術(shù)之一。通過革蘭染色可以將細(xì)菌分為革蘭陽性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-），不僅為分類鑒定提供依據(jù)，而且能夠指導(dǎo)臨床用藥。二、常用染色方法（一）革蘭染色法滲透學(xué)說G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，脂類含量少G-菌細(xì)胞壁較疏松，脂類物質(zhì)多化學(xué)學(xué)說G+菌細(xì)胞內(nèi)含大量核糖核酸鎂鹽G-菌含核糖核酸鎂鹽少等電點(diǎn)學(xué)說G+菌等電點(diǎn)低，pH2-3G-菌等電點(diǎn)高，pH4-5二、常用染色方法（一）革蘭染色法1.革蘭染色原理結(jié)晶紫染液1盧戈氏碘液295%酒精3稀釋石炭酸復(fù)紅4二、常用染色方法（一）革蘭染色法2.革蘭染液配置結(jié)晶紫10g95%酒精100mlA液草酸銨1g蒸餾水100mlB液結(jié)晶紫乙醇飽和溶液100ml1%草酸銨水溶液100mlA液20mlB液80ml結(jié)晶紫染液100ml二、常用染色方法（一）革蘭染色法（1）結(jié)晶紫染液碘化鉀2g蒸餾水100ml碘化鉀水溶液100ml碘1g蒸餾水200ml盧戈氏碘液300ml二、常用染色方法（一）革蘭染色法（2）盧戈碘液95%酒精

直接購買成品，不需要配制二、常用染色方法（一）革蘭染色法（3）脫色液堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液100ml取飽和液10ml稀釋石炭酸復(fù)紅染液100ml堿性復(fù)紅1g95%乙醇10ml5%石炭酸90ml蒸餾水90ml二、常用染色方法（一）革蘭染色法（4）稀釋石炭酸復(fù)紅染液制片涂片干燥固定染色初染酶染脫色復(fù)染鏡檢油鏡觀察二、常用染色方法（一）革蘭染色法3.革蘭染色操作步驟初染（1min）媒染（1min）脫色（30-60s）復(fù)染（1min）吸去殘水晾干水洗水洗水洗水洗二、常用染色方法（一）革蘭染色法二、常用染色方法（一）革蘭染色法4.革蘭染色注意事項(xiàng)在進(jìn)行革蘭染色時(shí)特別要注意酒精脫色這一步，把握好脫色的時(shí)間。嚴(yán)格把握被檢菌的培養(yǎng)時(shí)間，避免出現(xiàn)錯誤的染色結(jié)果。水洗時(shí)要用細(xì)流水沖洗。革蘭染色時(shí)涂片不宜太厚也不宜太薄。控制好每一步染色的時(shí)間。革蘭陽性球菌革蘭陰性桿菌二、常用染色方法（一）革蘭染色法5.革蘭染色結(jié)果6.革蘭染色實(shí)際意義鑒別細(xì)菌指導(dǎo)選擇藥物分析致病性二、常用染色方法（二）抗酸染色法分枝桿菌屬的細(xì)菌，如結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌，細(xì)胞壁中含有大量類脂（如分枝菌酸），使菌體不易著色，一般不用革蘭氏染色。抗酸染色法是特異性地針對分枝桿菌屬細(xì)菌的鑒別染色法。抗酸染色陽性的細(xì)菌稱為抗酸桿菌。

分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色。細(xì)胞成分二、常用染色方法（二）抗酸染色法1.抗酸染色原理

分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱或者延長染色時(shí)間來促使其與石炭酸復(fù)紅染液結(jié)合而著色。著色特點(diǎn)

分枝桿菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的分枝菌酸與染料結(jié)合牢固，一旦結(jié)合以后，就很難被酸性脫色劑脫色。難以脫色二、常用染色方法（二）抗酸染色法2.結(jié)果判斷和報(bào)告結(jié)核桿菌染成紅色，細(xì)長、直的或微彎曲桿菌，偶爾有桿菌著色不均，呈顆粒狀者。標(biāo)本的其余部分及非抗酸性細(xì)菌染成藍(lán)色。必須逐一觀察各個(gè)視野，直到整個(gè)涂片找不到結(jié)核桿菌時(shí)，方可報(bào)告“未找到結(jié)核桿菌”。石炭酸復(fù)紅染液13%鹽酸酒精2堿性美藍(lán)染液3二、常用染色方法（二）抗酸染色法3.萋－尼抗酸染色液的配制堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液100ml取飽和液10ml石炭酸復(fù)紅染液100ml堿性復(fù)紅1g95%乙醇10ml5%石炭酸90ml5%石炭酸90ml二、常用染色方法（二）抗酸染色法（1）石炭酸復(fù)紅液濃鹽酸3ml95%乙醇97ml3%鹽酸酒精100ml二、常用染色方法（二）抗酸染色法（2）3%鹽酸酒精液美藍(lán)酒精飽和溶液100ml取飽和液30ml美藍(lán)染液130ml美藍(lán)2g95%酒精100ml0.01%KOH100ml二、常用染色方法（二）抗酸染色法（3）呂氏美藍(lán)染色液厚涂片取標(biāo)本在干凈的載玻片上涂片，制成20mm×15mm大小的厚膜涂片。干燥自然干燥，讓玻片上的水分揮發(fā)。固定玻片在酒精燈火焰外焰，以鐘擺的速度通過火焰三次固定。二、常用染色方法（二）抗酸染色法（1）制片4.抗酸染色操作步驟初染石炭酸復(fù)紅，冷染或熱染脫色3%鹽酸酒精復(fù)染堿性美藍(lán)二、常用染色方法（二）抗酸染色法（2）染色二、常用染色方法（二）抗酸染色法（3）鏡檢二、常用染色方法（二）抗酸染色法每張載玻片只允許涂1份標(biāo)本，不得涂2份或2份以上標(biāo)本，以免染色過程中菌體脫落而導(dǎo)致陰陽結(jié)果混淆?？顾崛旧耐科院?，加溫時(shí)隨時(shí)補(bǔ)加染色液?？顾崛旧珪r(shí)，脫色劑脫色時(shí)間寧長勿短。注意生物安全。5.抗酸染色注意事項(xiàng)臨床意義鑒別細(xì)菌確定分枝桿菌感染程度判定分枝桿菌感染預(yù)后二、常用染色方法（二）抗酸染色法6.抗酸染色意義三、其他染色方法項(xiàng)目八染色標(biāo)本檢查三、其他染色方法（一）特殊染色法石炭酸復(fù)紅法制片后滴加石炭酸復(fù)紅染液，小火加熱染料出現(xiàn)蒸汽約5分鐘，冷后沖洗，用95%乙醇脫色2分鐘，水洗，堿性亞甲藍(lán)復(fù)染半分鐘，水洗待干后鏡檢。芽胞呈紅色，菌體呈藍(lán)色。孔雀綠法制片后滴加5%孔雀綠，小火加熱染料出現(xiàn)蒸汽15～20分鐘，冷后沖洗，直至流出的水中無染色液為止，0.5%石炭酸復(fù)紅復(fù)染5分鐘，水洗待干后鏡檢。芽胞呈綠色，菌體呈紅色。注意生物安全。1.芽胞染色三、其他染色方法（一）特殊染色法將新載玻片浸泡在95%的乙醇中，臨用時(shí)取出用干凈紗布擦干，滴1滴蒸餾水于玻片中央，用接種環(huán)挑取少許菌落點(diǎn)在蒸餾水滴頂部，置35℃孵箱自然干燥，滴加鞭毛染液染色1～2分鐘，輕輕水洗（切勿用力太猛），自然干燥后鏡檢。鞭毛和菌體呈紅紫色。2.鞭毛染色三、其他染色方法（一）特殊染色法制片后滴加結(jié)晶紫染液，在酒精燈上稍微加熱至出現(xiàn)蒸汽為止，用200g/L的硫酸銅溶液沖洗染液（切勿用水洗），吸水紙吸干后鏡檢。菌體及背景呈紫色，菌體周圍有一圈未著色的透明帶。3.莢膜染色三、其他染色方法（一）特殊染色法4.異染顆粒染色制片后滴加A液（甲苯胺藍(lán)和孔雀綠的乙醇溶液）3～5分鐘后水洗，滴加B液（碘化鉀溶液）1分鐘后水洗吸干鏡檢。菌體呈綠色，異染顆粒呈藍(lán)黑色。三、其他染色方法（二）負(fù)染色法背景著色而菌體本身不著色的染色方法。實(shí)際工作中常用墨汁復(fù)染色法來觀察真菌及細(xì)菌莢膜。如新生隱球菌可見寬厚透亮的莢膜，背景為黑色。三、其他染色方法（三）熒光染色法熒光染色是用能夠發(fā)熒光的物質(zhì)對標(biāo)本進(jìn)行染色，在熒光顯微鏡下發(fā)出熒光。目前主要用于結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等病原菌的檢測。如痰標(biāo)本經(jīng)金胺O染色后，在熒光顯微鏡下觀察到金黃色熒光菌體。在普通光學(xué)顯微鏡下，可清楚地觀察染色標(biāo)本中細(xì)菌的形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)，并可根據(jù)染色反應(yīng)性對細(xì)菌加以分類鑒定。用于細(xì)菌的染料主要有堿性和酸性兩大類，細(xì)菌易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合，常用的堿性染料主要有堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍(lán)等。細(xì)菌染色是常用的細(xì)菌形態(tài)檢查法，分為單染色法和復(fù)染色法兩大類。常用的復(fù)染色方法主要有革蘭染色法和抗酸染色法。細(xì)菌革蘭染色可以將細(xì)菌分為革蘭陽性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-），不僅為分類鑒定提供依據(jù)，而且能夠指導(dǎo)臨床用藥。細(xì)菌抗酸染色是特異性地針對分枝桿菌屬細(xì)菌的鑒別染色法，抗酸染色陽性的細(xì)菌稱為抗酸桿菌。

此外，還有特殊染色法、負(fù)染色法、熒光染色法等。項(xiàng)目小結(jié)項(xiàng)目八染色標(biāo)本檢查項(xiàng)目八染色標(biāo)本檢查項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握細(xì)菌的生長繁殖特征、生長曲線的概念以及四個(gè)時(shí)期的特點(diǎn)。2.掌握條件致病菌與菌群失調(diào)的基本概念。3.熟悉消毒與滅菌的基本原理。4.了解常用培養(yǎng)基的基本配制方法。5.樹立正確的無菌操作觀念和無菌操作的能力。項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備思維導(dǎo)圖項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備一、細(xì)菌的生理項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備概述1.細(xì)菌具有與其它生物相似的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成。2.細(xì)菌以無性二分裂方式進(jìn)行繁殖，人工培養(yǎng)的細(xì)菌會出現(xiàn)典型的生長曲線。3.不同種類的細(xì)菌具有不同的酶系統(tǒng)，代謝途徑不同，一些特殊的代謝產(chǎn)物可用來鑒定細(xì)菌。4.正常菌群可對人體發(fā)揮營養(yǎng)、生物拮抗、免疫等作用。5.培養(yǎng)基按照用途可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備1.化學(xué)元素

化學(xué)元素是構(gòu)成所有生物的物質(zhì)基礎(chǔ)。根據(jù)各類化學(xué)元素所占比例的大小，可將其分為：一、細(xì)菌的生理（一）細(xì)菌的化學(xué)組成主要元素：碳、氫、氧、氮、磷、硫、鉀、鈣、鎂、鐵等微量元素：鈉、鋅、錳、氯、鉬、硒、鈷、銅、鎢、鎳、硼等2.化學(xué)成分及分各種化學(xué)元素主要以有機(jī)物、無機(jī)物和水的形式存在于細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，構(gòu)成細(xì)菌生命體的各種組分水：占細(xì)胞在總重量的75-90%；有機(jī)物：蛋白質(zhì)、糖類、脂類等無機(jī)物：鉀、鈉、鐵、鎂、鈣、氯等；核酸：DNA、RNA特殊組分：肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、脂多糖等一、細(xì)菌的生理（一）細(xì)菌的化學(xué)組成1.帶電現(xiàn)象革蘭陽性菌等電點(diǎn)pH為2～3，革蘭陰性菌的等電點(diǎn)pH為4～5。細(xì)菌一般多處于弱堿性、中性或弱酸性條件，因此細(xì)菌表面一般帶負(fù)電荷。由于革蘭陽性菌細(xì)胞壁中含磷壁酸較多，因此帶負(fù)電荷更多。細(xì)菌的帶電現(xiàn)象與細(xì)菌的染色反應(yīng)、凝集反應(yīng)、抑菌和殺菌作用有密切關(guān)系。一、細(xì)菌的生理（二）細(xì)菌的物理性狀2.光學(xué)性質(zhì)：細(xì)菌無色半透明，光線照射細(xì)菌時(shí)，一部分被吸收，一部分被折射，故菌液呈混濁狀。單位體積中的細(xì)菌數(shù)量與濁度成正比，可用比濁法或分光光度計(jì)估計(jì)細(xì)菌數(shù)。3.滲透壓：細(xì)菌體內(nèi)含有高濃度的營養(yǎng)物質(zhì)和無機(jī)鹽，處于高滲狀態(tài)。在純水中菌體因吸水而脹裂。在高滲透環(huán)境中，菌體水分逸出，胞漿不能生長繁殖。

4.半透性：細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜均有半透性，水及小分子物質(zhì)可通過，有利于吸收和排出。5.表面積：細(xì)菌體積微小，但單位體積的表面積遠(yuǎn)比其他生物細(xì)胞要大，有利于細(xì)菌與外界進(jìn)行物質(zhì)交換，故細(xì)菌代謝旺盛，生長繁殖迅速。一、細(xì)菌的生理（二）細(xì)菌的物理性狀1.環(huán)境條件：（1）適宜的酸堿度：多數(shù)菌：一般為pH7.2～7.6嗜堿：霍亂弧菌pH8.4～9.2嗜酸：結(jié)核分枝桿菌pH6.5～6.8一、細(xì)菌的生理（三）細(xì)菌的生長與代謝1.環(huán)境條件：（2）合適的溫度：嗜冷菌:-5－30℃最適溫度：10～20℃嗜溫菌:10－45℃最適溫度：20～40℃嗜熱菌:25－95℃最適溫度：50～60℃一、細(xì)菌的生理（三）細(xì)菌的生長與代謝1.環(huán)境條件：（3）必要的氣體環(huán)境：

專性需氧菌：如結(jié)核桿菌專性厭氧菌：如破傷風(fēng)梭菌、脆弱類桿菌兼性厭氧菌：大多數(shù)病原菌微需氧菌：如空腸彎曲、幽門螺桿菌一、細(xì)菌的生理（三）細(xì)菌的生長與代謝2.細(xì)菌生長繁殖的規(guī)律：（1）細(xì)菌的繁殖方式：無性二分裂（2）細(xì)菌的生長曲線：將一定數(shù)量的細(xì)菌接種中在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，研究細(xì)菌生長過程的規(guī)律，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，培養(yǎng)物中活菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標(biāo)，得出一條生長曲線。一、細(xì)菌的生理（三）細(xì)菌的生長與代謝2.細(xì)菌生長繁殖的規(guī)律：（2）細(xì)菌的生長曲線：1）遲緩期（A-B）2）對數(shù)生長期(B-C)3）平穩(wěn)期(C-D)4）衰亡期(D-E)一、細(xì)菌的生理（三）細(xì)菌的生長與代謝3.細(xì)菌的代謝：（1）分解代謝：

是指細(xì)胞將大分子物質(zhì)降解成小分子物質(zhì)，并伴隨能量釋放的過程。（2）合成代謝：是指細(xì)胞利用簡單的小分子物質(zhì)合成復(fù)雜大分子的過程，是耗能過程，能量來源于分解代謝過程中產(chǎn)生的能量。

將兩者緊密結(jié)合在一起的稱為中間代謝。一、細(xì)菌的生理（三）細(xì)菌的生長與代謝3.細(xì)菌的代謝：（3）能量代謝：

根據(jù)生物代謝過程中受氫體的不同，細(xì)菌的生物氧化可分為有氧呼吸、無氧呼吸及發(fā)酵。1）有氧呼吸：此過程需要氧氣作為最終受氫體，把糖類等有機(jī)物徹底氧化分解，產(chǎn)生出二氧化碳和水，同時(shí)釋放出大量的能量。2）無氧呼吸：此過程是以除氧以外的其它無機(jī)物作為受氫體，把糖類等有機(jī)物分解成為不徹底的氧化產(chǎn)物，同時(shí)釋放出少量能量。3）發(fā)酵：將自身的某些代謝產(chǎn)物作為受氫體，同時(shí)將后者還原成發(fā)酵產(chǎn)物。一、細(xì)菌的生理（三）細(xì)菌的生長與代謝二、微生物的分布項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備二、微生物的分布（一）陸生環(huán)境微生物的分布：土壤微生物的數(shù)量和分布主要受到營養(yǎng)物、含水量、含氧量、溫度、pH等因素的影響，集中分布于距地表10~20cm的耕作層，其中大部分為非致病菌，也有一部分來自人和動物體內(nèi)的病原菌。（二）水生環(huán)境微生物的分布：水中的細(xì)菌群有水中天然的微生物群，也有來自土壤、塵埃、垃圾、人和動物排泄物中的微生物。水的來源及狀態(tài)決定了微生物分布的種類和數(shù)量。（三）空氣中微生物的分布：空氣中微生物絕大部分來源于人和動物呼吸道產(chǎn)生的飛沫、進(jìn)入大氣的土壤塵粒、污水產(chǎn)生的氣溶膠等。二、微生物的分布1.正常菌群：正常人體的體表及與外界相通的腔道都有一定數(shù)量和種類的微生物寄生，這些微生物在正常情況下對機(jī)體無害，甚至有益，稱之為正常微生物群或正常菌群。（四）人體中微生物的分布二、微生物的分布（四）人體中微生物的分布?體表皮膚?與外界相通的腔道分布于二、微生物的分布正常菌群的生理意義：（1）營養(yǎng)作用：合成維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸、葉酸等物質(zhì)（2）生物拮抗：阻止病原菌定居、繁殖（3）免疫作用：促進(jìn)免疫器官成熟（4）生長發(fā)育作用：有利于宿主的生長、發(fā)育和長壽。（5）抗癌作用：可使致癌物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)榉侵掳┪镔|(zhì)。（四）人體中微生物的分布1.正常菌群：二、微生物的分布2.條件致病菌與菌群失調(diào)癥：（1）條件致病菌：指的是正常情況下不致病，但是在某些特定條件下可致病，這樣的菌群稱為條件致病菌或機(jī)會致病菌?？蓪?dǎo)致其致病的特定條件包括：①寄居部位改變。②機(jī)體抵抗力降低。③菌群失調(diào)。菌群失調(diào)（dysbacteriosis）是指機(jī)體某部位正常菌群中各菌種間的比例發(fā)生較大幅度變化，由生理性組合轉(zhuǎn)變?yōu)椴±硇越M合的狀態(tài)。（四）人體中微生物的分布二、微生物的分布2.條件致病菌與菌群失調(diào)癥：（2）菌群失調(diào)癥：由于菌群失調(diào)而導(dǎo)致的宿主出現(xiàn)一系列臨床癥狀，稱為菌群失調(diào)癥或菌群交替癥。菌群失調(diào)的發(fā)生多見于使用抗生素、醫(yī)療措施使用不當(dāng)和慢性消耗性疾病等。（四）人體中微生物的分布二、微生物的分布3.致病菌：細(xì)菌的致病性是對特定宿主而言，致病菌(Pathogenicbacteria)是指能使宿主致病的細(xì)菌，反之則為非致病菌，但是二者并無明顯界限。有些細(xì)菌在一般情況下不致病，但是在特定情況下就致病，我們稱其為條件致病菌或機(jī)會致病菌。（四）人體中微生物的分布三、消毒與滅菌項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備三、消毒與滅菌1.消毒（disinfection）：利用某種物理或化學(xué)方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有病原微生物的方法。2.滅菌（sterilization）：是指利用某種方法殺死物體中所有微生物（病原微生物、非病原微生物和細(xì)菌芽胞）的一種措施。3.防腐（antisepsis）：指應(yīng)用化學(xué)或者物理的方法抑制微生物生長的一種方法。4.抑制（inhibition）：在某種藥物亞致死劑量作用下導(dǎo)致微生物生長停止，在去掉這種藥物之后生長仍可以恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。5.無菌操作：無菌指的是沒有活著的微生物存在。無菌操作是指在操作的所有環(huán)節(jié)都沒有微生物的污染的方法。（一）基本概念1.兩者要求達(dá)到的處理水平不同：消毒只要求殺滅或/和清除致病微生物，使其數(shù)量減少到不再能引起人發(fā)病。滅菌不僅要求殺滅或/和清除致病微生物，還要求將所有微生物全部殺滅或/和清除掉，包括非致病微生物。2.兩者選用的處理方法不同：滅菌與消毒相比，要求更高，處理更難。滅菌必須選用能殺滅抵抗力最強(qiáng)的微生物(細(xì)菌芽胞)的物理方法或化學(xué)滅菌劑，而消毒只需選用具有一定殺菌效力的物理方法、化學(xué)消毒劑或生物消毒劑。3.應(yīng)用的場所與處理的物品也不同：滅菌主要用于處理醫(yī)院中進(jìn)入人體無菌組織器官的診療用品和需要滅菌的工業(yè)產(chǎn)品，消毒用于處理日常生活和工作場所的物品，也用于醫(yī)院中一般場所與物品的處理。（二）消毒與滅菌的區(qū)別三、消毒與滅菌1.抑菌劑(bacteriostaticagent)：能抑制微生物生長的物質(zhì)。抑菌劑不能殺死細(xì)菌，但可以通過抑制細(xì)菌的生長，阻止細(xì)菌滋生過多、危害健康。2.消毒劑（disinfectant）：

通常是指能有效地控制或殺死水系統(tǒng)中的微生物--細(xì)菌、真菌和藻類的化學(xué)制劑。其作用機(jī)制通常是不可逆的與靶細(xì)胞進(jìn)行緊密的結(jié)合，使其生長不可恢復(fù)。3.溶菌劑(bacteriolysis)：能通過使細(xì)胞裂解的方式殺死微生物，這類物質(zhì)能通過抑制細(xì)胞壁合成或損傷細(xì)胞膜的方式使細(xì)菌溶解，將這類物質(zhì)加入到生長的細(xì)胞懸液后會導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量減少、細(xì)胞懸液濁度降低、透明度增加。（三）控制微生物的化學(xué)方法三、消毒與滅菌4.抗代謝物（antimetabolite）：

微生物生長過程通常需要一些生長因子，在微生物生長液中加入生長因子的結(jié)構(gòu)類似物可以競爭結(jié)合其靶位點(diǎn)，干擾微生物的正常代謝，以達(dá)到抑制微生物生長的目的。（三）控制微生物的化學(xué)方法葉酸的結(jié)構(gòu)三、消毒與滅菌1.高溫滅菌法：

用超過微生物承受的最高溫度來殺滅微生物的方法稱為高溫滅菌法。主要包括干熱和濕熱兩種方法。（1）干熱滅菌法：

①燒灼：屬于高溫短時(shí)殺菌，利用高溫使微生物的蛋白質(zhì)及酶發(fā)生凝固或變性而死亡。這是應(yīng)用最廣泛而有效的滅菌方法，主要用于手術(shù)器械和物品的滅菌。②干烤：用干熱滅菌箱（多采用機(jī)械對流型烤箱）進(jìn)行滅菌。滅菌條件為：160℃維持2小時(shí)；170℃維持1小時(shí)；l80℃維持30分鐘；高溫下可達(dá)滅菌要求。適用于易被濕熱損壞和在干燥條件下使用更方便的物品（如金屬、玻璃、陶瓷及凡士林紗布條等）滅菌。（四）控制微生物的物理方法三、消毒與滅菌1.高溫滅菌法（2）濕熱滅菌法：是指以高溫高壓水蒸氣為介質(zhì)，用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。由于蒸汽潛熱大，穿透力強(qiáng)，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固，最終導(dǎo)致微生物的死亡，所以該法的滅菌效率比干熱滅菌法高，是藥物制劑生產(chǎn)過程中最常用的滅菌方法。濕熱滅菌法可分為：高壓蒸汽滅菌法、間歇蒸汽滅菌法、巴氏消毒法、煮沸滅菌法和流通蒸汽滅菌法。（四）控制微生物的物理方法三、消毒與滅菌2.輻射滅菌法包括γ射線、X射線和加速電子等，對各種微生物均有致死作用，細(xì)菌繁殖體對射線比芽胞要敏感。其機(jī)制是直接或者通過產(chǎn)生游離基，破壞DNA分子的共價(jià)鍵。3.紫外滅菌法：

波長在200nm～300nm的紫外線具有殺菌作用，以250nm～260nm最強(qiáng)，與嘌呤和嘧啶的吸收光譜高峰一致。紫外線可使DNA鏈上相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶共價(jià)結(jié)合而形成二聚體，干擾DNA正常轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致微生物的變異或死亡。但是由于紫外線穿透力較弱，普通玻璃、紙張、塵埃、水蒸汽等均能阻檔紫外線，因此一般用于手術(shù)室、病房、實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒。（四）控制微生物的物理方法三、消毒與滅菌4.干燥滅菌法干燥可以使細(xì)菌脫水、鹽類物質(zhì)濃縮、蛋白質(zhì)變性，而產(chǎn)生抑菌和殺菌的作用。5.過濾除菌法：

過濾除菌法主要用于血清、抗生素、維生素等不耐熱也不能用化學(xué)方法除菌的生物制品及空氣的除菌，但是不能除去病毒、支原體、衣原體等微生物。6.超聲波滅菌法：超聲波滅菌法是利用超聲波的高頻振動，引起溶液內(nèi)瞬時(shí)真空狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞裂解而達(dá)到滅菌效果的方法。（四）控制微生物的物理方法三、消毒與滅菌1.抗生素（antibiotic）：抗生素主要是由細(xì)菌、霉菌或其他微生物產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物或人工合成的類似物，能抑制其他微生物生長或者殺死其他微生物。2.噬菌體（phage）：

噬菌體是病毒的一種，具有病毒的所有特性（個(gè)體微小；不具有完整細(xì)胞結(jié)構(gòu)；只含有一種核酸）。其特別之處是專以細(xì)菌為宿主。噬菌體是感染細(xì)菌、真菌、藻類、放線菌或螺旋體等微生物的病毒的總稱，因部分能引起宿主菌的裂解，故稱為噬菌體。（五）控制微生物的生物學(xué)方法三、消毒與滅菌四、培養(yǎng)基的成分與作用項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備水既是細(xì)菌細(xì)胞的主要組成成分，又是細(xì)菌生長繁殖所必不可少的物質(zhì)。水在細(xì)菌細(xì)胞中的主要生理功能有：①作為良好的溶劑，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)溶解，利于細(xì)菌吸收；代謝產(chǎn)物的排泌也必須以水為介質(zhì)才能完成。②作為良好的導(dǎo)體對細(xì)菌細(xì)胞溫度調(diào)節(jié)起到很重要的作用。③維持蛋白、核酸等生物大分子天然構(gòu)象的穩(wěn)定和活性。④作為新陳代謝的重要媒介參與細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)一系列化學(xué)反應(yīng)。（一）水四、培養(yǎng)基的成分與作用1.碳源是在細(xì)菌生長過程中為細(xì)菌提供碳元素來源的物質(zhì)。碳源既是細(xì)菌合成蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸、酶類等菌體成分的原料，又作為重要的能源物質(zhì)為細(xì)菌提供生命活動所需的能量。2.氮源是指為細(xì)菌提供氮元素來源的物質(zhì)。氮源一般不提供能量，主要為細(xì)菌提供合成菌體成分的原料，但是某些厭氧菌會在厭氧條件下分解氨基酸提供能量。（二）營養(yǎng)成分四、培養(yǎng)基的成分與作用3.無機(jī)鹽細(xì)菌需要多種無機(jī)鹽以提供其生長繁殖所需的各種元素，如磷、硫、鉀、鈉、鈣、鎂、鐵，以及微量元素鈷、鋅、錳、銅等。無機(jī)鹽除構(gòu)成菌體成分以外，其作用還有：①參與能量的儲存和轉(zhuǎn)運(yùn)；②作為酶的輔基和酶激活劑，維持酶活性；③調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外滲透壓；④某些元素與細(xì)菌的致病作用有關(guān)。4.生長因子生長因子是指某些細(xì)菌生長繁殖所必需的、自身不能合成或者合成量很小且不能滿足自身生長需要的、必須由生長環(huán)境提供的有機(jī)化合物，如維生素、嘌呤、嘧啶、氨基酸等。（二）營養(yǎng)成分四、培養(yǎng)基的成分與作用5.微量元素微生物的生長過程中還需要一些微量元素。微量元素通常指的是對微生物生長起重要作用，但是需求量極其微小，通常在10-8~10-6mol/L（這里指的是在培養(yǎng)基中的濃度）。根據(jù)不同種類的細(xì)菌對營養(yǎng)物質(zhì)的要求不同，可將細(xì)菌分成兩類：①非苛養(yǎng)菌②苛養(yǎng)菌（二）營養(yǎng)成分四、培養(yǎng)基的成分與作用凝固劑指的是能使液體發(fā)生凝固的物質(zhì)，最常用的為瓊脂，特殊情況下還可以使用明膠、硅膠、卵蛋白及血清。一般配制液體培養(yǎng)基時(shí)不需要添加凝固劑。（三）凝固劑四、培養(yǎng)基的成分與作用（四）指示劑（五）抑制劑為觀察細(xì)菌是否充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)，通常會加入一些指示劑，如酚紅、溴甲酚紫等酸堿指示劑，以及亞甲基藍(lán)等氧化還原指示劑。為促進(jìn)目的菌生長，需在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，有選擇的抑制某些非目的菌生長，如抗生素、亞硫酸鈉等物質(zhì)。五、培養(yǎng)基的種類和用途項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備1.天然培養(yǎng)基：由天然物質(zhì)制成，化學(xué)成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營養(yǎng)豐富，培養(yǎng)效果好，常用的天然培養(yǎng)基包括牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏、玉米粉、牛奶、血清等。2.合成培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基是由成分完全已知的各種化學(xué)物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基，也稱化學(xué)限定培養(yǎng)基。3.半合成培養(yǎng)基：在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無機(jī)鹽類，或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分（一）按照培養(yǎng)基的成分來分五、培養(yǎng)基的種類和用途1.液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中不加任何凝固劑。這種培養(yǎng)基成分均勻，微生物能充分接觸和利用培養(yǎng)基中的養(yǎng)料，生長速度快，代謝旺盛，適于作生理等研究、增菌培養(yǎng)、純培養(yǎng)后觀察細(xì)菌的生長現(xiàn)象，也常用于發(fā)酵工業(yè)。2.固體培養(yǎng)基：是在培養(yǎng)基中加入凝固劑，如2%~3%瓊脂、明膠、硅膠等，融化待冷卻后即為固體。固體培養(yǎng)基常用于微生物分離、鑒定、計(jì)數(shù)、藥敏試驗(yàn)和菌種保存等方面。3.半固體培養(yǎng)基：是在液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑，通常是0.2%~0.5%瓊脂，瓊脂融化冷卻后呈半固體狀態(tài)?？捎糜谟^察細(xì)菌的運(yùn)動、菌種鑒定及噬菌體效價(jià)滴定等方面。（二）按照培養(yǎng)基的物理性狀來分五、培養(yǎng)基的種類和用途（三）按照微生物的種類來分五、培養(yǎng)基的種類和用途細(xì)菌培養(yǎng)基放線菌培養(yǎng)基酵母菌培養(yǎng)基霉菌培養(yǎng)基1.基礎(chǔ)培養(yǎng)基：

基礎(chǔ)培養(yǎng)基是含有一般微生物生長繁殖所需基本營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。2.加富培養(yǎng)基：也稱為營養(yǎng)培養(yǎng)基，是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血、血清、生長因子、動植物組織提取液制成的培養(yǎng)基。3.選擇培養(yǎng)基：是在普通培養(yǎng)基中加入特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，以抑制非目的菌的生長，促進(jìn)目的菌的生長。4.鑒別培養(yǎng)基：是在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，使培養(yǎng)后會發(fā)生某種變化，從而區(qū)別不同類型的微生物。（四）按照培養(yǎng)基用途來分五、培養(yǎng)基的種類和用途六、培養(yǎng)基的配制項(xiàng)目九常用培養(yǎng)基制備（一）培養(yǎng)基的配制過程六、培養(yǎng)基的配制1.稱量2.溶化3.調(diào)pH4.過濾5.分裝6.包裝7.

滅菌8、質(zhì)量測試9、保存（二）配制培養(yǎng)基的注意事項(xiàng)六、培養(yǎng)基的配制1.營養(yǎng)物質(zhì)的選擇2.營養(yǎng)物質(zhì)濃度配比3.控制pH條件4.防止污染項(xiàng)目九

常用培養(yǎng)基制備項(xiàng)目小結(jié)細(xì)菌的生理活動主要包括營養(yǎng)物質(zhì)的攝取與合成、進(jìn)行新陳代謝及生長和繁殖。新陳代謝是整個(gè)生理活動的中心，研究細(xì)菌的代謝對于菌種鑒定、了解細(xì)菌致病性、抗菌藥物的開發(fā)都具有十分重要的意義。細(xì)菌的新陳代謝包括分解代謝與合成代謝，是細(xì)菌細(xì)胞與環(huán)境之間不斷進(jìn)行物質(zhì)交換，以及細(xì)菌自身物質(zhì)和能量的自我更新過程。不同種類的細(xì)菌酶系統(tǒng)也不盡相同，催化的反應(yīng)不同，生成的某些具有特征性的代謝產(chǎn)物可用來鑒別細(xì)菌。培養(yǎng)基一般都含有碳源、氮源、無機(jī)鹽以及生長因子和水等。培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基三類。按其特殊用途可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。培養(yǎng)基配制之后應(yīng)妥善保存，放置時(shí)間不宜過久，

并且每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽。項(xiàng)目九

常用培養(yǎng)基制備項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)1、掌握分區(qū)劃線細(xì)菌接種技術(shù)、連續(xù)劃線接種技術(shù)的目的、方法。2、掌握斜面接種技術(shù)、穿刺接種技術(shù)的目的、方法。3、了解液體培養(yǎng)基接種技術(shù)、傾注平板法的目的、方法。思維導(dǎo)圖項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)一、細(xì)菌的接種工具項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)一、細(xì)菌的接種工具（一）接種環(huán)與接種針接種環(huán)與接種針是微生物檢驗(yàn)中用來取菌、接種和分離細(xì)菌的器具，接種環(huán)是用來劃線、純菌轉(zhuǎn)種、分離培養(yǎng)和挑取菌落及菌液、制備細(xì)菌涂片等。接種針主要用于挑取單個(gè)菌落、穿刺接種及斜面接種細(xì)菌等。一、細(xì)菌的接種工具（二）紅外線接種環(huán)滅菌器紅外接種環(huán)滅菌器是采用紅外線熱能進(jìn)行滅菌的微生物檢驗(yàn)儀器。使用方便，操作簡單，無明火，不怕風(fēng)，使用安全?？蓮V泛用于厭氧培養(yǎng)箱、生物安全柜及運(yùn)動的車輛等環(huán)境中進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)。二、細(xì)菌接種方法項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)（一）、分區(qū)劃線接種技術(shù)概述

分區(qū)劃線接種技術(shù)是指把混雜在一起的不同種類的細(xì)菌或同一細(xì)菌群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在固體瓊脂胚芽及表面通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離細(xì)菌的純種。由于這種單菌落并非都由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。此種方法多用于含細(xì)菌量較多的臨床標(biāo)本，如膿汁、糞便等。（一）、分區(qū)劃線接種技術(shù)

方法

右手持接種環(huán)，先將接種環(huán)滅菌，待冷卻后從待分離標(biāo)本中挑取少量標(biāo)本，左手持瓊脂平板，將接種環(huán)深入皿內(nèi)，先在培養(yǎng)基一角涂成直徑約1cm大小的薄膜，并以此為起點(diǎn)在瓊脂表面接續(xù)不重疊劃線作為第一區(qū)；然后燒灼接種環(huán)，轉(zhuǎn)動平皿至合適操作的位置，將接種環(huán)通過第一區(qū)3~4次，連續(xù)劃線，線與線之間不要重疊作為第二區(qū)，，依次畫第3、4、5。平板上每一區(qū)的細(xì)菌數(shù)會逐漸減少，直至分離出單個(gè)菌落。這里需要注意的是除了最后一區(qū)，其余各區(qū)劃線面積不得超過平板面積的1/4。（一）、分區(qū)劃線接種技術(shù)

方法

各區(qū)之間交叉3~4次，各區(qū)間交角大約為120?，畫完第一區(qū)，第二、三、四區(qū)接種環(huán)需要滅菌。經(jīng)過18~24h培養(yǎng)，第四區(qū)出現(xiàn)了很多單菌落，即為細(xì)菌的“純種”（一）、分區(qū)劃線接種技術(shù)方法（二）、連續(xù)劃線接種技術(shù)概述

連續(xù)劃線也是細(xì)菌分離純化的一種方法，將含有多種細(xì)菌的臨床標(biāo)本和固體培養(yǎng)物，經(jīng)過連續(xù)劃線接種到固體培養(yǎng)基表面，由于劃線的分散作用，使原來混雜在一起的細(xì)菌細(xì)胞在培養(yǎng)基表面分開呈單個(gè)菌，經(jīng)18~24h培養(yǎng)后就得到單個(gè)菌落。此法適用于含細(xì)菌量不多的標(biāo)本或棉拭子、咽拭子。（二）、連續(xù)劃線接種技術(shù)方法

將標(biāo)本或棉拭子、咽拭子等直接涂布于培養(yǎng)基的1/5處，然后以此為起點(diǎn)開始用接種環(huán)或棉拭子、咽拭子在平板表面連續(xù)不重疊劃線并逐漸下移，直至劃滿整個(gè)瓊脂平板表面。（二）、連續(xù)劃線接種技術(shù)方法（三）、斜面接種技術(shù)概述

斜面接種技術(shù)主要用于保存菌種或細(xì)菌純種增菌，也可以用于某些生化反應(yīng)鑒定試驗(yàn)，如枸櫞酸鹽、尿素和克氏雙糖鐵培養(yǎng)基的接種。但由于目的不同，接種的方法也略有差異。（三）、斜面接種技術(shù)方法

用于保存菌種或細(xì)菌純培養(yǎng)的斜面接種法是將接種環(huán)（接種針）燒灼滅菌，挑取單個(gè)菌落從培養(yǎng)基底部向上劃一條直線，再從底部開始向上連續(xù)不重疊劃曲線接種，線條盡可能的密且均勻；或者直接自下而上劃曲線接種。用于生化反應(yīng)鑒定的高層斜面培養(yǎng)基接種方法是用接種針挑取待鑒定細(xì)菌的菌落，一般挑取菌落的頂端，先用接種針插入斜面正中垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上劃曲線接種。斜面接種法（三）、斜面接種技術(shù)方法高層斜面接種法（四）、穿刺接種技術(shù)概述穿刺接種技術(shù)是用接種針從菌種斜面上挑取少量菌體并把它穿刺到固體或半固體的深層培養(yǎng)基中。穿刺接種法多用于半固體培養(yǎng)基或克氏雙糖鐵、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種。其中，半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可用于觀察細(xì)菌的動力。（四）、穿刺接種技術(shù)方法

接種時(shí)用接種針挑取細(xì)菌菌落，由培養(yǎng)基中央垂直刺入，至距管底約0.4cm處，在沿穿刺線退出接種針；克氏雙糖鐵、明膠等有高層斜面之分的培養(yǎng)基，先穿刺高層部分，退出接種針后直接劃線接種斜面部分。（五）、液體培養(yǎng)基接種技術(shù)概述液體培養(yǎng)基接種技術(shù)是由斜面菌種接種到液體培養(yǎng)基中的方法。此種方法多用于各種液體培養(yǎng)基，例如肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。（五）、液體培養(yǎng)基接種技術(shù)方法用接種環(huán)挑取單個(gè)菌落，傾斜液體培養(yǎng)管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立后液體淹沒接種物為準(zhǔn)）。此接種方法應(yīng)盡量避免接種環(huán)與液體培養(yǎng)基接觸，更不應(yīng)在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實(shí)驗(yàn)室污染。（六）、傾注平板技術(shù)概述傾注平板技術(shù)是使標(biāo)本中的細(xì)菌細(xì)胞充分分散開，并均勻的分布于平板培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)后單個(gè)細(xì)胞或聚在一起的細(xì)胞可以生長繁殖，形成一個(gè)肉眼可見的菌落。傾注平板技術(shù)多用于兼性厭氧菌或厭氧菌的稀釋定量培養(yǎng)和飲水、飲料、牛乳、尿液等標(biāo)本的活菌計(jì)數(shù)。項(xiàng)目十細(xì)菌接種技術(shù)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)1、掌握細(xì)菌有氧培養(yǎng)、二氧化碳培養(yǎng)的方法。2、了解細(xì)菌厭氧培養(yǎng)的方法。3、熟悉全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)的原理及檢測方法。思維導(dǎo)圖項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)一、細(xì)菌有氧培養(yǎng)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)一、細(xì)菌有氧培養(yǎng)概述有氧培養(yǎng)法是至需養(yǎng)菌或兼性厭氧菌在有氧條件下的培養(yǎng)。本法是臨床細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室最常用的培養(yǎng)方法。一、細(xì)菌有氧培養(yǎng)

方法將已接種好的平板、斜面、液體培養(yǎng)基等在空氣中置于37℃孵育箱內(nèi)孵育18~24h，無特殊要求的細(xì)菌均可以在此條件下生長。少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌需要培養(yǎng)3~7d，甚至1個(gè)月才能生長。另外，有的細(xì)菌最適生長溫度是28~30℃，如鼠疫耶爾森菌，甚至在4℃也能生長，如李斯特菌。為了孵育箱內(nèi)保持一定的濕度，可在其內(nèi)放置一杯水。對于培養(yǎng)時(shí)間較長的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口用棉塞或硅膠塞塞好，再用石蠟-凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂。一、細(xì)菌有氧培養(yǎng)方法二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)概述二氧化碳培養(yǎng)是將已經(jīng)接種的培養(yǎng)基放置于5％~10％co2環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)的方法。很多細(xì)菌在其生理生化代謝過程中需要co2，分解糖類產(chǎn)生的co2已足夠其所需，且空氣中還有微量co2，不必額外補(bǔ)充。只有少數(shù)細(xì)菌，如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等的培養(yǎng)，特別是在其初次分離時(shí)需要在5％~10％co2環(huán)境中培養(yǎng)才能生長良好。二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法co2培養(yǎng)箱是一臺特制的培養(yǎng)箱，既能調(diào)節(jié)co2的含量，又能調(diào)節(jié)所需溫度co2從培養(yǎng)箱外的鋼瓶通入培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)箱能自動調(diào)節(jié)co2的含量、溫度和濕度，培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一段時(shí)間以后直接觀察其生長結(jié)果，此法適于大型實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。二氧化碳箱培養(yǎng)二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法二氧化碳箱培養(yǎng)二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法燭缸培養(yǎng)取有蓋磨口標(biāo)本缸或玻璃干燥器，將接種好的培養(yǎng)基放入缸內(nèi)，點(diǎn)燃蠟燭后放入缸內(nèi)，要將蠟燭放置在稍高于培養(yǎng)物的位置，缸蓋或缸口均勻涂抹凡士林，蓋嚴(yán)缸蓋。蠟燭燃燒消耗氧，因氧減少而使蠟燭自行熄滅，此時(shí)容器內(nèi)因蠟燭燃燒產(chǎn)生的co2約為5％~10％，基本可滿足細(xì)菌co2培養(yǎng)的要求。最后連同容器一起置于37℃孵育箱內(nèi)孵育，時(shí)間一般在18~24h，少數(shù)菌種需培養(yǎng)3~7d，甚至更長。二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法燭缸培養(yǎng)二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方