血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 21.項(xiàng)目二十一：抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

單元四：血栓與止血檢驗(yàn)及其應(yīng)用項(xiàng)目二十一：抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)一、抗凝物質(zhì)及其作用目錄項(xiàng)目二十一：抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)1.掌握：常用抗凝物質(zhì)檢驗(yàn)（復(fù)鈣交叉試驗(yàn)、凝血酶時(shí)間及糾正試驗(yàn)）原理、注意事項(xiàng)及臨床意義。2.熟悉：主要抗凝物質(zhì)的作用原理。3.了解：抗凝物質(zhì)的基本理論。4.具備常用抗凝物質(zhì)的檢測(cè)能力。5.學(xué)會(huì)分析抗凝物質(zhì)檢驗(yàn)結(jié)果。學(xué)習(xí)目標(biāo)項(xiàng)目二十一：抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

一、抗凝物質(zhì)及其作用（一）抗凝血酶抗凝血酶（antithrombin，AT）是一種單鏈糖蛋白，由肝、血管內(nèi)皮細(xì)胞和巨核細(xì)胞合成，屬于α2球蛋白。AT作用：AT是肝素依賴(lài)的絲氨酸蛋白酶抑制物，抑酶譜很廣，能抑制FⅡa、FVⅡa、FIXa、Fxa、FXⅡa以及纖溶酶、胰蛋白酶和激肽釋放酶等，作用機(jī)制相同。AT作用機(jī)制：肝素與AT結(jié)合后，導(dǎo)致AT構(gòu)型發(fā)生改變，后者可與這些酶活性中心的絲氨酸殘基結(jié)合，“封閉”了這些酶的活性中心而使之失活。此時(shí)肝素可從復(fù)合物中重新釋出，再與其他游離的AT結(jié)合，繼續(xù)發(fā)揮肝素增強(qiáng)AT抗凝功能的作用。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

一、抗凝物質(zhì)及其作用（二）蛋白C抗凝系統(tǒng)蛋白C、蛋白S、APCI由肝臟產(chǎn)生，TM和EPCR由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生和表達(dá)。蛋白C系統(tǒng)凝血酶調(diào)節(jié)蛋白（thrombomodulin,TM）蛋白C（proteinC,PC）活性蛋白C抑制物（activatedproteinCinhibitor,APCI）蛋白S（proteinS,PS）內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體（endothelialproteinCreceptor,EPCR）項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

一、抗凝物質(zhì)及其作用（二）蛋白C抗凝系統(tǒng)APC作用機(jī)制：蛋白C被凝血酶與凝血酶調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物激活形成活化的蛋白C（APC），這一過(guò)程在EPCR輔助下完成。APC在蛋白S的協(xié)同下，發(fā)揮抗凝作用，主要表現(xiàn)在裂解因子Va、Ⅷa，抑制因子X(jué)a與血小板膜磷脂的結(jié)合。APCI作用機(jī)制：APCI通過(guò)和APC結(jié)合使之失去滅活因子Va、Ⅷa的作用。如果蛋白C或蛋白S有缺陷，與AT缺陷一樣（它們均有遺傳性缺陷），可引起機(jī)體凝血和抗凝平衡失調(diào)，導(dǎo)致血栓形成。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

一、抗凝物質(zhì)及其作用（三）其他抗凝物質(zhì)1.組織因子途徑抑制物組織因子途徑抑制物（tissuefactorpathwayinhibitor,TFPI）是一種單鏈糖蛋白，主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、單核細(xì)胞等合成和分泌。TFPI在血漿中以與脂蛋白結(jié)合和游離兩種形在存在。TFPI作用機(jī)制：TFPI存在于Ⅶa和Ⅹa的結(jié)合部位，通過(guò)和TF-Ⅶa復(fù)合物結(jié)合抑制其活性，從而對(duì)組織因子凝血途徑發(fā)揮重要調(diào)控作用。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

一、抗凝物質(zhì)及其作用（三）其他抗凝物質(zhì)2.抗凝物質(zhì)生理性抗凝物質(zhì)a2-巨球蛋白（a2-macroglobulin,a2-MG）肝素輔因子Ⅱ（hepauinco-factorⅡ，HCⅡ）a1-抗胰蛋白酶（a1-antit-rypsin,a1-AT）項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

一、抗凝物質(zhì)及其作用（三）其他抗凝物質(zhì)2.抗凝物質(zhì)病理性抗凝物質(zhì)狼瘡抗凝物（lupusanticoagulation,LAC）肝素及類(lèi)肝素物質(zhì)凝血因子抑制物項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（一）抗凝血酶活性及抗原測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】1.血漿抗凝血酶活性（antithrombinactivity，AT：A）檢測(cè)受檢血漿中加入過(guò)量肝素和FⅩa，使AT與FⅩa形成復(fù)合物，剩余的FⅩa水解發(fā)色底物，釋放發(fā)色基團(tuán)，顏色的深淺與剩余FⅩa的量呈正相關(guān)，與血漿中AT：A呈負(fù)相關(guān)。2.血漿抗凝血酶抗原（antithrombinantigen，AT:Ag）檢測(cè)用酶聯(lián)免疫吸附法或免疫火箭電泳法檢測(cè)。以抗凝血酶的抗血清制備瓊脂糖凝膠板，加入受檢血漿電泳，抗原和抗體作用形成火箭樣沉淀峰，其高度與血漿中AT的含量呈正相關(guān)。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（一）抗凝血酶活性及抗原測(cè)定【參考區(qū)間】血漿AT：A108.5%±5.3%；血漿AT：Ag（0.29±0.06）g/L。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（一）抗凝血酶活性及抗原測(cè)定【臨床意義】AT抗原和AT活性以同時(shí)測(cè)定為好。兩者臨床意義相似，但不一定平行，尤其在先天性AT缺陷時(shí)，并非AT合成量的減少，而是合成了結(jié)構(gòu)異常的AT分子，測(cè)其抗原量正常，而活性減低。

1．AT抗原水平減低見(jiàn)于先天性AT缺陷；但更常見(jiàn)于獲得性AT缺陷，如肝臟病變、DIC、血栓性疾病、妊高癥等。

2．AT抗原水平增高可見(jiàn)于血友病、口服抗凝劑治療、黃體酮應(yīng)用以及某些血管性疾病等。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（二）蛋白C含量、活性測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】1.蛋白C活性（proteinCactivity，PC:A）檢測(cè)①血漿凝固法：向待檢血漿中加入PC激活劑、FⅫ活化劑、磷脂和鈣離子，在活化內(nèi)源凝血途徑的同時(shí)也激活PC系統(tǒng)，測(cè)定血漿的凝固時(shí)間（APTT），其APTT延長(zhǎng)的程度與血漿PC：A呈正相關(guān)，可計(jì)算出相當(dāng)于正常血漿PC：A的百分率；②發(fā)色底物法：受檢血漿中加入PC，PC被激活為活化蛋白C（APC），后者作用于特異性發(fā)色底物，釋放顯色基團(tuán)，顏色的深淺與受檢血漿PC的活性成正相關(guān)。2.蛋白C抗原（proteinC：Antigen，PC:Ag）測(cè)定在含抗人PC抗體的瓊脂板中，加入一定量的受檢血漿（抗原）于檢測(cè)孔中，定量抗原在電場(chǎng)中向正極泳動(dòng)，在一定時(shí)間內(nèi)形成火箭樣沉淀峰的高度與抗原濃度成正比。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（二）蛋白C含量、活性測(cè)定【參考區(qū)間】PC：A100.24%±13.18%PC：Ag102.5%±20.1%項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（二）蛋白C含量、活性測(cè)定【臨床意義】PC活性減低：見(jiàn)于先天性PC缺陷，患者有反復(fù)無(wú)明顯原因的血栓形成。根據(jù)PC：A和PC：Ag分為I型（PC：Ag與PC：A均減低）和Ⅱ型（PC：Ag正常而PC：A減低）；獲得性PC缺陷，如DIC、肝功能不全、手術(shù)后、口服香豆素類(lèi)抗凝藥、呼吸窘迫綜合征等。PC活性增高：見(jiàn)于冠心病、糖尿病、腎病綜合征、妊娠后期、炎癥和其他疾病的急性期。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（三）總蛋白S含量測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】蛋白S抗原（ProteinS：Antigen，PS：Ag）檢測(cè)血漿總PS（TPS)包括游離PS（FPS）和與補(bǔ)體C4結(jié)合的PS（C4bP-PS)。向血漿中加入一定量聚乙二醇6000，將C4bP-PS沉淀，F(xiàn)PS游離于上清液中，用火箭法分別測(cè)定血漿和聚乙二醇沉淀上清液中的PS，即可求得TPS：Ag和FPS：Ag的含量。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（三）總蛋白S含量測(cè)定【參考區(qū)間】TPS：Ag96.6%±9.8%FPS：Ag100.9%±11.6%項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（三）總蛋白S含量測(cè)定【臨床意義】PS缺陷者易出現(xiàn)高凝狀態(tài)，先天性PS缺陷者常伴發(fā)嚴(yán)重深靜脈血栓栓塞。PS缺陷見(jiàn)于先天性和獲得性PS缺乏癥。獲得性PS缺陷常見(jiàn)肝臟病，如急性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化、維生素K缺乏癥、急性呼吸窘迫綜合征等?？诜鼓帯⒈茉兴嶱S降低。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（四）抗活化蛋白C抵抗檢測(cè)【實(shí)驗(yàn)原理】抗活化蛋白C抵抗(activatedproteinCresistance,APCR)檢測(cè)APC-APTT法:以標(biāo)準(zhǔn)APTT試驗(yàn)為基礎(chǔ)，通過(guò)檢測(cè)受檢血漿加與不加APC血漿APTT的比值求得。量化指標(biāo)APC比率(APCratio)或APC敏感率(APC-SR)表示。公式為APC-ratio(或SR)=APTT(加APC)值/APTT(不加APC)值。加缺乏FV血漿稀釋法：應(yīng)用缺乏FV的血漿預(yù)先稀釋患者血漿，由于加入的缺乏FV血漿可給血漿在正常范圍內(nèi)凝固(APTT正常)提供足夠的因子水平(尤其是FⅧ水平)?；颊哐獫{與缺乏FV血漿1∶4混合稀釋后測(cè)定APTT，其余同上法類(lèi)似計(jì)算APC比率。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（四）抗活化蛋白C抵抗檢測(cè)【參考區(qū)間】APC比率≥2(通常為2.0～5.0)項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（四）抗活化蛋白C抵抗檢測(cè)【臨床意義】APC比率<2視為APCR陽(yáng)性。見(jiàn)于心肌梗塞、腦血栓病人,在一定條件下(老年、孕婦、感染、口服避孕藥等),較正常人更易發(fā)生血栓形成。過(guò)敏性休克、使用氮芥化療或放療、嚴(yán)重肝病或DIC、肝葉切除或肝移植等血漿中肝素樣抗凝物增多。某些腫瘤，如腎上腺皮質(zhì)腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤可分泌肝素樣物質(zhì)，肝損傷導(dǎo)致肝素在肝臟內(nèi)的降解作用減弱，也可導(dǎo)致肝素樣抗凝物增多。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（五）組織因子途徑抑制物檢測(cè)【實(shí)驗(yàn)原理】1.組織因子途徑抑制物活性（tissuefactorpathwayinhibitoractivity，TFPI：A）檢測(cè)待測(cè)血漿與過(guò)量的TF/FⅦa和FⅩ作用，剩余的TF/FⅦa水解發(fā)色底物，釋放出發(fā)色基團(tuán)，其顏色的深淺與血漿中TFPI：A呈負(fù)相關(guān)。2.組織因子途徑抑制物抗原（tissuefactorpathwayinhibitorantigen，TFPI：Ag）檢測(cè)用雙抗體夾心法ELISA檢測(cè)血漿TFPI：Ag含量。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（五）組織因子途徑抑制物檢測(cè)【參考區(qū)間】TFPI：A99.96%±5.0%（發(fā)色底物法）TFPI：Ag97.5μg/L±26.6μg/L。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（五）組織因子途徑抑制物檢測(cè)【臨床意義】老年人血漿TFPI含量較高，妊娠時(shí)也增高，但胎兒則降低。先天性TFPI缺乏易形成血栓，獲得性TFPI減少常見(jiàn)，如大手術(shù)、膿毒血癥、DIC因過(guò)度消耗所致。致死性敗血癥增加，與廣泛血管內(nèi)皮受損釋放增加有關(guān)，慢性腎衰竭也增加。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（六）凝血酶時(shí)間及糾正試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】向受檢血漿加入“標(biāo)準(zhǔn)化”凝血酶，測(cè)定其凝固所需時(shí)間為凝血酶時(shí)間（thrombintime，TT）。如血漿中纖維蛋白原量或質(zhì)異常，或存在循環(huán)抗凝血酶類(lèi)物質(zhì)，則TT延長(zhǎng)。甲苯胺藍(lán)可中和肝素和類(lèi)肝素抗凝物質(zhì)，故TT延長(zhǎng)被甲苯胺藍(lán)糾正，認(rèn)為存在肝素或類(lèi)肝素物質(zhì)。加甲苯胺藍(lán)后TT明顯縮短，與未加甲苯胺藍(lán)的TT比較相差5s以上視為糾正。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（六）凝血酶時(shí)間及糾正試驗(yàn)【參考區(qū)間】凝固法：16～18秒，若超過(guò)正常對(duì)照3秒以上為異常。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（六）凝血酶時(shí)間及糾正試驗(yàn)【臨床意義】凝血酶時(shí)間延長(zhǎng)：以DIC時(shí)纖維蛋白原消耗多見(jiàn)，也見(jiàn)于部分先天性低（無(wú)）纖維蛋白原血癥、原發(fā)性纖溶及肝病病變，以及肝素或類(lèi)肝素及FDP增多。凝血酶時(shí)間縮短：主要見(jiàn)于某些異常蛋白血癥或巨球蛋白血癥。也見(jiàn)于技術(shù)原因，如標(biāo)本在4℃放置過(guò)久，組織液混入血漿等。TT延長(zhǎng)能被糾正：見(jiàn)于類(lèi)肝素物質(zhì)增多，如過(guò)敏性休克、嚴(yán)重肝病、肝葉切除、肝移植、DIC，也見(jiàn)于使用氮芥及放療后。TT延長(zhǎng)不被糾正見(jiàn)于其他抗凝物質(zhì)或纖維蛋白原缺陷。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（七）普通肝素和低分子量肝素測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】普通肝素[又稱(chēng)未分級(jí)肝素（unfractionheparin，UFH)]和低分子量肝素（lowmolecularweight，LMWH]檢測(cè)在AT和FⅩa均過(guò)量的反應(yīng)中，UFH和LMWH對(duì)FⅩa的抑制速率與其濃度成正比，用特異性FⅩa發(fā)色底物法檢測(cè)剩余FⅩa的活性，發(fā)色強(qiáng)度與血漿UFH或LMWH濃度呈負(fù)相關(guān)。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（七）普通肝素和低分子量肝素測(cè)定【參考區(qū)間】發(fā)色底物法：正常人血漿肝素為0U/ml，本法檢測(cè)范圍是0～0.8U/ml。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（七）普通肝素和低分子量肝素測(cè)定【臨床意義】過(guò)敏性休克、使用氮芥化療或放療、嚴(yán)重肝病或DIC、肝葉切除或肝移植等血漿中肝素樣抗凝物增多。某些腫瘤，如腎上腺皮質(zhì)腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤可分泌肝素樣物質(zhì)，肝損傷導(dǎo)致肝素在肝臟內(nèi)的降解作用減弱，也可導(dǎo)致肝素樣抗凝物增多。項(xiàng)目二十一抗凝物質(zhì)及檢驗(yàn)

二、抗凝物質(zhì)檢測(cè)（八）復(fù)鈣交叉試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】復(fù)鈣交叉試驗(yàn)（crossrecalcificationtest，CRT），可檢測(cè)血漿抗凝物質(zhì)。延長(zhǎng)的復(fù)鈣時(shí)間能被1/10量正常血漿糾正，提示受檢血漿缺乏凝血因子；不能糾正提示存在抗