DB22T 396-2014 保健用品毒理學評價程序與檢驗方法　　

備案號：42265-2014DB22DB22/T396—2014保健用品毒理學評價程序與檢驗方法Toxicologyassessmentprocedureandtestmethodsforhealthproduct2014-05-04發(fā)布2014-06-01實施吉林省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 1 2 2 7 ——補充了經(jīng)皮保健用品毒性試驗，皮膚急性毒性試驗中的皮膚——增加了經(jīng)皮保健用品毒性試驗，皮膚急性毒——調整了經(jīng)皮保健用品毒性試驗，皮膚刺激性試驗中實驗1）；2.2.1保健用品的材料為常用原料，使用期限不超過二周者，僅進行第一階22.2.3保健用品的受試人群與妊娠或兒童有關，影響胎兒及子代發(fā)育，在長2.2.4保健用品在致突變試驗中，有一項或一項以上試驗為陽性者，需作第1十 2 十 3——十4—十—5—十十6 十7 十8±——9—±—±±±±±±±±±±±±±±±—±—a)動物：選用兩種性別的成年小鼠和/或大鼠b)受試物溶液的配制:常用蒸餾水或食用植物油為溶劑。若受試物是體積較小不溶于水或油的粉末劑，可用0.5%羧甲基纖維素鈉、10%阿拉伯膠、植物油制成混懸液。礦化容器類3d)環(huán)境條件：環(huán)境溫度控制在20℃~25℃之間。一般分為5個～6個劑量組。每組動物數(shù)10只，根據(jù)所選LD50計算方法而定。各正式試驗時將動物稱重，并隨機分組，然后用特制的灌胃針估計受試物毒性較低，一次給受試物容積太大，也可一日內多次給予（每次間隔4h～6h，24h內不超過3次，盡可能達到最大劑量，合并作為一次劑量計算）。給予受試物后，密切觀察動物反應情況，每天觀察一次，連續(xù)觀察7d，逐日記錄鼻眼標簽標識以及判定受試物經(jīng)消化道攝入后引起動物死亡可能性大小的依據(jù)。引用LD50值時一定驗動物的種屬、性別、染毒途徑、觀察期限等，評價應包括動物接觸受試物與動物異常表現(xiàn)(包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死效應與其它毒性作用)的發(fā)生率和嚴重程度之間的關系。根據(jù)43.1.2.2.3最大耐受量確定后，應推算出相當于臨床給受試物日劑量的倍5用5周齡～6周齡大鼠。試驗開始時，體重差異應在20%范圍內，雌雄各半，按性別、體重隨機區(qū)間分再加1%左右羧甲基纖維素鈉或10%左右阿拉伯膠助懸、植物油制成混懸液。臨用前搖勻，避免混設三個或三個以上的劑量組。高劑量組應有少數(shù)動物出現(xiàn)嚴重毒性反克/體重計算）。如因受試物體積過大，達不到這一要求時，最低不能低于臨床劑量的30倍，且必量一般為1ml～2ml/100gBW，各劑量組間應采用等容量a)死亡：死亡是動物最明顯的表現(xiàn)，但須注意鑒別確系受試物中毒死亡，而與自然死亡或死亡區(qū)別開來。發(fā)現(xiàn)死亡動物應立即進行尸檢，尋找死亡原因。最好在動物中毒臨終前活殺6d)毒性癥狀：給受試物后應每天注意有無毒性癥狀出現(xiàn)，專人負責觀察和記錄。物第一周內，毒性癥狀出現(xiàn)最多，必須嚴密觀察，及時發(fā)現(xiàn)。如一般行為，運動功能，呼吸的頻率和性質，有無腹瀉、腹痛、便血、眼、耳、鼻、口腔、外陰部有無異?；蚍置谖铩Ｈ吼B(yǎng)時應將發(fā)現(xiàn)中毒反應的動物及時取出單籠飼養(yǎng)，重點觀察。毒性癥狀有些只在給受試物后的一定階段出現(xiàn)，以后逐漸自行消失或減輕；有些則隨時間而進行性發(fā)展。因此必須列表逐日或逐周（逐個動物）記錄，以便看出癥狀發(fā)生、發(fā)展的過程，以及各種癥狀出現(xiàn)的先后次b)臟器稱重和計算臟器系數(shù)：心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、辜丸、卵巢和可能的靶器官稱重并計算臟器系數(shù)。急性毒性試驗未發(fā)現(xiàn)明顯毒性者，至少應測k=m1........................................(2)2m2c)病理組織學檢查：取材后立即放進10%福爾馬林中固定。并根據(jù)所含中藥的性、味、先作高劑量組和對照組的組織學檢查，其他劑量組可取材10%福爾馬林中固定保存，在高劑7的劑量-反應(效應)關系。評價受試物最小觀察到有害作用劑量和最大未觀察到有害作用劑量及毒性作一般分3個劑量組，其中一個為賦形劑對照組，兩個給受試物組，高劑量組劑量為低劑量的2倍。為了提高給受試物劑量可提高濃度或增加24h內給受試物次數(shù)。大鼠或豚鼠每組10只，家兔每組48級和標簽標識以及判定受試物經(jīng)皮膚吸收后引起動物死亡可能性大小的依據(jù)。引用LD50值實驗動物的種屬、性別、染毒途徑、觀察期限等，評價應包括動物接觸受試物與動物異常表現(xiàn)(包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死效應與其它毒性作用)的發(fā)生率和嚴重程度之間的關系。毒>2180選用成年健康家兔、豚鼠或大鼠。家兔體重2kg左右；豚鼠300g左右，大鼠200g～300g。受試9的劑量-反應(效應)關系。評價受試物最小觀察到有害作用劑量和最大未觀察到有害作用劑量及毒性作和雄性均可，但雌性動物應是未孕和未曾產(chǎn)仔的。實驗動物至少要用4只。實驗動物應單籠飼養(yǎng)，試驗前動物要在實驗動物房環(huán)境中至少適應3d時間。實驗動物及實驗動物房應符合國家相應規(guī)定。選用常受試物為強酸或強堿（pH值≤2或≥11.5可以不再進行皮膚刺激試驗。此外，若已知受試物有很強的經(jīng)皮吸收毒性，經(jīng)皮LD50小于200mg/kgb)取受試物約0.5mL（g）直接涂在皮膚上，然后用二層紗布（2.5cm×2.5cm）和一層硫酸紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定。另一側皮膚作對照。采用封閉試敷用時間為4h?？筛鶕?jù)人的實際使用和產(chǎn)品類型，延長或縮短敷用時間。對用后沖洗的產(chǎn)物可能引起嚴重刺激或腐蝕作用，可采取分段試驗，將三個涂有受試物的紗布塊同時或先后01234012348a)試驗前將實驗動物背部脊柱兩側皮膚的毛剪掉，去毛范圍各為3cm×3cm，涂抹面積2.5b)取受試物約0.5mL(g)涂抹在一側皮膚上，當受試物物無刺激性溶劑配制時，另一側涂溶劑K∑K∑kn2。取受試物0.2mL(或g)，涂在動物左側背部脫毛區(qū)皮膚上，以二層紗布和一層硫酸紙覆于末次給受試物致敏后14d～28d，將受試物約0.2mL（或g）涂于豚鼠背部右側脫毛區(qū)3.2.4.3.2如激發(fā)接觸所得結果仍不能確定，應于第一次激發(fā)后一周，給予第0123401237弱輕中強在受試者上背部或前臂屈側皮膚上，再用玻璃紙覆蓋，用無刺012312345b)受試物為強酸或強堿（pH≤2或≥11.5或已證實對皮膚有腐蝕性或強a)輕輕拉開家兔一側眼睛的下眼瞼，將受上、下眼瞼被動閉合1s，以防止受試物丟失。另一側眼睛不處理作自身對照。滴入受試物除了對角膜、虹膜、結膜進行觀察外，其它損害效應均應當記錄并報告。在每次檢查中均應012340皺褶明顯加深，充血、腫脹、角膜周圍有輕度充血，12012301234健康的大鼠、豚鼠或家兔，大鼠體重180g級和標簽標識以及判定受試物經(jīng)鼻吸收后引起動物死亡可能性大小的依據(jù)。引用LD50值時一驗動物的種屬、性別、染毒途徑、觀察期限等，評價應包括動物接觸受試物與動物異常表現(xiàn)(包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死效應與其它毒性作用)的發(fā)生率和嚴重程度之間的關系。毒性>2180健康的大鼠、豚鼠或家兔，大鼠體重180g將受試物直接滴鼻或噴霧吸入，受試物同黏膜至少接觸4h。然后于24h處死動物，取出鼻黏膜觀0123012310只，家兔每組4只。如果受試物毒性較小，不能求得LD50時，可求明實驗動物的種屬、性別、染毒途徑、觀察期限等，評價應包括動物接觸受試物與動物異常表現(xiàn)(包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死效應與其它毒性作用)的發(fā)生率和嚴重程度之間的關系。按3.3.4.2.1方法進行。受試物與陰道黏在受試物作用4h后，再經(jīng)1h處死，取出陰道組織，觀察有無充血、腫脹等現(xiàn)象；若有變化，必要一般每日一次，每次接觸4h，連續(xù)一周。0123>2.5，為重度刺激性。一般采用5mg/皿，最低劑量一般為1μg/皿或0.1μg/皿。但如應用誘導劑混合物處理后的哺乳動物肝臟微粒體酶（S9進行體外代謝活化試驗，即在加測試之前，應測定受試物對培養(yǎng)細胞ID50，以受試物作用24h為準。對于無細胞毒性的化至少設三個劑量組，并設陰性和陽性對照組。高劑量組以1/2LD50為準。如無），陰性對照組的倍量或經(jīng)統(tǒng)計有顯著性意義，并有劑量反應關系常用試驗動物為大鼠、小鼠和家兔。傳統(tǒng)致畸應選用健康性成熟(90d初次試驗可設一陽性對照組。每組至少12只孕鼠。常用陽性對照物有敵枯雙（0.5mg/kg～1.0mg/kg體重）、五氯酚鈉阿斯匹林(30mg/kg體重)及維組，并稱重和編號，在受孕的第7d～16d，每天經(jīng)口給予受試物（按0.5m1/100g～1.0m1/100g體重計）。受孕的0d、7d、12d、16d、20d稱體重，并計算給受試物的量。動物交配期室溫在20℃~大鼠于妊娠20d，小鼠第18d，兔第29d處死。大鼠用2g/l00mL硫噴妥鈉1mL/只～1.5mLa)經(jīng)口從舌與兩口角向枕部橫切(切面1),可觀察大腦、間腦、正腦、舌及顎裂；b)在眼前面作垂直縱切(切面2)、可見鼻部；c)從頭部垂直通過眼球中央作縱切(切面3),沿頭部最大橫位處穿過腦作切面(切面4),可觀d)沿小顎水平通過頸部作橫(切面5),可觀察氣管、食管和延腦或脊髓，以后自腹中線剪開i=k..................mi——致畸指數(shù)；k=m1........................................(5)2m2試驗無中毒死亡，其體重增長不低于對照組10%，機體一般狀況和實驗室檢查變化不至少應采用兩種動物進行試驗，常用小鼠和大鼠。各試驗組和對照組，每組大鼠24個月以上，小鼠18個月以上。此時對照組和低劑量組一般還應有50%以上動物存在，次。應盡量減少腫瘤以外的死亡率。各組的存活率不少于50%。試驗期末解剖或懷疑有血液疾患時，最3.4.4.1.3根據(jù)保健用品的不同性質，斑貼試驗時可選用保健用品原物、或將012343.4.4.4.3去除受試物斑試器后間隔30min30例受試者中出現(xiàn)2級皮膚不良反應的人數(shù)多于2例（除臭產(chǎn)品斑貼試驗2級皮膚不良反LD50計算方法預備試驗：通常采用10mg/kg，100mg/kg和1000mg/kg的劑量，各劑量使用2只～3只動物。根據(jù)正式試驗:按預試所確定大概的致死劑量范圍選用一組適宜的劑量系列，根據(jù)四個劑量當直線劃定后，由圖直線上50%死亡率(機率單位為5)的相應劑量對數(shù)值先求LD50的標準差S按式（A.1s=x2y2x2、x1相當于y2=6、y1=4（概率單位）時相應的X軸上的對數(shù)劑量。估計logLD50的標準誤按式(A.2)2s2log