DB32T 1848-2011 水稻轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)室安全操作規(guī)程

省地DB32江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布操作技術(shù)，保證轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用的生物與環(huán)境安全，特制定本標(biāo)1水稻轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)室安全操作規(guī)程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適將目的基因插入到經(jīng)過改造的T-DNA區(qū)——借助農(nóng)桿菌的感染實(shí)現(xiàn)外源基因向水稻細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與整合——通過細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù)，再生出轉(zhuǎn)2使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)時(shí)，應(yīng)仔細(xì)檢查使儀器的機(jī)械性能處于離心機(jī)放置的高度應(yīng)使工作人員能夠看到離心機(jī)內(nèi)部，以正確放置十字軸離心桶的裝載、平衡、密封和打開應(yīng)在生物安操作指南中應(yīng)給出液面距離心管管口需要留出的空間大使用固定角離心轉(zhuǎn)子時(shí)，離心管不能裝的過滿，5.1.2勻漿器、搖床、攪拌器和超聲處蓋子、杯子或瓶子應(yīng)保持正常狀態(tài)，無裂縫或變形。蓋子使用勻漿器、搖床和超聲處理器時(shí)，應(yīng)采用結(jié)實(shí)透明的塑3基因槍的操作過程須在無菌條件下進(jìn)行，基因槍所處的位置及超凈工作臺在使用前用紫外燈滅菌安裝可裂解膜于其托盤上，順時(shí)針安裝到加被轟擊樣品，根據(jù)參數(shù)距離放入轟體室合適的位置，關(guān)好轟擊將中間位置氣流控制開關(guān)置于“VENT”位通氣，等待真空表回零后取出樣品。4所有操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生濺出和從平板上挑取單菌落，接種到20mL附加相應(yīng)抗生素的細(xì)菌培養(yǎng)液體培養(yǎng)基（pH7.0）中，于超凈工作臺上，將菌液倒入無菌小培養(yǎng)皿中（可根據(jù)材料對菌液的敏感情況進(jìn)行不同倍數(shù)的稀將經(jīng)過共培養(yǎng)的外植體轉(zhuǎn)移到加有選擇壓（以Hph為標(biāo)記基因時(shí)一般使用潮霉素）的脫菌（附加250-500mg/L的羧芐青霉素或頭孢霉素，抑制農(nóng)桿菌生長）分化或愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在光照為2000-10000lx、25℃條件下選擇培養(yǎng)2-3周后，愈傷組織的轉(zhuǎn)化細(xì)胞將分化出抗性愈傷組織，將這些抗性材料轉(zhuǎn)入相應(yīng)的選化或剩余的其他愈傷組織利用專用垃圾袋保存，121℃滅不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域的清潔用具應(yīng)固定，不能交叉使注：10%次氯酸鈉和3%的雙氧水應(yīng)在使用前配